口腔鱗癌患者Ezrin蛋白與CD44v6的表達(dá)及臨床意義＊

徐 清 周靜萍 柳 海

（皖南醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院，安徽蕪湖241002）

口腔鱗癌居口腔惡性腫瘤之首，病死率高，易轉(zhuǎn)移導(dǎo)致患者死亡。Ezrin蛋白是腫瘤轉(zhuǎn)移研究中新發(fā)現(xiàn)的一個相關(guān)因子，可調(diào)控細(xì)胞生長、抗細(xì)胞凋亡、促細(xì)胞增殖，激活后參與腫瘤細(xì)胞的運動、遷移和黏附，在腫瘤生發(fā)和轉(zhuǎn)移中扮演重要角色[1]。CD44v6是細(xì)胞表面黏附分子CD44的變異體，參與細(xì)胞特異性粘連，可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和運動能力，促進(jìn)腫瘤擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。本文采用SP法分別檢測口腔鱗癌中Ezrin蛋白和CD44v6的表達(dá)，探討兩者的相關(guān)性及臨床意義。

1 資料和方法

1.1 標(biāo)本

口腔鱗癌39例，女17例，男22例，≥60歲23例，＜60歲16例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例，病理分級Ⅰ級17例、Ⅱ級14例、Ⅲ級8例。另取來自非腫瘤患者手術(shù)邊緣28例正?？谇火つ?biāo)本切片。所用病例切片隨機(jī)取自附屬醫(yī)院近5年的口腔鱗癌手術(shù)切除標(biāo)本。

1.2 試劑

S－P超敏試劑盒（鼠／兔）、DAB顯色劑、鼠抗人Ezrin蛋白免疫組化單克隆抗體，均購自福建邁新生物技術(shù)開發(fā)公司；兔抗人CD44v6多克隆抗體，購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 檢測指標(biāo)

運用免疫組織化學(xué)法對所有切片染色，每組染色設(shè)陽、陰性對照，綜合陽性細(xì)胞率和染色強(qiáng)度的判定，檢測Ezrin蛋白和CD44v6的表達(dá)。

1.4 結(jié)果判定

染色結(jié)果經(jīng)2位病理科醫(yī)師行雙盲閱片。每張切片按Kim等[2]半定量法對陽性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合評分。陽性細(xì)胞數(shù)評分：0分（無陽性細(xì)胞）；1分（陽性細(xì)胞數(shù)≤1／3）；2分（陽性細(xì)胞數(shù)占1／3～2／3）；3分（陽性細(xì)胞數(shù)≥2／3）。染色強(qiáng)度評分：0分（不著色）、1分（淺黃色）、2分（棕黃色）、3分（棕褐色）；將陽性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度的評數(shù)相加算出總分，總分≥2分為陽性，分值2～4分是低表達(dá)（＋），分值5～6分是高表達(dá)（?）。低表達(dá)（＋）、高表達(dá)（?）均列入陽性組。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 Ezrin蛋白和CD44v6分別在口腔鱗癌和正常口腔黏膜組織中的表達(dá)

Ezrin蛋白的陽性著色呈淺黃或棕黃色顆粒，見于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜內(nèi)，在口腔鱗癌中的表達(dá)水平顯著高于正?？谇火つそM（P＜0.01）；CD44v6的陽性著色呈淺黃或棕黃色顆粒，見于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，在口腔鱗癌中的表達(dá)水平高于正?？谇火つそM（P＜0.05）。見表1。

表1 Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鱗癌和正?？谇火つそM織中的表達(dá)

2.2 口腔鱗癌中Ezrin蛋白、CD44v6的表達(dá)與臨床參數(shù)之間的關(guān)系

口腔鱗癌中Ezrin蛋白的表達(dá)：與病理分級有關(guān)，病理分級越高表達(dá)水平就越高（P＜0.01）；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，Ezrin蛋白表達(dá)水平在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.01）；與患者的年齡、性別無關(guān)（P＜0.05）。口腔鱗癌中CD44v6的表達(dá)：與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05）；與患者的年齡、性別、病理分級均無關(guān)（P＞0.05）。見表2、圖1－4。

采用Fisher確切概率法。

表2 口腔鱗癌中Ezrin蛋白、CD44v6的表達(dá)與臨床參數(shù)之間的關(guān)系（n，%）

圖1 Ezrin在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移口腔鱗癌（SP×400）

圖2 Ezrin在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移口腔鱗癌中的表達(dá)SP×400中的表達(dá)（SP×400）

圖3 CD44V6在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移口腔鱗癌（SP×400）

圖4 CD44V6在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移口腔鱗癌中的表達(dá)SP×400中的表達(dá)（SP×400）

2.3 Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鱗癌中表達(dá)的相關(guān)性分析

經(jīng)過Pearson相關(guān)分析，Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鱗癌中的表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0.626，P＜0.01）。見表3。

表3 Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鱗癌中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

