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    基因芯片技術(shù)在德州市女性宮頸HPV感染中的應(yīng)用研究

    2014-04-08 11:39:20晶,劉
    中國腫瘤外科雜志 2014年5期
    關(guān)鍵詞:危型亞型感染率

    王 晶,劉 梅

    人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV) 是雙鏈閉環(huán)小DNA病毒,可侵襲皮膚和黏膜等組織并引起人類多種良、惡性病變。根據(jù)HPV是否有致癌作用,可分為高危型(high risk,HR)HPV和低危型(low risk,LR)HPV?,F(xiàn)已證實(shí)HR-HPV的HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-68、HPV-73、HPV-82主要與宮頸癌的發(fā)生有關(guān);LR-HPV的HPV-6、HPV-11、HPV-41、HPV-42、HPV-43、HPV-44主要引起生殖器和肛周的濕疣類病變以及宮頸上皮內(nèi)瘤變[1]。據(jù)報(bào)道全世界每年約有50萬人罹患宮頸癌,造成30萬人死亡,我國每年新發(fā)病例約占10萬,約占世界宮頸癌新發(fā)病例的1/4[2]。由于HPV的致病性與型別密切相關(guān),基因分型檢測(cè)對(duì)宮頸癌的早期篩查、防治、預(yù)后判斷等具有重要的臨床意義。為此,筆者收集德州市人民醫(yī)院3 006例宮頸分泌物標(biāo)本進(jìn)行HPV基因分型檢測(cè),以了解德州地區(qū)HPV的感染率及分布情況,為宮頸癌的防治提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 研究對(duì)象 2008年10月至2013年7月期間在德州市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科門診就診的患者或健康體檢者,行宮頸篩查。年齡16~65歲,來自德州13個(gè)縣市區(qū)。

    1.2 標(biāo)本采集 采集標(biāo)本前3天無陰道灌洗、性生活及婦科檢查。由臨床??漆t(yī)師進(jìn)行采取,暴露宮頸,用棉拭子擦去宮頸口多余分泌物,將子宮頸采樣刷插入子宮頸管內(nèi),輕緩施力,令刷毛均勻散布于子宮頸上,以拇指與食指抓緊刷柄并順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)5~6圈,將采樣刷頭分開并推入裝有保存液的小瓶中,將采樣的小瓶蓋扭緊,注明標(biāo)本編號(hào)、患者姓名、送檢醫(yī)師及日期等資料,將裝有所采樣本的小瓶連同檢驗(yàn)申請(qǐng)單送至檢驗(yàn)科。

    1.3 結(jié)果判斷 肉眼觀察呈藍(lán)紫色圓點(diǎn)為陽性,根據(jù)芯片上HPV亞型相應(yīng)的分布點(diǎn)判斷HPV亞型。每一張芯片上有PCR反應(yīng)質(zhì)控點(diǎn)和雜交顯色點(diǎn)各1個(gè)。質(zhì)控點(diǎn)不顯色提示試劑失效或操作有誤,需重新試驗(yàn);出現(xiàn)多個(gè)陽性點(diǎn)為多重感染。

    1.4 數(shù)據(jù)分析 所有數(shù)據(jù)錄入計(jì)算機(jī),應(yīng)用SPSS10.0 軟件列連表資料分析。

    2 結(jié)果

    2.1 HPV感染率 在3 006份宮頸標(biāo)本中HPV的檢出率為17.80%(535/3 006),其中HR-HPV的檢出率為14.77%(444/3 006),LR-HPV檢出率為3.03%(91/3 006)。共檢出16個(gè)HR-HPV亞型,按檢出率由高到低排列依次為HPV-16 (3.23%,97/3 006)、HPV-52(1.33%,40/3 006)、HPV-68(1.26%,38/3 006)、HPV-31(1.10%,33/3 006)、HPV-53(0.96%,29/3 006)、HPV-33(0.86%,26/3 006)、HPV-18(0.80%,24/3 006)、HPV-CP8304(0.77%,23/3 006)、HPV-66(0.73%,22/3 006)、HPV-39(0.40%,12/3 006)、HPV-58(0.37%,11/3 006)、HPV-59(0.37%,11/3 006)、HPV-56(0.30%,9/3 006)、HPV-45(0.27%, 8/3 006)、HPV-51(0.23%,7/3 006)、HPV-35(0.13%,4/3 006)??梢奌PV-16、HPV-52和HPV-68檢出率居前3位,為高危型優(yōu)勢(shì)亞型。LR-HPV各型檢出率由高到低排列依次為:HPV-6(1.50%,45/3 006)、HPV-11(1.13%,34/3 006)、HPV-42(0.30%,9/3 006)、HPV-44(0.10%,3/3 006)、HPV-43(未檢出)。

