黃精-大棗藥對(duì)協(xié)同抗氧化及提高免疫活性的對(duì)比研究

褚福龍， 宋永佳， 刁立超， 賽 男， 張 健， 劉嘉慧， 張崇禧

（山東大學(xué) （威海） 海洋學(xué)院， 山東 威海 264209）

黃精-大棗藥對(duì)協(xié)同抗氧化及提高免疫活性的對(duì)比研究

褚福龍， 宋永佳， 刁立超， 賽 男， 張 健， 劉嘉慧， 張崇禧*

（山東大學(xué) （威海） 海洋學(xué)院， 山東 威海 264209）

目的 觀察不同配比黃精和大棗藥對(duì)協(xié)同抗氧化及提高免疫活性的作用，探究最佳藥對(duì)配比。方法 不同配比黃精和大棗藥對(duì) （3 ∶7， 4 ∶6， 5 ∶5， 6 ∶4， 7 ∶3） 及單藥測(cè)定羥基自由基考察藥對(duì)體外抗氧化的作用； 各藥液灌胃給小鼠， 每天 1 次， 連續(xù) 20 d， 處死小鼠， 測(cè)定 SOD和 MDA考察體內(nèi)抗氧化作用， 測(cè)定免疫器官指數(shù)考察對(duì)小鼠免疫器官的影響； 測(cè)定血清溶菌酶水平考察藥對(duì)對(duì)小鼠非特異性免疫的影響。 結(jié)果 體外實(shí)驗(yàn)表明黃精-大棗各配比藥對(duì)及單藥均能顯著清除羥基自由基； 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明黃精-大棗各配比藥對(duì)及單藥均能顯著提高 SOD活性、 降低 MDA水平、提高小鼠的免疫器官指數(shù)及血清溶菌酶水平。 結(jié)論 該藥對(duì)表現(xiàn)為協(xié)同作用， 其中以1∶1配比為最佳， 藥對(duì)抗氧化能力及提高非特異性免疫能力均比單藥效果好。

黃精；大棗；藥對(duì)；抗氧化；非特異性免疫

黃 精 為百合科黃精屬植物滇黃精 Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.、 黃精 Polygonatum sibiricum Red.或多花黃精 Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖， 大棗 Zizyphus jujuba Mill為鼠李科植物的成熟果實(shí)。 黃精具有益腎潤(rùn)肺、健脾益氣之功效，而大棗為益氣安神，緩和藥性的常用中藥，兩藥配伍可互補(bǔ)不足?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)兩藥均具有抗氧化活性，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，黃精、大棗配伍后抗氧化能力提高，免疫力增強(qiáng)。目前對(duì)于兩藥的化學(xué)成分和藥理作用研究比較多，但對(duì)于兩藥配伍后的抗氧化活性研究較少。為了探討黃精、大棗藥對(duì)的最佳配伍比例及其可能的抗氧化及提高免疫力機(jī)理，作者對(duì)黃精、大棗單煎和黃精-大棗藥對(duì)不同配伍比例合煎的抗氧化及提高免疫力作用進(jìn)行了比較。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)昆明種小鼠， 購(gòu)自山東綠葉制藥有限公司， 合格證號(hào) SCXK（魯） 2011 0007， 體質(zhì)量 18 ～22 g， 雌雄兼用。 環(huán)境溫度 （22 ±2） ℃， 在 12 h 光照周期的動(dòng)物室內(nèi)飼養(yǎng)，自由飲水、進(jìn)食，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于本實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)樣品 黃精、 大棗購(gòu)于山東省威海市燕喜堂藥店， 經(jīng)山東大學(xué)生藥學(xué)專家張崇禧教授鑒定。1～7號(hào)樣品依次為：黃精、大棗單味水煎濃縮液、藥對(duì)的不同配伍比例 （黃精∶大棗分別為 3 ∶7， 4 ∶6， 5 ∶5， 6 ∶4， 7 ∶3） 水煎濃縮液。 每種供試品均取 100 g生藥， 煎煮3 次， 依次加8 倍量水、 6 倍量水、 4 倍量水， 分別煎煮 3 h、 2 h 和 1 h，過(guò)濾后合并濾液并濃縮至 1 g/mL， 置 4 ℃ 冰箱保 存，備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 羥基自由基試劑盒、 超氧化物歧化酶（SOD） 試劑盒、 丙二醛 （MDA） 試劑盒、 溶菌酶 （LZM）試劑盒 （南京建成生物工程研究所）； 考馬司亮藍(lán) G250（上海試劑新分裝廠）； 牛血清白蛋白 （上?；瘜W(xué)試劑廠）；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 PL303 型分析天平 ［METTLER-TOLEDO儀器 （上海） 有限公司］， 722 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) （上海光譜儀器有限公司）。

2 方法

2.1 體外抗氧化活性測(cè)定［1-3］分別取各實(shí)驗(yàn)藥液 1 mL，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)各藥體外對(duì)抗羥基自由基能力，空白組加 1 mL蒸餾水， 陽(yáng)性對(duì)照組給予等體積 1 g/mL的維生素 C。

