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    落花生莖葉生物堿的輻照提取及其定性定量分析

    2014-03-27 01:58:12鉏曉艷江洪有耿勝榮
    關(guān)鍵詞:落花生吸收劑量三氯甲烷

    鉏曉艷 李 新 谷 峰 廖 濤 江洪有 耿勝榮

    (湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心/湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術(shù)研究所/湖北省農(nóng)產(chǎn)品輻照工程技術(shù)中心 武漢 430064)

    落花生莖葉為豆科植物落花生屬落花生(Arachis hypogaeaL.)的莖葉,落花生莖葉莖高30?70 cm,匍匐或直立;雙數(shù)羽狀復(fù)葉互生,長圓形至倒卵圓形,長2.5?5.5 cm,寬1.4?3 cm[1]。一直以來,落花生莖葉被丟棄或曬干焚燒,造成相當(dāng)嚴(yán)重的資源浪費(fèi)和環(huán)境負(fù)擔(dān)。2011年中國落花生播種面積為470萬公頃,總產(chǎn)量約為1620萬噸。大面積的落花生種植為我們提供優(yōu)質(zhì)落花生產(chǎn)品的同時(shí),也亟需我們?yōu)槁浠ㄉo葉等秸稈農(nóng)副產(chǎn)物找到高值轉(zhuǎn)化的出口。多項(xiàng)研究表明落花生莖葉具有寧神降壓、促進(jìn)睡眠的功效[2-4],是具有高值轉(zhuǎn)化潛力的農(nóng)副產(chǎn)品。

    在落花生莖葉有效物質(zhì)提取技術(shù)方面,傳統(tǒng)用的浸漬法、滲漉法、煎煮法、熱回流提取法等,對植物的天然活性成分破壞很大[5-6]。利用60Co γ-射線輻照技術(shù)輔助提取植物中活性物質(zhì)的文獻(xiàn)報(bào)道很少,相關(guān)專利如公開號(hào) CN101961357A[7]和CN103275136A[8],發(fā)明人都是采取輻照預(yù)處理植物原料后,再進(jìn)行溶劑提取,該方法不僅操作繁瑣耗時(shí),且工藝過程需要較高能耗(即較高輻射劑量)。

    本研究以落花生莖葉為研究對象,通過用60Co γ-射線輻照源進(jìn)行低劑量常溫輻照與溶劑萃取相結(jié)合的方法促進(jìn)落花生莖葉功能成分的溶出,選擇性地提取目標(biāo)化合物,并通過大孔樹脂進(jìn)行分離純化,獲得落花生莖葉生物堿,并對其進(jìn)行定性定量分析。為落花生莖葉中總生物堿的提取、分離和純化提供了新穎高效的方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    落花生莖葉,采收于武漢市野芷湖周圍,采收后清洗、晾干、粉碎過40目備用。大孔吸附樹脂HPD100、D-101、AB-8、HPD722、NKA-9、HPD600,鄭州勤實(shí)科技有限公司提供。鹽酸小檗堿(含量≥98%),上海源葉生物科技有限公司提供。膽堿,東京化成工業(yè)株式會(huì)社提供。其他試劑均為分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供。

    1.2 儀器與設(shè)備

    60Co γ-射線輻照源(活度1.11×1016Bq),湖北省輻照實(shí)驗(yàn)中心;TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用);MB99-1液相色譜分離層析儀(上海滬西);RE-52 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮);KQ3200DB型超聲清洗儀(昆山市超聲儀器);LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津)。

    1.3 方法

    1.3.160Co γ-射線輻照源常溫輻照

    稱取2 g落花生莖葉粉末置于包裝袋中,加入三氯甲烷80 mL,封口,60Co γ-射線常溫輻照,劑量1?18 kGy(10組劑量),對照組為超聲波法,功率100 W,25 ℃超聲提取2 h。然后抽濾,上清液用三氯甲烷定容至100 mL,取1 mL于25 mL容量瓶中,用三氯甲烷定容,備用。

