山楂切片工藝研究

石典花， 戴衍朋， 孫立立*，曹玉華， 王建剛

（1.山東省中醫(yī)藥研究院， 山東 濟(jì)南 250014； 2.山東博康中藥飲片有限公司， 山東 青州 2625000）

山楂切片工藝研究

石典花1， 戴衍朋1， 孫立立1*，曹玉華2， 王建剛2

（1.山東省中醫(yī)藥研究院， 山東 濟(jì)南 250014； 2.山東博康中藥飲片有限公司， 山東 青州 2625000）

目的 優(yōu)選山楂最佳切片工藝。方法 以內(nèi)在質(zhì)量 （有機(jī)酸量、金絲桃苷量、水浸出物） 和傳統(tǒng)外觀質(zhì)量為指標(biāo)， 采用 L9（34） 正交試驗(yàn)， 對(duì)切片厚度、 干燥溫度、 干燥時(shí)間三因素進(jìn)行考察。 結(jié)果 優(yōu)選的最佳切制工藝為：取鮮山楂， 切成厚度為 4mm的片， 置 60 ℃烘箱， 干燥 4 h， 取出， 晾涼。 結(jié)論 優(yōu)選得到的山楂切片工藝可用于規(guī)范山楂的切片生產(chǎn)。

山楂；切片；正交試驗(yàn)；有機(jī)酸；金絲桃苷；水浸出物

山 楂 為 薔 薇 科 植 物 山 里 紅 Crataegus pinnatifida Bge. var.major N.E.Br.或山楂 Crataegus pinnatifida Bge.的干燥成熟果實(shí)。山楂具有消食健胃，行氣散瘀，化濁降脂的功效，用于肉食積滯，胃脘脹滿，瀉痢腹痛，瘀血經(jīng)閉，產(chǎn)后瘀阻， 心腹刺痛， 胸痹心痛， 疝氣疼痛， 高脂血癥［1］。山楂是藥食兩用品［2-3］， 市場(chǎng)需求量較大， 山東地區(qū)為山楂主要產(chǎn)區(qū)，通過(guò)實(shí)地調(diào)查發(fā)現(xiàn)，山楂采收后除部分用于食用外，大部分由當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶手工切片，這個(gè)過(guò)程存在切片厚度參差不齊，晾曬程度受天氣影響等問(wèn)題，從而導(dǎo)致山楂片顏色變黃，甚至發(fā)霉，因此種植戶為追求山楂片色澤好看，在山楂切制后用硫磺進(jìn)行熏制，所以目前流通到市場(chǎng)上的山楂片多為硫磺熏制品，硫磺熏制品中殘留的硫化物對(duì)人們的健康造成損害。

《中國(guó)藥典》 2010 年版一部收載山楂的采收加工方法僅為 “秋季果實(shí)成熟時(shí)采收， 切片， 干燥”， 無(wú)具體工藝數(shù)據(jù)參數(shù)。因此本研究采用正交試驗(yàn)法，以內(nèi)在質(zhì)量 （有機(jī)酸量、金絲桃苷量、水浸出物）和傳統(tǒng)外觀質(zhì)量為指標(biāo)，對(duì)影響山楂片質(zhì)量的切片厚度，干燥溫度，干燥時(shí)間進(jìn)行研究，優(yōu)選出山楂最佳切片工藝，研究結(jié)果可用于規(guī)范山楂片的生產(chǎn)。

1 儀器與試藥

1.1 樣品 山楂 （山里紅） 果實(shí)， 2012 年 10 月采于山東省青州市王墳鎮(zhèn)陳家泉村，經(jīng)我院中藥資源室林慧彬研究員鑒定為薔薇科植 物 山 里紅 Crataegus pinnatifida Bge.var. major N.E.Br.的成熟果實(shí)。

1.2 儀器 Waters2695 型高效液相色譜儀， 2966 二極管陣列檢 測(cè) 器 （ 美 國(guó) Waters公 司）。 瑞 士 METTLER XS205 DU10-5電子天平。 B3200S-T型超聲波清洗器 （上海必能信超聲有限公司）， MILLI-Q超純水純化系統(tǒng)。

1.3 試藥 金絲桃苷對(duì)照品 （自制， 歸一化法測(cè)定純度為99.0%）； 乙腈為色譜純 （迪馬公司）， 其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 山楂切片工藝的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 影響山楂切片工藝的主要因素有切片厚度、干燥溫度和干燥時(shí)間，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇以上三個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)立三個(gè)水平 （因素水平表見(jiàn)表1）， 在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上， 以傳統(tǒng)外觀性狀、 有機(jī)酸含量、金絲桃苷含量、水浸出物的含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以綜合評(píng)分的方法， 進(jìn)行三因素、 三水平的 L9（34） 正交試驗(yàn)，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析和方差分析，優(yōu)選出規(guī)范的山楂切片工藝。