    2.2 HPV多重感染率 535例HPV陽性標(biāo)本有79例多重感染,占14.77%。多重感染中,包括二重感染60例(11.21%)、三重感染14例(2.61%)、四重感染5例(0.93%)。3個(gè)高危型優(yōu)勢(shì)亞型(即HPV-16、HPV-52和HPV-68)乃是多重感染的主要組成。

    2.3 HPV感染的年齡分布 HPV陽性率在56~65歲組達(dá)到高峰,為38.40%,其余年齡段的感染率為16.20%~19.20%。詳見表1。

    表1 不同年齡組的 HPV感染率

    3 討論

    宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一,其發(fā)病率僅次于乳腺癌,宮頸癌發(fā)生與HR-HPV的感染關(guān)系密切。不同HR-HPV亞型致癌作用不同,同一型別HR-HPV的持續(xù)性感染才有可能引起宮頸上皮細(xì)胞的非典型增生,進(jìn)而發(fā)展為原位癌[3]。HPV分型檢測(cè)能夠明確感染者的HPV亞型及感染類型(單一感染或多重感染),同時(shí)根據(jù)感染的HPV亞型預(yù)測(cè)患者的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),以制定正確合理且有效的治療方案和隨訪時(shí)間[4]。除此之外,HPV分型檢測(cè)與病理檢查結(jié)果相結(jié)合,有助于發(fā)現(xiàn)低度病變的宮頸癌患者,有效降低漏檢率。

    本研究顯示,德州地區(qū)女性HPV總陽性率17.80%,與深圳地區(qū)14.50%相近[5],高于呼和浩特地區(qū)的13.04%[6],低于浙江省臺(tái)州地區(qū)的35.08%[7]。除HPV-43型外,各種基因型均有檢測(cè),在高危亞型中HPV-16檢出率最高,占陽性總感染率的18.13%(97/535),其后依次是HPV-52、HPV-68。高危優(yōu)勢(shì)型不同于葉德華[8]報(bào)道的成都市龍泉驛區(qū)女性宮頸HPV感染的常見型別:HPV-52、HPV-58、HPV-16,表明HPV感染基因型有其明顯的人群及地域區(qū)別。不同亞型HPV感染對(duì)宮頸細(xì)胞惡性病變的發(fā)生、發(fā)展有不同的影響,所以對(duì)亞型的統(tǒng)計(jì)是必要的。

    目前,對(duì)HPV感染與年齡的相關(guān)性有不同觀點(diǎn),羅慧琴等[9]報(bào)道在16~24歲年齡段女性HPV感染率最高為57.43%,認(rèn)為與該年齡段性生活頻繁或性伴侶多有關(guān),其次是55歲以上年齡段女性為51.56%,出現(xiàn)“兩頭高”的現(xiàn)象。但本研究中HPV陽性率則在56~65歲組達(dá)到高峰,為38.40%,其余年齡段的感染率穩(wěn)定在16%~19%之間,這與國內(nèi)吳心音等[10]的報(bào)道一致,提示絕經(jīng)期女性由于卵巢功能下降,雌激素水平降低,機(jī)體免疫力及清除HPV感染的能力下降,易導(dǎo)致HPV持續(xù)性感染,應(yīng)是重點(diǎn)篩查的人群。

    本研究還顯示,多重感染占總感染的14.77%,以二重感染最多見,占多重感染的75.95%。無論單一感染還是多重感染,HPV-16、HPV-52、HPV-68均為優(yōu)勢(shì)亞型。Fife等[11]認(rèn)為多重感染者發(fā)展為癌的危險(xiǎn)性較單一感染者大。由于HR-HPV亞型及感染類型對(duì)宮頸癌發(fā)生的不同影響,以及

    HR-HPV攜帶的地域和人群等差異,混合HR-HPV檢測(cè)不能滿足臨床的需要,應(yīng)盡快在國內(nèi)推廣HR-HPV亞型具體分型,以提高相關(guān)篩查和診斷的特異性和臨床提示作用。

    宮頸篩查已被證明是降低宮頸癌發(fā)病率的有效途徑,HPV基因分型檢測(cè)能夠發(fā)現(xiàn)致癌誘因,使早期發(fā)現(xiàn)極大地提高,并使篩查更具針對(duì)性,是宮頸篩查的劃時(shí)代進(jìn)步。本研究通過導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)檢測(cè)德州地區(qū)HPV常見型,獲得了HPV感染率、優(yōu)勢(shì)亞型分布、感染類型以及年齡依賴的HPV攜帶等第一手分子流行病學(xué)資料,為HPV檢測(cè)項(xiàng)目的選擇提供了依據(jù),也可以為進(jìn)一步HPV疫苗的臨床應(yīng)用和宮頸癌防治策略的制定提供參考。

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