    1.3.2 總生物堿的測定

    標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密稱取20 mg鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品,加少量水超聲溶解,轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中,加水定容至刻度,取1 mL置于10 mL容量瓶中,加水定容至刻度,搖勻,即得0.04 mg·mL?1標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL,加三氯甲烷至5 mL,加入溴甲酚綠緩沖液和0.2 mol·L?1NaOH溶液各1 mL,振搖1min,靜置30 min,取澄清的三氯甲烷液在415 nm波長處進(jìn)行測定。以濃度為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    樣品的測定:取待測液1.0 mL,加三氯甲烷至5 mL,加溴甲酚綠緩沖液和0.2 mol·mL?1NaOH溶液各1 mL,振搖1 min,靜置30 min,取澄清的三氯甲烷液,以空白做參比,415 nm處測其吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其濃度??偵飰A含量(%)按公式(1)計(jì)算。

    公式1中,c為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的生物堿濃度(mg·mL?1);b為稀釋倍數(shù);v為待測液總體積;m為樣品質(zhì)量。

    1.3.3 樹脂靜態(tài)吸附率測定

    稱取預(yù)處理過的6種樹脂各4.0 g裝入100 mL容量瓶中,按40(大孔吸附樹脂,g):1(生物堿,g)加入生物堿0.1 g,用50 mL甲醇溶解后置于振蕩器上振蕩,加快樹脂吸附。振蕩1 h放置48 h后,測定溶液中生物堿在最大吸收波長處的吸光度變化,靜態(tài)吸附率(%)計(jì)算見公式2。

    公式2中,A0為吸附前溶液中生物堿吸光度;A為吸附后溶液中生物堿吸光度。

    1.3.4 洗脫劑的篩選

    輻照后的樣品,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除氯仿,分別加入60%、70%、80%甲醇和60%、70%、80%、95%乙醇于離心管中,置于超聲儀中,25 ℃下超聲2 h后離心(3000 r·min?1,10 min)。取樣品上清液各0.5 mL于離心管中,稀釋20倍至10 mL,取1 mL稀釋液加三氯甲烷至5 mL,加入溴甲酚綠緩沖液和0.2 mol·L?1NaOH溶液各1 mL,搖勻后進(jìn)紫外分光光度計(jì)進(jìn)行200?800 nm的全波長掃描(參比液為各分離劑稀釋液),以吸光值來選擇洗脫劑。

    1.3.5 大孔樹脂純化

    裝柱、上樣和洗脫:取潔凈層析柱(規(guī)格:40 cm× 1.6 cm),用玻璃棒將AB-8與95%乙醇(超聲除氣泡)混合物分多次導(dǎo)流入層析柱,避免出現(xiàn)氣泡。樹脂預(yù)處理:裝柱后靜置2 h,用蒸餾水淋洗過夜,至洗出液無乙醇味,且洗出液與乙醇混合后無渾濁。取生物堿粗分離物,用0.5 mol·L?1HCL溶解后定容至100 mL,再用NaOH調(diào)pH為10.5后上樣,上樣后靜置2 h。考慮到蒸餾水與60%甲醇(pH=2.7)之間的過渡,我們采用20% 甲醇(pH=7.0)、40% 甲醇(pH=7.0)、60% 甲醇(pH=4.0)、60% 甲醇(pH=3.5)、60%甲醇(pH=2.7)各100 mL進(jìn)行梯度洗脫。

    接樣及檢測:在恒流泵流速600,自動(dòng)接收器接收間隔2 min 35 s/試管的情況下進(jìn)行洗脫,洗脫液用小管收集后加入溴甲酚綠緩沖液和0.2 mol·L?1NaOH溶液,進(jìn)行全波長掃描檢測。合并峰值較高的檢測液,即為純化后的生物堿,凍干備用。

    1.3.6 落花生莖葉生物堿定性定量分析

    對照品溶液制備:取膽堿對照品適量,精密稱定,配制成濃度為1.5、3、6、12、24 mg·mL?1的溶液,0.45 μm微孔過濾膜濾過。

    供試品溶液制備:取200 mg凍干后的落花生莖葉生物堿粉末,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加入1%鹽酸甲醇10 mL,超聲處理(功率100 W,溫度25 ℃)60 min,放冷,用1%鹽酸甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量,搖勻,0.45 μm微孔過濾膜濾過,取續(xù)濾液。

