廣金錢草總黃酮含量測定及還原Fe3+的能力

余麗麗，汪嬌梅，黃鎖義，譚 冰

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院 臨床學(xué)院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，廣西 百色 533000)

黃酮類化合物是自然界中一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，具有很高的藥用價值。黃酮類有效成分對治療冠心病、老年性癡呆、腦血栓、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有顯著效果,無副作用,并以此開發(fā)出多種藥品和保健食品[1]。而黃酮類化合物是自然界中抗氧化作用最強的一類天然化合物，由于它具有很強的抑制活性氧、清除自由基作用，同時毒副作用相對小于化學(xué)合成藥，因此黃酮類化合物一直是人們致力于尋找新藥的重要研究領(lǐng)域。

廣金錢草 Yerba Desmodii Styracilii為豆科植物廣金錢草Desmodiumstyracifolium(Osb.) Merr.的干燥地上部分[2]。盛產(chǎn)于廣西、廣東、福建等省，具有清熱利濕，通淋排石之功效。性味甘、淡、涼，歸肝、腎、膀胱經(jīng)，用于熱淋、砂淋、小便刺痛、黃疸尿赤、尿路結(jié)實等[3]。《中華人民共和國共和國藥典》和《中藥大辭典》中記載，廣金錢草含有生物堿、黃酮苷、酚類、鞣質(zhì)等成分,從廣金錢草中分到的黃酮主要為黃酮碳苷化合物夏佛塔苷(Schftoside)、異牡荊素(Isovitexin)、異葒草素(Isoorienton)、6-C-木糖-8-C-葡萄糖洋芹素(Vicenin-1)、6-C-葡萄糖-8-C-木糖澤芹素(Vicenin-3)等[4-5]。目前對廣金錢草還原Fe3+的能力研究較少，本試驗對廣金錢草中黃酮類化合物進行了提取，分別通過紫外分光光度法和普魯士蘭法測定了其還原Fe3+的能力，為進一步研究廣金錢草黃酮類化合物以及其深入開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

KQ5200DB 型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；可見分光光度計(722N)：上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司；電子天平：上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；ZKJ-1002循環(huán)水式真空抽氣泵：上海嘉鵬科技有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE-52AA)：上海安亭實驗儀器有限公司；HH-SA 數(shù)顯恒溫水浴鍋：上海上登實驗設(shè)備有限公司等。

1.2 試劑

無水乙醇AR ；95%乙醇 AR；鹽酸 AR；磷酸氫二鈉 AR；磷酸二氫鈉 AR；鐵氰化鉀 AR；三氯乙酸 AR；三氯化鐵 AR等。廣金錢草采自廣西百色市凌云縣。

2 方法與結(jié)果

2.1 總黃酮的提取

稱取廣金錢草干品約6 g,加80 mL 95%乙醇,超聲波提2.5 h,抽濾。濾渣以同法提取2.5 h抽濾,兩次濾液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至一定體積，將濃縮液轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中,用60%乙醇稀釋至刻度,得樣品液。

2.2 總黃酮的含量測定[6]

2.2.1 波長的確定

取0.5 mL樣品液，在0.30 mL 5%亞硝酸鈉溶液存在堿性條件下,加入10%硝酸鋁溶液0.30 mL,以試劑空白作參比液在400～700 nm波長范圍確定絡(luò)合物的吸光度。本實驗中絡(luò)合物于410 nm波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精確量取蘆丁對照液(0.10mg/mL)依次為0.00,0.50，1.00,2.00,3.00，4.00,5.00 mL于10 mL容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30 mL,搖勻 ,靜置6 min；再加10%硝酸鋁溶液0.30 mL,搖勻，靜置6 min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00 mL,用60%乙醇稀釋至刻度,搖勻，靜置12 min,以試劑空白作參比液，于410 nm波長處測其吸光度，以對照液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程，結(jié)果見圖1。

圖1 蘆丁對照液的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.3 提取物含量的測定

精密吸取樣品液0.50 ml，置10 mL容量瓶，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法測定吸光度A為1.716根據(jù)回歸方程A=11.6x-0.002,計算樣品中總黃酮的含量C=0.148 mg/mL。

2.3 總黃酮提取液還原Fe3+能力(普魯士蘭法)

采用普魯士蘭法測定樣品還原Fe3+能力。分別取5支10mL具塞比色管，依次加入不同濃度的樣品溶液2.5 mL，磷酸鹽緩沖液(0.2 mol/L pH值6.6) 2.5 mL和1%鐵氰化鉀2.5 mL，混勻后置于50℃水浴中反應(yīng)20min，然后加入10%三氯乙酸2.5 mL，混勻，如溶液渾濁離心(3 000 r/min)10 min，取上清液2.5 mL，加入2.5mL蒸餾水和0.1%三氯化鐵溶液0.5 mL，混勻，以試劑空白作參比，在700 nm處測定吸光度值，吸光度值增加表明還原能力增強。結(jié)果如表1所示。

表1 廣金錢草總黃酮提取液還原Fe3+能力吸光度值

由表1可以看出，隨著廣金錢草總黃酮提取液濃度增大，其吸光度值不斷增加，對Fe3+還原能力增強。

3 結(jié)論與展望

本實驗結(jié)果表明，本實驗方法簡單，采用超聲波提取法對廣金錢草總黃酮進行提取，用60%乙醇配置成樣品溶液，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品測定其總黃酮的含量(C=0.148mg/mL)。且對Fe3+還原能力較強。

黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在植物界，是許多中草藥的有效成分。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而體現(xiàn)如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴展毛細血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細胞的功能。具有抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用[7-13]。廣金錢草黃酮對Fe3+還原能力較強，對天然抗氧劑藥物的開發(fā)有潛在的利用價值。本文的研究結(jié)果為進一步研究廣金錢草黃酮類化合物及其深入開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

參考文獻：

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