黃精仿野生撫育后其子代藥材中多糖含量的測定及比較

張 婭,項朋志,溫 敏

(1.云南省中醫(yī)中藥研究院中心實驗室，云南 昆明 650223；2.云南開放大學化學工程學院，云南 昆明 650222)

中藥黃精是百合科黃精屬多種植物根莖的總稱，我國有30多種[1]。中國藥典收載了黃精(PolygonatumsibiricumRed.)、多花黃精(PolygonatumcyrtonemaHua.)和滇黃精(PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.)3種植物為原生藥[2]。我國各省市均有分布，主要集中在貴州、云南、四川、內(nèi)蒙古、遼寧、吉林、黑龍江、河北、安徽、湖北等省。黃精性平、味甘，入脾、腎、肺經(jīng)，具有提高免疫力、降血糖、降血脂、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[3-4]。黃精在臨床上主要用于治療糖尿病、冠心病、高脂血癥、白細胞減少癥和艾滋病等。研究表明，黃精主要含多糖、低聚糖、黃精皂苷、氨基酸、黃酮及微量元素等活性成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃精多糖對老齡大鼠淋巴細胞百分率、紅細胞、晶體核、晶體皮質(zhì)超氧化物歧化酶(SOD) 活性、肝臟和腎臟脂褐質(zhì)含量、心臟脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量、腦中β型單胺氧化酶活性均有明顯的改善作用[5]。

將野生滇黃精引種到云南山地仿野生撫育，一年后將其塊根進行無性繁殖，得到一年后子代植株；又將一年后子代塊根進行無性繁殖，得到二年后子代植株。對引種的野生黃精、一年后子代、二年后子代植株的塊根進行主要有效成分——黃精多糖的含量測定及比較，擬為進一步評價黃精仿野生撫育后藥材品質(zhì)及安全性提供依據(jù)。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

新鮮的黃精地下塊根(引種野生黃精、一年后子代、二年后子代),采自云南省文山地區(qū)西疇縣中藥材仿野生種植基地。

葡萄糖標準品，中國藥品生物制品檢定所；蒽酮、硫酸、乙醇，分析純，廣東華光科技股份有限公司；實驗用水均為超純水。

Sartorius BT 224S型分析天平；DFT-200型手提式高速萬能粉碎機，溫嶺林大機械有限公司；DZF-6020型真空干燥箱，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；KQ-350M型超聲清洗儀，東莞科橋超聲設備有限公司；XMTD-4000型電熱恒溫水浴鍋，北京永光明醫(yī)療儀器廠；ELGA Classic UF型超純水系統(tǒng)；TU-1900型雙光束紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司。

1.2 方法

1.2.1 標準曲線的繪制

精密稱取干燥至恒質(zhì)量的無水葡萄糖對照品33 mg置于100 mL容量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得對照品溶液。分別精確吸取葡萄糖對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL置于標號具塞試管中,再分別補水至2 mL，搖勻；在冰水浴中緩緩精密滴加8 mL 0.2%蒽酮-硫酸溶液，混勻,放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出；以同樣方法處理的蒸餾水樣為空白，在582 nm波長處測定吸光度(A)。以吸光度為縱坐標、葡萄糖濃度(c)為橫坐標，繪制標準曲線。

1.2.2 供試品溶液的制備

將黃精(引種野生黃精、一年后子代、二年后子代)植株的取樣塊根切片后置真空干燥箱中，60 ℃干燥至恒質(zhì)量。精密稱取約0.25 g，置具塞錐形瓶中，加80%乙醇150 mL，超聲處理20 min，趁熱過濾，殘渣用80%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL；將殘渣及濾紙置錐形瓶中，加水150 mL，超聲處理20 min，趁熱過濾，殘渣及錐形瓶用熱水洗滌4次，每次10 mL；合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，再精密量取1 mL水加至試管中，搖勻，按1.2.1方法測定吸光度，由回歸方程得多糖溶液的濃度，計算黃精多糖的含量。

2 結果與討論

2.1 標準曲線(圖1)

圖1 對照品的標準曲線

由圖1可知，在3.3～19.8 μg·mL-1范圍內(nèi)，葡萄糖濃度與吸光度呈良好的線性關系。擬合回歸方程為：A=0.01507c+0.06107，R=0.9992。

2.2 引種野生黃精、一年后子代藥材、二年后子代藥材中多糖含量的測定結果(表1)及比較

由表1可知，引種野生黃精經(jīng)過仿野生撫育后，其子代藥材中多糖含量均高于原引種藥材，且一年后子代藥材中的多糖含量明顯高于二年后子代藥材。該結果將為今后黃精的仿野生撫育后不同繁殖代中多糖含量變化趨勢的判斷提供參考，為確定最佳采收年限提供依據(jù)。

表1仿野生撫育后不同繁殖代藥材中的多糖含量

Tab.1The contents of polysaccharide of seedlingsand different breeding generations

2.3 討論

由于人工栽培的黃精量一直較小，因此其來源以野生藥材為主，但是隨著黃精需求量的日益增加，黃精的生態(tài)環(huán)境遭到破壞，導致野生資源急劇減少，由此人們逐漸開始對黃精的野生變家種栽培技術、高產(chǎn)栽培技術等進行研究，并做了許多開創(chuàng)性的工作[6-9]?；谶@樣的現(xiàn)狀，作者將野生黃精引種到山地進行仿野生撫育，在其生長過程中除了每年采挖塊根進行子代繁殖外，讓其在自然環(huán)境中生長，不再進行任何人為的干預，這是黃精的栽培研究的首次嘗試， 以期能成為緩解野生黃精資源枯竭的有效而可行的途徑。

黃精經(jīng)過仿野生撫育后，其有效成分多糖總體呈上升趨勢，這與潘德芳等[10]報道的九華山地區(qū)的不同育成年份的黃精中多糖的含量變化基本相同。但作者創(chuàng)新性地考察子代與母代之間含量變化趨勢，并不是單一考察生長年限對含量的影響。

幾年來，通過對黃精進行山地仿野生撫育，初步發(fā)掘到了仿野生撫育的優(yōu)勢：既能夠保證產(chǎn)出藥材的安全(減少重金屬、農(nóng)藥殘留等)，也能夠保證產(chǎn)出藥材的有效成分含量，這是解決黃精野生種群退化、野生資源日益枯竭的有效途徑，相關研究將繼續(xù)深入。

3 結論

將野生黃精進行山地仿野生撫育，為初步評價其撫育后子代藥材的質(zhì)量，采用紫外分光光度法對引種種苗藥材、一年后子代藥材、二年后子代藥材中的有效成分黃精多糖進行含量測定和比較。結果表明：子代藥材中的有效成分含量比種苗藥材中的明顯上升，一年后子代的有效成分含量明顯高于二年后子代，其有效成分代謝積累機制有待進一步的研究。

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