兔眼玻切及C3F8填充術(shù)后房水bFGF含量與白內(nèi)障形成的實(shí)驗(yàn)研究

王 盟 賈松柏

（濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧 272011；中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙 410011）

·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

兔眼玻切及C3F8填充術(shù)后房水bFGF含量與白內(nèi)障形成的實(shí)驗(yàn)研究

王 盟 賈松柏△

（濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧 272011；中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙 410011）

目的研究玻璃體切除聯(lián)合全氟丙烷（C3F8）填充術(shù)后形成白內(nèi)障的兔房水堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）含量變化與白內(nèi)障形成之間的關(guān)系。方法18只成年純系新西蘭白兔（雌雄不限）的36只眼，隨機(jī)平均分為3組：正常組，不做手術(shù)；對(duì)照組，行單純玻璃體切除術(shù)及眼前房灌注液（BSS）填充；實(shí)驗(yàn)組，行玻璃體切除聯(lián)合C3F8填充術(shù)。術(shù)后第1，3，8，35及45天觀察各組白內(nèi)障的形成情況，并抽取房水用ELISA法檢測(cè)房水中bFGF的含量。結(jié)果正常組與對(duì)照組均未出現(xiàn)晶體混濁，實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)晶體混濁。術(shù)后不同時(shí)期，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的bFGF含量均明顯高于正常組。術(shù)后第1，3，8天，實(shí)驗(yàn)組的bFGF含量明顯高于對(duì)照組，有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)論C3F8填充引起房水中bFGF的升高與引發(fā)一過(guò)性白內(nèi)障的形成有關(guān)。

玻璃體切除術(shù)；C3F8；白內(nèi)障；bFGF

玻璃體切除聯(lián)合全氟丙烷（C3F8）填充術(shù)后最常見(jiàn)的并發(fā)癥就是白內(nèi)障，其發(fā)生機(jī)制不明［1］。在很多并發(fā)白內(nèi)障患者的房水中發(fā)現(xiàn)bFGF升高［34］，bFGF與受體結(jié)合后，通過(guò)特定機(jī)制促進(jìn)細(xì)胞的分裂和增殖，上皮細(xì)胞遷移及晶體上皮細(xì)胞分化為晶狀體纖維，并促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生新生的晶體蛋白，從而造成晶體混濁。本文通過(guò)觀察不同手術(shù)方式后兔前房bFGF含量的變化探討C3F8和bFGF與白內(nèi)障形成之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

C3F8氣體（美國(guó)Solkatronic公司）；眼前房灌注液（BSS）（上海百特醫(yī)療用品有限公司）；堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）檢測(cè)試劑盒（美國(guó)ADLITTERAM公司通用型兔堿性成纖維生長(zhǎng)因子bFGF雙抗夾心ELISA試劑盒）；bM900型裂隙燈顯微鏡（瑞士）；YZ6EI型直接檢眼鏡（蘇州醫(yī)療器械廠）；YZ7A型Schiotz眼壓計(jì)（蘇州醫(yī)療器械廠）；Storz玻璃體切除機(jī)（美國(guó)）；YZ20P型眼科手術(shù)顯微鏡（蘇州醫(yī)療器械廠）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物及分組 18只成年純系新西蘭白兔（雌雄不限），體重（2.5±0.3）kg。選其全部的36只眼，隨機(jī)分為3組，每組6只。正常組，不做手術(shù)；對(duì)照組，行單純玻璃體切除術(shù)加BSS填充；實(shí)驗(yàn)組，行玻璃體切除聯(lián)合C3F8填充術(shù)。

實(shí)驗(yàn)納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前測(cè)量眼壓正常，術(shù)前無(wú)晶體異常，術(shù)中未損傷晶狀體。

1.2.2 動(dòng)物模型的制作 術(shù)前0.5%托吡卡胺對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物滴眼散瞳。用3%戊巴比妥鈉注射液靜脈麻醉，1%丁卡因表面麻醉。手術(shù)方式為在眼科手術(shù)顯微鏡下行常規(guī)玻璃體切除術(shù)及C3F8氣體填充術(shù)，所有手術(shù)均由同一人完成。根據(jù)兔眼解剖特點(diǎn)，兔眼球所有的穿刺口選擇在距角鞏膜緣2.5mm處，注入C3F8約0.5ml。其余手術(shù)步驟和人類常規(guī)玻璃體切除術(shù)及C3F8氣體填充術(shù)相同。

1

.2.3 觀察時(shí)間點(diǎn)及觀察指標(biāo) 1）觀察時(shí)間點(diǎn)。C3F8是一種無(wú)色、無(wú)毒長(zhǎng)效、膨脹性氣體，在玻璃體腔內(nèi)體積可膨脹4倍，根據(jù)C3F8的特點(diǎn)，在術(shù)后1d氣體達(dá)到最大膨脹的一半時(shí)、3d膨脹到最大時(shí)、8d氣體吸收一半時(shí)、35d氣體完全消失時(shí)以及45d氣體完全消失后作為觀察時(shí)間點(diǎn)。2）一般情況觀察。切口有無(wú)感染，角膜是否混濁，房水是否有混濁、出血和滲出，玻璃體是否出血及視網(wǎng)膜情況等，如出現(xiàn)上述情況，則將該樣本排除出實(shí)驗(yàn)序列。3）眼內(nèi)壓的測(cè)量。以YZ7A型Schiotz眼壓計(jì)測(cè)量兔眼眼壓。4）晶狀體的混濁程度。晶狀體混濁程度用裂隙燈觀察并照相。5）氣體殘余量的觀察。用氣液平面的高度表示氣體殘余量。