    色譜條件:色譜柱:C18柱(250 mm×4.60 mm,5 μm);流動(dòng)相:乙腈:0.05 mol·L?1磷酸二氫鉀(用磷酸調(diào)節(jié)pH=2.8)=1:1(內(nèi)含0.015 mol·L?1己烷基磺酸鈉);流速:1 mL·min?1;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:10 μL;檢驗(yàn)波長:304 nm。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同吸收劑量對生物堿提取效果的影響

    根據(jù)總生物堿標(biāo)準(zhǔn)曲線y=17.834x+0.0006,(R2=0.9999)計(jì)算樣品中生物堿含量。由圖1可知,總生物堿的含量隨著吸收劑量的增加,先上升后下降;在吸收劑量為 5 kGy時(shí)達(dá)到最高(7.970±0.117)%,與超聲波法提取結(jié)果(1.485±0.061)%相比,統(tǒng)計(jì)差異非常顯著(t檢驗(yàn),p<0.001);吸收劑量高于5 kGy后,總生物堿含量有所下降。這可能因?yàn)?,高能射線作用于溶劑三氯甲烷和體系中的水,產(chǎn)生Cl·、OH·和H·等自由基,與物質(zhì)作用發(fā)生降解、聚合或氧化等反應(yīng)。吸收劑量較小時(shí)以降解反應(yīng)為主,自由基與植物細(xì)胞壁中的纖維素和半纖維素反應(yīng),使之解離,促進(jìn)植物細(xì)胞中生物堿的溶出,因此總生物堿含量上升。吸收劑量增大后,以聚合反應(yīng)為主,堿基間相互結(jié)合形成新的物質(zhì),同時(shí)自由基與溶出的生物堿反應(yīng)形成醛、酮類物質(zhì)的氧化作用也存在,從而總生物堿含量下降;輻射劑量進(jìn)一步加大,聚合反應(yīng)和氧化反應(yīng)程度增加,生物堿含量則進(jìn)一步降低[9-10]。該結(jié)果表明常溫低劑量輻照,可促進(jìn)落花生莖葉溶液中功能物質(zhì)的溶出。

    圖1 超聲波法與吸收劑量對生物堿提取效果的影響Fig.1 Effect of ultrasonic method and absorbed dose on total alkaloid yield(***, p<0.001)

    2.2 大孔樹脂種類對生物堿靜態(tài)吸附率的影響

    大孔吸附樹脂是一種不含交換基團(tuán)的高分子吸附劑,由于所選用的單體分子結(jié)構(gòu)不同,大孔樹脂的極性也不同[11-13]。在本研究中我們選擇了極性、非極性、弱極性共6種大孔樹脂進(jìn)行實(shí)驗(yàn),樹脂的物理結(jié)構(gòu)參數(shù)及其吸附結(jié)果見表1。由表1可知,NKA-9的靜態(tài)吸附率較低,其它各種樹脂的差別不大。靜態(tài)吸附1 h,AB-8吸附后溶液在323 nm處靜態(tài)吸附率最高,生物堿吸附效果最好;靜態(tài)吸附48 h,波長323 nm處吸收峰消失,波長415 nm處,AB-8靜態(tài)吸附后溶液的吸附率依然最高,效果最好。結(jié)果表明,AB-8適合于分離純化生物堿類物質(zhì),故選擇AB-8樹脂為下一步層析用樹脂。

    表1 不同大孔樹脂對應(yīng)的生物堿靜態(tài)吸附率Table 1 Static adsorption rate of alkaloids by using different macroporous resin

    2.3 不同洗脫液對生物堿紫外吸收峰的影響

    根據(jù)圖2(A)和圖2(B)的結(jié)果,以甲醇和乙醇為洗脫液,最大吸收峰的波長集中在303?336 nm。60%甲醇或者70%乙醇為洗脫液時(shí)獲得落花生莖葉總生物堿的吸光值較高,說明其洗脫效果較好,我們采用60%甲醇進(jìn)行下一步提純。此外從圖2B可以看出,生物堿的吸收波長除了在303?336 nm外,在415 nm處也有吸收峰,雖然氯仿作為提取劑其吸收波長也為415 nm,但氯仿的毒性較大,所以在生物堿的洗脫純化時(shí)不采用。

