靈芝化學(xué)成分分析方法的研究

王明蛟，高 航，剛婉嬌，邱智東，徐 偉*

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長春 130117;2.吉林財經(jīng)大學(xué)醫(yī)院，長春 130117）

靈芝化學(xué)成分分析方法的研究

王明蛟1，高 航2，剛婉嬌1，邱智東1，徐 偉1*

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長春 130117;2.吉林財經(jīng)大學(xué)醫(yī)院，長春 130117）

靈芝是我國醫(yī)學(xué)寶庫中珍貴的藥用真菌?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，靈芝含有多種生物活性物質(zhì)，主要化學(xué)成分為多糖類、三萜類、甾醇類、核苷類、氨基酸及微量元素等，具有抗腫瘤、抗衰老、抗凝血、抗感染鎮(zhèn)痛、保護心臟、調(diào)節(jié)免疫及降血糖等作用。在臨床上對慢性支氣管炎、哮喘、冠心病、心絞痛及高脂血癥、高血壓病、神經(jīng)衰弱、肝炎、白細胞減少癥、腫瘤、風(fēng)濕等具有很好的療效。在腫瘤的治療中，與化學(xué)治療或放射治療合用時，靈芝多糖對胃癌、肺癌、肝癌等輔助治療作用顯著。

靈芝;化學(xué)成分;提取純化;藥理作用

靈芝來源于多孔菌科靈芝屬真菌赤芝Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fr.）Karst.或紫芝 G.sinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子實體。靈芝作為我國傳統(tǒng)補益藥，具有補氣安神、止咳平喘的功效［1］，其所含的化學(xué)成分較復(fù)雜，因所用菌種的培養(yǎng)方法、提取分離等不同而異，主要含有多糖類、三萜類、甾醇類、核苷類、氨基酸及微量元素等。本文重點就靈芝中常見化學(xué)成分的檢測與分析方法作一概述。

1 靈芝中多糖類成分的測定

靈芝多糖由肽多糖、葡聚糖、雜多糖等多糖均一體組成的混合物，是靈芝主要有效成分之一。目前，已分離出200多種靈芝多糖，大部分為β型葡聚糖，少數(shù)為α型葡聚糖。靈芝多糖具有廣泛的藥理活性，能提高機體免疫力、清除自由基，抑制腫瘤等。常見的提取方法有熱水浸提法［2］、水提醇沉法、超聲波提取法、微波提取法、超臨界萃取法等;分析檢測方法主要有硫酸-蒽酮法、苯酚-硫酸法、水楊酸法、CE、HPLC、GC、IR、MS、NMR 等;多糖的分子量可通過凝膠柱色譜如SephadeaxG-100柱色譜、超離心測沉降系數(shù)等方法測定。

游麗君等［3］比較了超聲波法、超聲波結(jié)合纖維素酶法、超聲波結(jié)合胰酶法、傳統(tǒng)熱水提取法4種方法提取靈芝多糖的性質(zhì)區(qū)別。結(jié)果表明采用超聲波結(jié)合胰酶法提取多糖得率最高，可達4.93%，比傳統(tǒng)水提法得率高1.58倍。相比傳統(tǒng)水提法所得多糖的分子量，超聲處理可顯著降低。此外，采用超聲波結(jié)合胰酶法提取的多糖也具有較好的抗氧化活性，因此超聲波結(jié)合胰酶法切實、有效，有望成為靈芝品種選育的一項重要手段。楊祖金等［4］采用卷式超濾膜對靈芝多糖進行分離提取研究。結(jié)果顯示膜截留分子量6 000 D、超濾溫度45～50℃、超濾壓力0.6 mPa、時間45 min，制得靈芝多糖的純度73.5%，回收率69.4%。表明超濾膜技術(shù)分離提純靈芝多糖工藝簡單、效果較好、有產(chǎn)業(yè)化前景。