2.2 動(dòng)物分組與給藥方法［4-5］按隨機(jī)數(shù)字表法分為 9 組，即空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、黃精、大棗單味水煎液給藥組以及藥對(duì) （3 ∶7， 4 ∶6， 5 ∶5， 6 ∶4， 7 ∶3） 給藥組，每組10只。 各給藥組均采用灌胃給藥， 每日 1次， 連續(xù)給藥 20 d， 給藥體積 20mL/kg， 空白組給予等體積的蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照組給予等體積 1 g/mL的維生素 C。 末次給藥 24 h后，小鼠摘眼球取血后頸椎脫臼處死，測(cè)定相關(guān)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。

2.3 體內(nèi)抗氧化活性測(cè)定 末次給藥 24 h 后， 小鼠摘眼球取 血 ， 分離 血 清備用。 取 小 鼠 肝 臟 ， 200 mg組 織 加 9 倍的生理鹽 水 冰浴下制 成 10% 組織勻漿 液 ， 以3 000 r/min 離心 10min， 取上清液， 按照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定 SOD、 MDA活性。

2.4 免疫活性測(cè)定 小鼠處死前稱定體質(zhì)量， 處死后， 取脾臟、胸腺，分別稱定。根據(jù)以下公式計(jì)算相應(yīng)免疫器官指數(shù)： 脾臟指數(shù) =脾臟質(zhì)量 （m） /體質(zhì)量 （m）， 胸腺指數(shù)=胸腺質(zhì)量 （m） /體質(zhì)量 （m）。

未抗凝血液靜置后離心取血清，按照溶菌酶試劑盒說(shuō)明書測(cè)定血清溶菌酶水平。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SSPS 17.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析， 采用方差分析檢驗(yàn)， 數(shù)據(jù)均以 （） 表示， P＜0.05代表數(shù)據(jù)有顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)羥基自由基清除作用 與空白對(duì)照組比較， 各給藥組對(duì)羥基自由基的清除作用均表現(xiàn)顯著，各配比藥對(duì)對(duì)自由基的清除能力均大于兩單藥煎液， 藥對(duì)比為1∶1時(shí)清除作用最強(qiáng)，見(jiàn)表1。

表 1 各給藥組對(duì)羥基自由基的清除作用 （n=10，）

表 1 各給藥組對(duì)羥基自由基的清除作用 （n=10，）

注： 與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與黃精或大棗比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組別 ·OH清除率/% 43.62 ±1.20黃精 21.14 ±2.2*大棗 25.89 ±0.93*藥對(duì) （3 ∶7） 31.92 ±0.68**Δ藥對(duì) （4 ∶6） 38.71 ±1.01**Δ藥對(duì) （5 ∶5） 42.35 ±2.01***ΔΔ藥對(duì) （6 ∶4） 33.02 ±1.02**Δ藥對(duì) （7 ∶3） 27.50 ±2.88**Δ陽(yáng)性對(duì)照組

3.2 SOD和 MDA活性影響 各給藥組均可提高 SOD活性， 降低MDA水平。 與空白對(duì)照組相比， 各給藥組均顯著提高 SOD活性 （P＜0.05）， 其中以藥對(duì) 1 ∶1 配比為最顯著 （P＜0.001）； 各給藥組均可降低 MDA水平， 部分藥對(duì)效果顯著 （P＜0.05）， 以藥對(duì) 1 ∶1 配比為最顯著 （P＜0.01）， 見(jiàn)表 2。

表 2 各給藥組對(duì) SOD和 MDA活性影響 （n=10，）

表 2 各給藥組對(duì) SOD和 MDA活性影響 （n=10，）

注： 與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001； 與黃精或大棗比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組 別 SOD活性/（U·mg-1）MDA活性/（mmol·m L-1）空白對(duì)照組213.52 ±10.33 21.43 ±5.76陽(yáng)性對(duì)照組 342 ±11.42 13.76 ±2.32黃精 253.48 ±12.40* 19.74 ±4.59大棗 282.83 ±11.54* 18.16 ±4.28藥對(duì) （3 ∶7） 287.62 ±12.46**Δ 18.63 ±4.89藥對(duì) （4 ∶6） 310.16 ±10.49**Δ 16.74 ±3.90*藥對(duì) （5 ∶5） 337.96 ±11.45***ΔΔ 14.13 ±2.17**Δ藥對(duì) （6 ∶4） 295.46 ±12.12**Δ 17.28 ±3.12*藥對(duì) （7 ∶3） 283.94 ±10.42* 17.69 ±3.93*

3.3 對(duì)免疫器官指數(shù)的影響 與空白對(duì)照組比較， 大棗組及各配比藥對(duì)組對(duì)兩個(gè)免疫器官指數(shù)的增大作用顯著（P＜0.05）， 說(shuō)明大棗及各配比藥對(duì)能促進(jìn)正常小鼠免疫器官發(fā)育， 而黃精組對(duì)免疫器官的影響不顯著 （P＞0.05）， 見(jiàn)表 3。