口腔鱗癌易轉(zhuǎn)移、預(yù)后差，患者5a生存率約50%，提高生存率、研究口腔鱗癌的轉(zhuǎn)移是如今臨床研究的關(guān)鍵[3]。

Ezrin蛋白是膜－細(xì)胞骨架連接蛋白，其在腫瘤細(xì)胞中發(fā)生亞細(xì)胞定位改變，之后產(chǎn)生信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞黏附等功能改變，引起腫瘤轉(zhuǎn)移。近年在膽管癌[4]、食管鱗癌[5]等研究中發(fā)現(xiàn)有Ezrin蛋白的異常表達(dá)。本文結(jié)果顯示：Ezrin蛋白在正?？谇火つぶ胁槐磉_(dá)或顯示為弱陽性，Ezrin蛋白在口腔鱗癌中表達(dá)顯著增高（P＜0.01），并且越接近癌巢中心其表達(dá)越強(qiáng)，提示Ezrin蛋白可作為口腔鱗癌診斷的參考指標(biāo)；Ezrin蛋白的表達(dá)水平隨著口腔鱗癌病理分級的增高而增高（P＜0.01），提示其與口腔鱗癌的分化程度有關(guān)，當(dāng)其表達(dá)越高，腫瘤惡性度就越高；Ezrin蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的口腔鱗癌中表達(dá)水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.01），提示檢測Ezrin蛋白可對口腔鱗癌的轉(zhuǎn)移潛能進(jìn)行評估。

CD44v6是最早被發(fā)現(xiàn)與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的CD44變異體，可使腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞及基質(zhì)黏附，促進(jìn)腫瘤擴(kuò)散。近年研究發(fā)現(xiàn)，CD44v6表達(dá)異常與多種惡性腫瘤如食管癌、胃癌、乳腺癌等的發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)。本文結(jié)果顯示：CD44v6在口腔鱗癌中的表達(dá)高于正?？谇火つぃ≒＜0.05），提示CD44v6可能參與了口腔鱗癌的進(jìn)展；口腔鱗癌中CD44v6的表達(dá)水平在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＜0.05），提示CD44v6高表達(dá)的口腔鱗癌更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，患者預(yù)后較差，CD44v6高表達(dá)可作為判斷患者預(yù)后不良的因素之一。

有研究發(fā)現(xiàn)，Ezrin蛋白與CD44v6連接，共同參與了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程，尤其是Ezrin蛋白與CD44v6兩者同時高表達(dá)時，常出現(xiàn)在腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移中。在結(jié)腸癌[6]中發(fā)現(xiàn)，CD44v6與Ezrin蛋白發(fā)生連接并且兩者在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中有相互協(xié)同作用。本文結(jié)果顯示：在口腔鱗癌中，Ezrin蛋白和CD44v6的表達(dá)之間呈顯著正相關(guān)（r＝0.626，P＜0.01），提示兩者具有協(xié)同作用共同參與了口腔鱗癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，當(dāng)兩者同時高表達(dá)時，預(yù)示著腫瘤的高侵襲性、高轉(zhuǎn)移性，聯(lián)合檢測Ezrin蛋白和CD44v6的表達(dá)，有助于早期預(yù)測口腔鱗癌的轉(zhuǎn)移情況。

本文結(jié)果顯示Ezrin蛋白和CD44v6均與口腔鱗癌的生長和轉(zhuǎn)移有關(guān)，且兩者的陽性表達(dá)成正相關(guān)，兩者均高表達(dá)的口腔鱗癌更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。因此對Ezrin蛋白和CD44v6的聯(lián)合檢測可作為口腔鱗癌早期診斷及臨床預(yù)后評估的有效指標(biāo)。

[1]Moelatehey AI.Merlin and ERM proteins：unappreciated roles in cancer development[J].Cancer，2003，3（11）：877－884.

[2]Kim MS，Song WS，Cho WH，et al.Ezrin expression predicts survival in stageⅡB osteosarcomas[J].Clin Orthop Relat Res，2007，459（7）：229－236.

[3]Favier J，Plouin PF，Corvol P，et al.Angiogenesis and vascular architecture in pheochromocytomas：distinctive traits in malignant turmors[J].Am J Pathol，2002，161（4）：1235－1246.

[4]Zhang Y，Meng XL，Zhu LX，et al.Expression of ezrin and CD44v6in the extrahepatic cholangiocarcinoma and its relationship with cancerous invasion，metastasis and prognosis[J].Acta Universitatis Medicinalis Anhui，2009，44（1）：96－98.

[5]Liu J.Protein expression of Ezrin，E－cadherin，CD44v6in E－sophageal squamous cell carcinoma and prognostic value research[J].Jilin Medical Journal，2012，33（26）：5605－5607.

[6]Lu HQ，Zhen J.Ezrin Protein：Biological characteristic and its influence in tumor metastasis[J].Cytobiology Magazine，2005，27（3）：257－262.