表1 因素水平

2.2 山楂片質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇依據(jù)和評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 試驗(yàn)中采用以傳統(tǒng)外觀性狀和內(nèi)在質(zhì)量 （有機(jī)酸含量、金絲桃苷含量、水浸出物）作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，為全面客觀反映各個(gè)因素之間的關(guān)系及對(duì)山楂片質(zhì)量的影響，采用綜合評(píng)分法。

2.2.1 傳統(tǒng)外觀性狀評(píng)分依據(jù)和標(biāo)準(zhǔn) 傳統(tǒng)外觀性狀評(píng)價(jià)是我國(guó)中醫(yī)藥歷史上沿用和發(fā)展起來(lái)的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，是傳統(tǒng)評(píng)價(jià)飲片質(zhì)量?jī)?yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)，也是目前單一化學(xué)成分和化學(xué)部位不能替代和說(shuō)明的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，因此選其作為正交試驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。山楂片外觀性狀評(píng)價(jià)從片型和色澤兩方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，其中以片型完整、不卷曲，色澤鮮白，不泛黃者為佳。

2.2.2 內(nèi)在質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇 山楂果實(shí)內(nèi)主要含有有機(jī)酸和黃酮類化合物［4-7］。

2.2.2.1 有機(jī)酸 有機(jī)酸為山楂健胃消食作用的主要有效成分，主要包括枸櫞酸、蘋(píng)果酸、亞麻酸、棕櫚酸、丁烯二酸和亞油酸等［8］。 因此選擇有機(jī)酸作為指標(biāo)之一， 參考照2010 年版 《中國(guó)藥典》 一部山楂項(xiàng)下有機(jī)酸測(cè)定方法進(jìn)行［1］ 。

2.2.2.2 金絲桃苷 金絲桃苷是山楂中主要黃酮類成分［9］， 具有抗心肌缺血損傷、 抗心肌脂質(zhì)過(guò)氧化、 降血脂等作用， 常被用作山楂質(zhì)量控制 指標(biāo)性成分［10-11］， 因此選擇金絲桃苷作為指標(biāo)之一。 采用 HPLC法測(cè)定山楂片中金絲桃苷的量［12］。

色譜條 件 Phenomenon HyperClone C18柱 （ 4.6 mm × 250 mm， 5 μm）； 流動(dòng)相 A為乙腈， B相為 0.3%磷酸水，梯度洗脫 （0 ～60min， 10% ～27%A； 60 ～80 min， 27% ～50%A）； 體積流量 1 mL/min； 波長(zhǎng) 355 nm； 柱溫室溫；進(jìn)樣量 10 μL。 理論塔板數(shù)按金絲桃苷峰計(jì)算不低于3 000。

對(duì)照品溶液的制備 取金絲桃苷對(duì)照品適量，精密稱定， 加甲醇制成 每 毫升含金 絲 桃 苷 0.050 mg的 溶 液，即得。

供試品溶液的制備 取山楂粉末 （過(guò)四號(hào)篩） 2.0 g，精密稱定， 置具塞三角瓶中， 精密加入甲醇 50 mL， 稱定質(zhì)量， 冷浸 2 h， 超聲處理 1 h， 放冷， 再稱定質(zhì)量， 用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量， 搖勻， 濾過(guò)， 取續(xù)濾液 25 mL， 蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓?轉(zhuǎn)移至 5mL量瓶中， 加甲醇稀釋至刻度， 搖勻， 過(guò) 0.45 μm微孔濾膜， 即得。

測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL， 注入液相色譜儀， 測(cè)定， 即得。

水浸出物 山楂片臨床用藥多以水煎和水泡代茶飲為主， 所以選擇山楂片的水浸出物作為指標(biāo)之一。 照 2010 年版 《中國(guó)藥典》 一部熱浸法 （附錄Ⅹ A） 規(guī)定項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定。

2.3 正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選山楂最佳切片工藝

2.3.1 樣品的制備 取山楂 9 份， 大小分檔， 每份均勻取大、 中、 小山楂各 10 枚， 按 L9（34） 正交表安排的 9 種工藝，分別進(jìn)行手工切制和干燥。對(duì)得到的山楂片進(jìn)行傳統(tǒng)外觀性狀質(zhì)量評(píng)分， 并對(duì)內(nèi)在質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo) （有機(jī)酸、 金絲桃苷及水浸出物）進(jìn)行測(cè)定。

2.3.2 外觀性狀打分及內(nèi)在質(zhì)量指標(biāo)的測(cè)定

2.3.2.1 傳統(tǒng)質(zhì)量 （外觀性狀） 評(píng)分 根據(jù)山楂片的片型和色澤進(jìn)行打分， 片型平整， 厚度適中得分為 100 分， 片型卷曲， 厚度偏薄得分為 80 分， 片型平整， 厚度偏厚得分為90 分； 山楂片色澤鮮白為 100 分， 色澤稍差者按實(shí)際情況給予相應(yīng)得分。 不同條件下制備的1 ～9號(hào)樣品的得分見(jiàn)表2。

2.3.2.2 內(nèi)在質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)有機(jī)酸量、 金絲桃苷量、 水浸出物測(cè)定 照上述方法分別進(jìn)行測(cè)定， 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 外觀性狀評(píng)分及有機(jī)酸、 金絲桃苷、 水浸出物測(cè)定結(jié)果