1.2.4 bFGF的檢測(cè) 在C3F8玻璃體腔填充后的第1、3、8、35、45天，用1ml的BD針頭穿刺角膜緣抽取房水約0.1ml，－70℃保存，收集齊標(biāo)本后使用ELISA法進(jìn)行bFGF檢測(cè)，觀察C3F8玻璃體腔填充后對(duì)房水中bFGF含量的影響。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 各組不同時(shí)間平均眼壓值情況

用Schiotz眼壓計(jì)測(cè)量正常組、對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1、3、8、35、45d的眼壓，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可以排除眼壓因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。見(jiàn)表1。

表1 術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)眼壓平均值比較（mmHg，±s）

表1 術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)眼壓平均值比較（mmHg，±s）

1d3d8d35d45d正常組15.90±1.65 15.08±1.50 15.53±1.28 15.08±1.35 15.83±1.58對(duì)照組14.55±1.50 14.40±1.43 14.55±1.65 14.25±1.28 14.98±0.73實(shí)驗(yàn)組14.78±1.28 14.48±1.48 14.33±1.20 14.70±1.58 14.93±1.28 F 2.841 0.767 2.533 1.043 0.199 P 0.073 0.473 0.095 0.364 0.820

2.2 各組不同時(shí)間晶體混濁情況

正常組與對(duì)照組均未發(fā)生晶狀體混濁，術(shù)后1d實(shí)驗(yàn)組大部分出現(xiàn)混濁，3d已經(jīng)全部出現(xiàn)混濁，35d則部分晶狀體混濁消退，至45d仍有2只混濁未消退。表明本實(shí)驗(yàn)成功建立了C3F8玻璃體腔填充后造成晶體混濁的動(dòng)物模型。見(jiàn)表2。

表2 各組不同時(shí)間各組晶體混濁情況（n）

2.3 實(shí)驗(yàn)組術(shù)后不同時(shí)期晶體混濁情況與氣體殘余量關(guān)系的觀察

實(shí)驗(yàn)組兔術(shù)后1d，C3F8氣體充滿玻璃體腔，部分兔眼晶體后囊下出現(xiàn)輕度灰白色混濁，混濁呈散在點(diǎn)狀灰白色混濁。術(shù)后3d，氣體充滿玻璃體腔，此時(shí)晶體混濁程度達(dá)高峰，混濁呈典型的纖維空泡狀改變，即羽毛狀混濁。術(shù)后8d氣體約吸收一半，晶體與C3F8氣體脫離接觸的部分其混濁開(kāi)始逐漸消退。術(shù)后35d所有兔眼玻璃體腔內(nèi)氣體完全吸收，大部分晶體混濁也隨之消失，僅有個(gè)別兔眼混濁未完全消退，呈現(xiàn)局部輕微混濁。術(shù)后45d較之35d基本相同。

2.4 各組不同時(shí)期房水中bFGF平均含量及比較見(jiàn)表3。

表3 各組不同時(shí)期房水中bFGF平均含量比較（pg／ml，±s）

表3 各組不同時(shí)期房水中bFGF平均含量比較（pg／ml，±s）

注：＊與正常組比較，P＜0.05；＃與對(duì)照組比較，P＜0.05。

1d3d8d35d45d正常組3.98±0.31 3.01±0.22 2.99±0.15 3.97±0.21 3.02±0.19對(duì)照組92.01±1.42＊68.85±0.82＊62.99±0.71＊52.97±0.59＊60.78±0.79＊實(shí)驗(yàn)組170.88±0.72＊＃230.12±0.98＊＃251.02±1.59＊＃71.56±0.61＊62.98±0.57＊

3 討論

玻璃體切除聯(lián)合C3F8氣體填充術(shù)目前已成為治療玻璃體視網(wǎng)膜疾病的常用手術(shù)方法。C3F8是一種無(wú)色、無(wú)毒長(zhǎng)效氣體，性質(zhì)穩(wěn)定，在眼內(nèi)體積最大可膨脹4倍，其比重小于玻璃體及水，在玻璃體腔內(nèi)上浮。注入玻璃體腔后具有推壓脫離視網(wǎng)膜協(xié)助復(fù)位，分離展開(kāi)已有皺褶形成的視網(wǎng)膜及封閉裂孔的作用。但該術(shù)后最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一就是晶狀體的混濁［5］。