表 3 各給藥組對(duì)免疫器官指數(shù)的影響 （n=10，）

表 3 各給藥組對(duì)免疫器官指數(shù)的影響 （n=10，）

注： 與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與黃精或大棗比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組 別 脾臟指數(shù) （ ×10-3） 胸腺指數(shù) （ ×10-3）4.5 ±0.4 3.7 ±0.3陽(yáng)性對(duì)照組 5.9 ±0.2 4.6 ±0.1黃精 4.7 ±0.3 3.8 ±0.1大棗 4.9 ±0.2* 4.0 ±0.2*藥對(duì) （3 ∶7） 5.2 ±0.2* 4.3 ±0.2*藥對(duì) （4 ∶6） 5.3 ±0.3* 4.5 ±0.1**Δ藥對(duì) （5 ∶5） 5.6 ±0.1**Δ 4.6 ±0.2**Δ藥對(duì) （6 ∶4） 5.1 ±0.1* 4.3 ±0.1*藥對(duì) （7 ∶3） 4.9 ±0.2* 4.2 ±0.2空白對(duì)照組*

3.4 對(duì)血清溶菌酶的影響 各藥對(duì)組中血清溶菌酶與空白對(duì)照組比較均有顯著性差異 （P＜0.05）。 各藥對(duì)組均可顯著提高正常小鼠血液溶菌酶活性， 其中配比為1∶1藥對(duì)的效果極顯著 （P＜0.01）， 見(jiàn)表 4。

表 4 各給藥組對(duì)血清溶菌酶的影響 （n=10，）

表 4 各給藥組對(duì)血清溶菌酶的影響 （n=10，）

注： 與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與黃精或大棗比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組 別 溶菌酶/（ μg·m L-1）8.12 ±1.66陽(yáng)性對(duì)照組 10.97 ±1.35黃精 10.03 ±1.24大棗 10.12 ±1.68藥對(duì) （3： 7） 10.47 ±1.32*藥對(duì) （4 ∶6） 10.66 ±1.70*藥對(duì) （5 ∶5） 10.82 ±1.31**Δ藥對(duì) （6 ∶4） 10.62 ±1.47*藥對(duì) （7 ∶3） 10.42 ±1.73空白對(duì)照組*

4 討論

由于黃精與大棗藥對(duì)在中藥復(fù)方中的配伍比例不一，本實(shí)驗(yàn)對(duì)黃精、大棗單用及精棗藥對(duì)合用不同配伍比例水煎劑的抗氧化和提高免疫力作用進(jìn)行了研究，結(jié)果證明黃精-大棗藥對(duì) 1 ∶1 的配伍比例的抗氧化、 提高免疫力作用最強(qiáng)。

生物機(jī)體內(nèi)的超氧化物歧化酶 （SOD） 具有顯著的清除自由基作用，隨著年齡的逐漸增長(zhǎng)，其活性開(kāi)始降低而誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化， 脂質(zhì)過(guò)氧化的最終代謝產(chǎn)物 MDA增多將誘導(dǎo)細(xì)胞整合性能下降［6-11］。 SOD和 MDA是檢測(cè)提高體內(nèi)抗氧化能力最常用的指標(biāo)。同時(shí)，自由基引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化，能夠誘導(dǎo)核酸代謝錯(cuò)誤，酶活性降低等，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生較嚴(yán)重的損傷作用［12］。 本實(shí)驗(yàn)研究表明黃精和大棗藥對(duì)可顯著清除羥基自由基， 提高 SOD活性和降低 MDA水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明精棗藥對(duì)抗氧化的機(jī)制除了能直接清除自由基還可能和提高 SOD活性有關(guān)。

脾臟、胸腺是哺乳動(dòng)物最主要的中樞和外周免疫器官，小鼠的免疫器官指數(shù)是其免疫器官發(fā)育和反映免疫應(yīng)答強(qiáng)弱的重要指標(biāo)［13］； 溶菌酶是固有免疫分子， 它能水解細(xì)菌細(xì)胞壁的肽聚糖使細(xì)菌崩解死亡，是機(jī)體非常重要的非特異性防御因子。本實(shí)驗(yàn)表明黃精和大棗藥對(duì)可提高小鼠的免疫器官指數(shù)及血清溶菌酶水平，可以顯著提高非特異性免疫［14-16］。

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R285.5

： B

： 1001-1528（2014）03-0614-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.038

2013-02-14

山東大學(xué)科技創(chuàng)新項(xiàng)目 （A12018）

褚福龍 （1992—） ， 男， 本科在讀。 Tel： 18769198364， E-mail： 827901972@qq.com

*通信作者： 張崇禧 （1954—）， 男， 博士， 教授， 研究生導(dǎo)師， 執(zhí)業(yè)藥師， 研究方向： 中藥現(xiàn)代化及藥理。 Tel：（0631）5675313， E-mail： zcx_11@126.com