    2.4 生物堿洗脫曲線及吸收峰

    通過結(jié)晶法純化生物堿,將含落花生莖葉生物堿的的甲醇溶液定量取出并減壓蒸干后,殘留物用0.5 mol·L?1的HCl溶解后,轉(zhuǎn)至分液漏斗,用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10.5,將溶液移入裝有樹脂的層析柱,然后洗脫。由圖3結(jié)果可知,在15 min和30 min處分別有2個(gè)洗脫峰,表明含有兩種生物堿或一種生物堿的兩種異構(gòu)體。60 min后的洗脫產(chǎn)物曲線峰值很小,即生物堿含量很少,所以忽略不計(jì)。根據(jù)圖4結(jié)果,落花生莖葉生物堿的最大吸收峰分別集中在330 nm和304 nm處。

    圖4 落花生莖葉生物堿在不同洗脫時(shí)間段的吸收峰Fig.4 Absorption peaks of AHSL alkaloids eluted in different time periods

    2.5 落花生莖葉中生物堿的HPLC檢測結(jié)果

    生物堿種類龐多,但鮮有關(guān)于落花生莖葉生物堿的研究報(bào)道,因此課題組在實(shí)驗(yàn)初期選擇了鹽酸小檗堿、花生堿、甜菜堿及膽堿進(jìn)行高效液相色譜比對分析。結(jié)果顯示,純化后的樣品中鹽酸小檗堿、花生堿、甜菜堿等成分的含量甚微,但含有膽堿。圖5為膽堿標(biāo)品、落花生莖葉生物堿HPLC色譜圖及膽堿純度視圖。

    由圖5A,膽堿標(biāo)品在色譜上呈現(xiàn)兩個(gè)峰,可能為膽堿的異構(gòu)體。出峰保留時(shí)間為2.152 min和2.987 min。由圖5B,落花生莖葉生物堿出峰保留時(shí)間為2.095 min和2.980 min,與圖3中兩個(gè)洗脫峰的結(jié)果相符;且與膽堿標(biāo)品HPLC色譜峰峰形及保留時(shí)間一致(允許變化5%),可判定為膽堿類物質(zhì)。

    圖5 膽堿標(biāo)品(A)、落花生莖葉生物堿(B)HPLC色譜圖及膽堿純度視圖(C)Fig.5 Choline standard (A), Arachis hypogaea L.stem and leaf alkaloids (B) and HPLC chromatogram purity view (C)

    根據(jù)膽堿標(biāo)準(zhǔn)曲線y=6923.5x+17059,R2=0.9995(線性范圍:0.75?24 mg·mL?1)可知,通過結(jié)晶法和大孔樹脂法純化的落花生莖葉膽堿的純度可達(dá)99.99%,得率約為2.61 g·kg?1花生莖葉。由圖5C可知膽堿在波長304 nm處,峰純度最高,樣品檢測波長進(jìn)一步確定。

    3 結(jié)論

    60Co γ-射線輻照法比超聲波法提取的落花生莖葉生物堿含量高,在吸收劑量為5 kGy時(shí)總生物堿含量可達(dá)(7.970±0.117)%。在生物堿純化方面,大孔樹脂AB-8的純化效果較好,洗脫溶媒為60%甲醇時(shí)洗脫效果較好,通過結(jié)晶法和大孔樹脂法純化,可使生物堿純度達(dá)99.99%以上。落花生莖葉生物堿中鹽酸小檗堿、花生堿、甜菜堿等成分含量甚微,主要為膽堿,其含量約為2.61 g·kg?1花生莖葉。該方法提取制備純化落花生莖葉生物堿效果好,工藝新穎高效,可用于工業(yè)化生產(chǎn)。

    1 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典 [M].下冊.上海: 上??茖W(xué)技術(shù)出版社, 1977: 2327.Jiangsu new medical college.Chinese medicine dictionary[M].Part Ⅱ, Shanghai, Shanghai Science and Technology Publishing House, 1977: 2327.