C3F8玻璃體腔填充術(shù)后晶體混濁的發(fā)生機(jī)制可能為：一是氣體膨脹，眼壓增高，導(dǎo)致白內(nèi)障形成，為排除這一影響因素，本實(shí)驗(yàn)選擇了術(shù)后1d、3d、8d、35d以及45d，也就是氣體達(dá)到最大膨脹的一半、氣體膨脹最大、氣體吸收一半、氣體消失以及氣體消失后10d作為觀察時(shí)間點(diǎn)，通過(guò)對(duì)3組眼壓測(cè)量與兩兩比較，差異均無(wú)顯著性（P＞0.05），且眼壓均在正常范圍內(nèi)，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)確實(shí)排除了眼壓增高導(dǎo)致晶體混濁對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾；二是氣體直接與晶狀體后囊接觸，影響到晶狀體的物質(zhì)代謝，通過(guò)某種生物活性因子的介導(dǎo)機(jī)制引發(fā)晶體的一系列改變：物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，氧化損傷，晶體上皮細(xì)胞DNA的損傷，晶體上皮細(xì)胞的凋亡等，而bFGF則可能是介導(dǎo)這一機(jī)制的重要的生物活性因子之一。bFGF是一種多肽類的生長(zhǎng)因子，廣泛分布于前房，晶狀體，玻璃體等組織內(nèi)，平常極少分泌，當(dāng)組織受到損傷后大量分泌，其主要作用是促進(jìn)組織增生和纖維化，發(fā)揮抗損傷和促進(jìn)修復(fù)的作用［3］，在很多類型白內(nèi)障患者的房水中均發(fā)現(xiàn)bFGF的升高，如核性白內(nèi)障，外傷性白內(nèi)障，糖尿病性白內(nèi)障，后囊下性白內(nèi)障等。

本實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組房水中的bFGF高于正常組，在C3F8存在于眼內(nèi)時(shí)實(shí)驗(yàn)組房水中的bFGF高于對(duì)照組，均有顯著性差異（P＜0.05）。由此我們可以推測(cè)：C3F8玻璃體腔填充后可以引起房水中bFGF的升高，當(dāng)bFGF升高到一定程度后，可以引起白內(nèi)障［3］。

綜上所述，我們推斷玻璃體切除聯(lián)合C3F8氣體填充術(shù)后白內(nèi)障發(fā)生的可能機(jī)理為：C3F8玻璃體腔填充影響到晶狀體的代謝，受到代謝損傷的晶狀體上皮細(xì)胞在降解酶的作用下使儲(chǔ)存于細(xì)胞外基質(zhì)間的bFGF釋放，局部高濃度的bFGF與其受體結(jié)合后，定位于細(xì)胞核，通過(guò)RNA聚合酶I加強(qiáng)蛋白體基因的轉(zhuǎn)錄，引起細(xì)胞內(nèi)一系列的反應(yīng)，包括細(xì)胞DNA的合成和RNA的轉(zhuǎn)錄，加速細(xì)胞由G0到G1，G1到S期的轉(zhuǎn)換，從而促進(jìn)細(xì)胞的分裂和增殖，促進(jìn)上皮細(xì)胞的遷移以及晶體上皮細(xì)胞分化為晶狀體纖維，并且促進(jìn)晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生新生的晶體蛋白，當(dāng)bFGF升高達(dá)到一定程度后，即可造成晶體混濁的形成［8］。因此，C3F8填充引起房水中bFGF的升高與引發(fā)一過(guò)性白內(nèi)障的形成有關(guān)。

本文初步搞清了C3F8、bFGF與白內(nèi)障形成之間的關(guān)系，這對(duì)于此種類型的白內(nèi)障的防治與進(jìn)一步研究，具有十分重要的參考價(jià)值。

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The correlationship between the content of bFGF in the aqueous humor and the development of PCO（posterior capsular opacity）following the joint operation of vitrectomy and C3F8tamponade on rabbit＇s eye

WANG Meng，JIA Song－bai
（
Jining First People＇s Hospital ＆the Affiliated Hospital of Jining Medical University，Jining 272011，China）

ObjectiveTo investigate the possible correlationship between the content of bFGF in the aqueous humor and the development of PCO（posterior capsular opacity）following the joint operation of vitrectomy and C3F8tamponade.Methods18 adult and pure－breed New Zealand white rabbits were selected，and all their 36 eyes as subjects of the experiment were taken.They were assigned into three groups randomly，i.e.12 eyes per group.Blank control group would receive none operation.Control group which would undergo the vitrectomy.Experimental group which would accept the joint operation of vitrectomy and C3F8tamponade.Afterwards，the development of PCO was observed and the bFGF content was measured in subject＇s aqueous humor on the next 1，3，8，35，45 days respectively.ResultsAll subjects in blank control group and control group hadn＇t shown PCO during the experiment.All subjects in experimental group had shown PCO.The bFGF in control group and experimental group were significantly higher than blank control group.Experimental group was also higer than Control group throughtout the experimental period.ConclusionC3F8tamponade will raise the content of bFGF in the aqueous humor which may potentially contribute to the development of PCO.

Vitrectomy；C3F8；PCO；bFGF

R776.1

A

1000－9760（2014）04－081－03

2014－03－12）

10.3969／j.issn.1000－9760.2014.02.002

△［通信作者］賈松柏，E－mail：jsb88cn＠126.com