2 靈芝中三萜類成分的測定

靈芝三萜是靈芝的主要成分之一，目前各種靈芝中分離到的三萜類化合物已達100多種，其中大部分為C30的靈芝酸、C27的赤芝酸，此外還有赤芝酮、靈芝內(nèi)酯等。研究發(fā)現(xiàn)靈芝三萜具有護肝、抗高血壓、抗腫瘤等藥理活性。其主要提取方法有超聲波輔助提取、有機溶劑浸提、超臨界CO2萃取、大孔樹脂分離提取等技術(shù);純化技術(shù)主要有吸附色譜法、高效液相色譜法等;常規(guī)檢測手段有TLC、UV、HPLC、CE等。

朱忠敏等［5］采用高速逆流色譜法分離純化靈芝提取物中的靈芝酸。結(jié)果顯示在溶劑體系為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=5∶5∶3∶7的條件下，主機轉(zhuǎn)速900 r/min，流速3 mL/min，檢測波長254 nm，上樣量20 mL，經(jīng)1次高速逆流色譜分離，可從靈芝提取物中分離得到兩種含量較高的靈芝酸。該方法具有樣品容量大、分離效率高等特點，在靈芝酸等結(jié)構(gòu)相似的化合物分離純化方面具有廣泛應(yīng)用前景。

3 靈芝中甾醇類成分的測定

靈芝中甾醇類成分是從其脂溶性分離物中提取的活性物質(zhì)，含量較高。目前從靈芝中分離的甾醇有近20種，其骨架分為麥角甾醇和膽甾醇2種類型。甾醇類成分對人體具有較強的抗感染作用，對預(yù)防治療冠狀動脈硬化類心臟病、潰瘍、宮頸癌等有明顯療效，因此，對人參中甾醇類成分進行測定非常必要。

何榮軍等［6］采用高速剪切閃式提取技術(shù)從靈芝中提取總甾醇。GC-MS分析表明靈芝總甾醇提取物中主要含有麥角甾醇和麥角甾-7，22-二烯-3β-醇。通過單因素實驗和響應(yīng)面實驗優(yōu)化提取工藝，麥角甾醇實際得率為0.072 1%。與傳統(tǒng)提取法相比，閃式提取法通過負壓、剪切、高速碰撞等各種外力作用使溶質(zhì)迅速進入溶劑，能顯著降低提取時間和溫度，更適合甾醇的提取。

4 靈芝中核苷類成分的測定

靈芝中核苷類成分是具有廣泛生理活性的一類水溶性成分，主要有抗凝血、擴張冠狀動脈、松弛支氣管平滑肌等作用。目前已從靈芝中分得核苷類物質(zhì)有尿嘧啶、腺嘌呤、腺苷等，核苷類物質(zhì)在靈芝中含量甚微，化學(xué)結(jié)構(gòu)極其相似，很難被分離。

楊豐慶等［7］采用毛細管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用法測定靈芝藥材中核苷類成分。CE條件為熔融石英毛細管柱（120 cm ×50 μm），緩沖液體系 100 mmol/L甲酸-10%甲醇水溶液。運行電壓25 kV;毛細管溫度25℃。MS條件為0.3%甲酸-75%甲醇水溶液為鞘液，流速3 μL/min;干燥氣體流速6 L/min，干燥溫度350℃:采用ESI正離子模式檢測，全掃描范圍m/z 50～350。以5-氯胞嘧啶阿拉伯糖苷為內(nèi)標物。結(jié)果表明具有較好的線性關(guān)系，除鳥苷外其他成分均R2＞0.990;加樣回收率在95.3% ～104.6%。因此，CEMS適合用于中藥中核苷類成分的分析檢測。