    2 ZU Xiaoyan, ZHANG Zhenya, XIONG Guangquan,et al.Sedative effects ofArachis hypogaeaL.stem and leaf extracts on sleep deprivation rats [J].Experimental and Therapeutic Medicine, 2013, 6: 601-605.

    3 ZU Xiaoyan, XIONG Guangquan, GENG Shengrong,et al.Arachis hypogaeaL.stem and leaf extracts improve sleep behaviors of pentobarbital-treated rats [J].Biomedical Reports, 2014, 2: 399-391.

    4 ZU Xiaoyan ZHANG Zhenya, LIU Jiqiang,et al.Sedative effects of peanut (Arachis hypogaeaL.) leaf aqueous extracts on brain ATP, AMP, Adenosine and Glutamate/GABA of rats [J].Journal of Biomedical Science and Engineering, 2010, 3: 268-273.

    5 尹永芹, 沈志濱.中藥化學(xué)成分提取分離方法的研究進(jìn)展 [J].中國藥業(yè), 2012, 21(2): 19-21.YIN Yongqin, SHEN Zhibin.Research on chemical composition of traditional chinese medicine Extraction methods [J].China Pharmaceuticals, 2012, 21(2): 19-21.

    6 楊杰, 王麗莉, 張鐵軍, 等.落花生莖葉化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, 41(26):10563-10566, 10608.YANG Jie, WANG Lili, ZHANG Tiejun,et al.Research progress of chemical constituents and pharmacological action of groundnut stems and leaves [J].Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2013, 41(26): 10563-10566, 10608.

    7 吳軍, 潘俊, 邵明玉, 等.一種采用輻照技術(shù)提高香辛料中總黃酮提取率的方法 [P].中國.CN101961357A,2011-02-02.WU Jun, PAN Jun, SHAO Mingyu,et al.A method using irradiation technology to improve the extraction rate of total flavonoids in spices [P].China.CN101961357A,2011-02-02.

    8 肖文軍, 盛達(dá)成, 龔志華, 等.一種采用輻照預(yù)處理輔助提制五倍子單寧酸的方法 [P].中國.CN103275136A, 2013-09-04.XIAO Wenjun, SHENG Dacheng, GONG Zhihua,et al.A irradiation assisted method to extract tannic acid from gallnut [P].China.CN103275136A, 2013-09-04.

    9 施培新.食品輻照加工原理與技術(shù) [M].北京: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社, 2004: 356-358.SHI Peixin.Food irradiation processing principles and technology [M].Beijing: Chinese Agricutual Science and Technology Press, 2004: 356-358.

    10 汪勛清, 哈益明, 高美須.食品輻照加工技術(shù) [M].北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005 WANG Xunqing, HA Yiming, GAO Meixu.Food Irradiation Processing Technology [M].Beijing:Chemical Industry Press, 2005.

    11 王振宇, 田福.大孔樹脂吸附純化藍(lán)靛果紅色素的研究 [J].食品研究與開發(fā),2008, 29(8): 184-188.WANG Zhenyu, TIAN Fu.Study on the adsorption and separating of the red pigment from Lonicera edulis tuacz with macroporous resin [J].Food Research and Development, 2008, 29(8): 184-188.

    12 高虹, 張潔, 黎碧娜, 等.大孔吸附樹脂分離紫荊花紅色素 [J].華西藥學(xué)雜志, 2005, 20(4): 302-305.GAO Hong, ZHANG Jie, LI Bina,et al.Separating the pigment from the flower of Bauhinia aureal lelv.by macroporous resin [J].West China Journal of Pharmaceutical Sciences, 2005, 20(4): 302-305.

    13 王瑞芳, 歐來良, 孔德領(lǐng), 等.大孔吸附樹脂對喜樹果中喜樹堿和喜果苷的分離純化研究 [J].中草藥, 2005,36(6): 849-851.WANG Ruifang, OU Lailiang, KONG Deling,et al.Isolation and purification of camptothecine and vincoside-lactam fromCamptotheca acuminatafruit by macroporous adsorption resins [J].Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2005, 36(6): 849-851.

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