2.4 結(jié)果分析

2.4.1 綜合質(zhì)量評(píng)分 權(quán)衡傳統(tǒng)外觀性狀、 有機(jī)酸量、 金絲桃苷量和水浸出物對(duì)山楂片質(zhì)量的影響，確定外觀性狀的加權(quán)系數(shù)定為 0.4， 有機(jī)酸量、 金絲桃苷量和水浸出物加權(quán)系數(shù)均定為 0.2， 采用綜合評(píng)分法， 綜合評(píng)分按以下公式計(jì)算：

綜合質(zhì)量評(píng)分 =外觀性狀得分 （片型得分 ×0.5+色澤得分 ×0.5） ×0.4+有機(jī)酸量得分 ×0.2+金絲桃苷量得分 ×0.2+水浸出物得分 ×0.2

綜合評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表 3。 方差分析見(jiàn)表 4。

表 3 L9（34） 正交試驗(yàn)結(jié)果及直觀分析

表4 方差分析

表5 山楂切片工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.4.2 直觀與方差分析

2.4.2.1 直觀分析 由 R可以看出， 對(duì) A、 B、 C三因素有 RA＞RB＞RC， 因此， A因素對(duì)山楂片質(zhì)量的影響最大，B因素次之 ，C因 素 影 響 較 小， 對(duì)A因 素 有＞＞，對(duì)B因素有＞＞， 對(duì) C因素有＞＞。 因此最佳組 合 為 A2B3C1。

2.4.2.2 方差分析 A因素和 B因素均為影響山楂切片工藝的顯著性因素，C因素?zé)o顯著性影響。

2.4.2.3 山楂最佳切片工藝技術(shù)參數(shù)的確定 根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果 ， 山楂最 佳 切片 的 工 藝 參 數(shù) 應(yīng) 為 A2B3C1， 即 取 山 楂切成 厚 度 為 4 mm的 片， 置 60 ℃ 烘 箱 ， 干 燥 4 h， 取出，晾涼。

2.5 工藝驗(yàn)證 為驗(yàn)證上述優(yōu)選最佳山楂切片工藝的科學(xué)性、穩(wěn)定性和可重復(fù)性，進(jìn)行了3批驗(yàn)證試驗(yàn)，進(jìn)一步考察正交試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

取山楂90 枚， 大小分檔分為3 份， 每份30 枚， 分別切成厚度 為 4 mm片 后， 置 60 ℃ 烘 箱 ， 干 燥 4 h， 取 出 ， 晾涼。觀察山楂片的外觀性狀，并對(duì)有機(jī)酸、金絲桃苷和水浸出物進(jìn)行測(cè)定， 結(jié)果見(jiàn)表5。

3批驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，山楂片片型色澤俱佳，有機(jī)酸量在 9.30% ～9.36%之 間， 金 絲 桃 苷 量 在0.221 8 ～0.223 7 mg/g之間， 水浸出物在 69.73% ～69.85%之間， 說(shuō)明正交試驗(yàn)確定的工藝合理，可得到優(yōu)質(zhì)的山楂飲片。

3 小結(jié)與討論

本研究采用 L9（34） 正交試驗(yàn)法對(duì)山楂的切片工藝進(jìn)行優(yōu)選，以傳統(tǒng)外觀性狀要求和內(nèi)在質(zhì)量要求為指標(biāo)，采用綜合質(zhì)量評(píng)分法，把山楂飲片的傳統(tǒng)質(zhì)量與內(nèi)部質(zhì)量?jī)蓚€(gè)方面結(jié)合在一起，可更為客觀地反映各個(gè)因素水平對(duì)山楂片質(zhì)量的影響。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同切片厚度、干燥溫度和干燥時(shí)間對(duì)山楂片的外在質(zhì)量和內(nèi)在質(zhì)量均有不同程度的影響，其中切片厚度和干燥溫度對(duì)山楂片質(zhì)量有顯著性影響，優(yōu)選得到山楂最佳切片工藝為：山楂切成厚度為4 mm的片，置60 ℃烘箱， 干燥 4 h， 取出， 晾涼。 3 批驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，確定的工藝條件操作簡(jiǎn)便，可用于規(guī)范山楂的切片生產(chǎn)，且生產(chǎn)出的山楂片片型色澤俱佳，可有效保證山楂臨床用藥和食用安全。

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R283

： B

： 1001-1528（2014）03-0657-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.052

2013-04-22

國(guó)家中醫(yī)藥管理局全國(guó)名老中醫(yī)藥專家馮寶麟傳承工作室 （2010）； “國(guó)家重大新藥創(chuàng)制” “中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和信息化體系建設(shè)平臺(tái)—中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究平臺(tái)” （2009ZX09308-004）； 山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目 （2011-170； 2013-132）

石典花 （1981—）， 女， 助理研究員， 主要從事中藥炮制研究。

*通信作者： 孫立立 （1953—）， 女， 研究員， 主要從事中藥炮制研究。 Tel： （0531） 82949829