5 靈芝中氨基酸成分的測定

靈芝是氨基酸的“貯存庫”，含有賴氨酸、亮氨酸等，占靈芝的10%以上。在總的氨基酸中人體必需的氨基酸占總氨基酸30%～40%。靈芝氨基酸具有種類多、含量高、活性高、易被人體吸收的特點，與靈芝多糖協(xié)同作用具有強烈的抗腫瘤活性。目前對于靈芝中氨基酸類成分的分析報道［8］較多，大多依賴于氨基酸分析儀對總氨基酸的測定。

商振華等［9］采用反相高效液相色譜-紫外吸收法測定靈芝中氨基酸的含量。以醋酸鈉緩沖液和乙腈

水線性梯度洗脫。在室溫下對常見的16種FDNB衍生化氨基酸進行了有效的分離，用紫外吸收檢測器（360 nm）和外標定量法對靈芝蛋白中各種氨基酸的含量進行了測定。結(jié)果表明FDNB衍生化氨基酸在1周內(nèi)是穩(wěn)定的，回收率在96% ～102%，相對標準偏差小于4%，故靈芝中含有人體必需的賴氨酸、苯丙氨酸和組氨酸等組分。

6 靈芝中微量元素的測定

靈芝中含有多種微量元素，如 Mn、Mg、Ca、Cu、Ce、Sr等，靈芝中微量元素的分析方法主要有灰化法、熱分析法、非完全消化法、微波消解法、質(zhì)子激發(fā)X射線分析法、中子活化法、X射線熒光分析法等;檢測方法主要有原子吸收分光光度法、原子熒光光譜法等。

劉立行等［10］建立非完全消化-FAAS法測定靈芝及人參中微量元素的新方法。在低溫下用高氯酸-硝酸（1+3）混合酸消解樣品，再加入乳化劑TritonX-100溶解油脂配制成均勻透明的樣品溶液。對樣品處理條件、化學(xué)干擾、背景吸收干擾、檢出限及特征濃度進行考察，測定結(jié)果的相對標準偏差≤3.9%，本方法測定結(jié)果與灰化法一致，相對誤差＜±2.3%。由此表明在火焰原子吸收法中，用非完全消化法取代灰化法對靈芝、人參樣品進行預(yù)處理是可行的，且方法簡便、準確。吳方方等［11］采用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀測定松杉靈芝中29種微量元素的含量。結(jié)果松杉靈芝菌蓋中Al、Fe、Zn、Mn含量比赤芝菌蓋高。同時表明該法簡單、快速、切實可行。

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Research on the analysis methods for chemical constituents in Ganoderma lucidum

WANG Mingjiao1，GAO Hang2，GANG Wanjiao1，QIU Zhidong1，XU Wei1*
（1.College of Pharmacy，Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun 130117，China;2.Hospital of Jilin University of Finance and Economics，Changchun 130117，China）

Ganoderma lucidum is the precious medicinal fungi of traditional Chinese medicine.Modern pharmacology study shows that Ganoderma lucidum contains a variety of biological active substance，the main chemical compositions are polysaccharide，triterpene，sterol，nucleotides，amino acids and microelements，etc.，which has the anti-tumor，anti-aging，anticoagulant，anti-inflammatory analgesic，heart-protecting，immune regulation，blood sugar regulation，etc.In clinic，Ganoderma lucidum has a very good effect for the treatment of chronic bronchitis，asthma，hyperlipidemia，hypertension，coronary heart dis-ease，angina，neurasthenia，hepatitis，white blood cells reduce disease，tumor，rheumatism and so on.Ganoderma lucidum polysaccharides has a positive effect on the adjuvant treatment of chemotherapy or radiotherapy on gastric cancer，lung cancer，liver cancer，etc.

Ganoderma lucidum;chemical component;extraction and purification;pharmacologic action

R284.1

A

2095－6258（2014）05－0817－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.021

國家科技支撐計劃課題（2012BAI29B00）。

王明蛟（1988－），女，碩士研究生。研究方向:中藥制劑研究。

徐偉，副教授，電話:0431-86172786，電子信箱:xuwei19802006@126.com。

2014－03－17）