有柄石韋中黃酮類(lèi)成分的分離純化工藝的研究

韓晨晨，程丹丹，張穎穎，高德民*

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；2.山東中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

中藥石韋為水龍骨科(Polypodiaceae)植物石韋屬(Pyrrosia)有柄石韋的地上部分[1]。性甘、苦，微寒。歸肺、膀胱經(jīng)。具利水通淋，清肺泄熱之功效，可治淋痛，尿血，尿路結(jié)石，腎炎，崩漏，痢疾，肺熱咳嗽，慢性氣管炎，金瘡，癰疽等[2]。石韋煎劑對(duì)金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌等有不同程度的抑制作用[3]。臨床中用石韋治療支氣管哮喘、慢性支氣管炎、急、慢性腎炎及腎盂腎炎等疾病，具有較好的效果。

黃酮類(lèi)化合物是天然的抗氧化劑，具有清除人體中超氧離子自由基的生理活性，且具有抗癌、抗衰老和抗氧化等多種藥理作用，因此對(duì)有柄石韋中黃酮類(lèi)成分提取純化工藝的探討具有重要意義。

1 儀器與試劑

1.1 材料

有柄石韋(購(gòu)自建聯(lián)中藥店)。

1.2 主要試劑

蘆丁對(duì)照品(生化試劑，上海阿拉丁試劑有限公司)，乙酸乙酯、正丁醇、乙醚(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)和石油醚(天津市達(dá)森化工產(chǎn)品銷(xiāo)售有限公司)均為分析純。95%乙醇、亞硝酸鈉(AR)、氫氧化鈉(AR)、三氯化鋁(AR)。

1.3 儀器

DS-T250高速多功能粉碎機(jī)(上海市頂帥工貿(mào)有限公司)；SHB-III循環(huán)水多用真空泵(菏澤市鑫源儀器儀表有限公司)；RE52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(菏澤市鑫源儀器儀表有限公司)； HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋(濟(jì)南啟科儀器設(shè)備有限公司)；PS-40A超聲波清洗機(jī)(深圳市超藝達(dá)科技有限公司)；754PC紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海菁華科技儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃酮類(lèi)成分的分離純化

取藥材洗凈，自然風(fēng)干，粉碎機(jī)粉碎后過(guò)40目篩，稱(chēng)量270 g。將有柄石韋置于燒杯中用石油醚浸泡過(guò)夜。將藥液抽濾，向藥渣中加入70%濃度的乙醇[4]超聲，回流浸提，抽濾得濾液，濾液減壓濃縮并回收乙醇，得浸膏。浸膏在水浴鍋上蒸干，水溶浸膏并用石油醚多次萃取，下層平均分成9份，待用，水溶后分別用乙酸乙酯、正丁醇、乙醚在不同因素下萃取，分離時(shí)各因素水平如下表[5-6]：

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

將分別用乙酸乙酯、正丁醇、乙醚萃取得到的黃酮提物旋蒸后置于水浴鍋上蒸干，稱(chēng)重。

2.2 黃酮類(lèi)成分的測(cè)定

準(zhǔn)確稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品3.5 mg，用70%乙醇溶解并定容至50 mL，搖勻得濃度為0.070 0 g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液。用該溶液配制十份不同梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并顯色，用紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)在510 nm處測(cè)量吸光值。以濃度對(duì)吸光度值做標(biāo)準(zhǔn)曲線[7]。，所得黃酮回歸方程為，y=6.8302x+0.0052；r=0.9997同樣方法測(cè)定九份樣品提取物的吸光度。由回歸方程及稀釋的關(guān)系計(jì)算出每份中黃酮濃度及含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 結(jié) 論

3.1 結(jié)果分析

由表2可知，4個(gè)因素對(duì)分離純化效果影響的主次順序?yàn)檩腿∪軇?萃取次數(shù)>萃取溶劑用量>萃取時(shí)間。萃取溶劑和萃取次數(shù)是主要影響因素，萃取時(shí)間和每次萃取溶劑的量次之。故應(yīng)選A2B1C2D2為分離純化的最佳方案。

3.2 驗(yàn)證試驗(yàn)

根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果對(duì)A2B1C2D2條件進(jìn)行3次實(shí)驗(yàn)，結(jié)果無(wú)顯著差異。本次試驗(yàn)最佳分離純化工藝為200 mL的正丁醇萃取4次，每次萃取30 min。

4 討 論

本研究以中藥有柄石韋為研究對(duì)象，采用乙醇熱回流法提取其中的總黃酮，并用不同的有機(jī)溶劑萃取分離，并運(yùn)用紫外分光光度法在波長(zhǎng)510 nm處對(duì)黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定。通過(guò)正交試驗(yàn)法對(duì)提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，并進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果顯示最佳提取工藝為200 mL的正丁醇，萃取4次,每次萃取30 min。

研究表明，黃酮類(lèi)化合物具有抗過(guò)敏、降血壓、抗炎、抗菌、抗突變、抗?jié)?、抗病毒、保肝和降血脂等活性[8]。黃酮作為重要的藥效成分在有柄石韋中有著豐富的種類(lèi)和較高的含量。本研究對(duì)有柄石韋中黃酮類(lèi)成分分離純化工藝進(jìn)行優(yōu)選，以使石韋中黃酮類(lèi)有效成分能夠充分的被人類(lèi)利用，同時(shí)提高了石韋資源的利用率，減少了不必要的浪費(fèi)，對(duì)于建設(shè)資源節(jié)約型社會(huì)具有重大的意義，為進(jìn)一步對(duì)黃酮類(lèi)成分的理化性質(zhì)的研究提供有利的條件。

參考文獻(xiàn)：

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