牛藍(lán)舌病的診斷及預(yù)防

韓 磊

山東省濱州市博興縣龐家鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，山東博興 256500

牛藍(lán)舌病是由茨城病病毒引起牛的一種急性、熱性傳染病，也有人稱該病為牛茨城病，臨床主要癥狀為高熱、消瘦、腹瀉、呼吸道消化道黏膜紅腫潰瘍。牛藍(lán)舌病呈世界范圍內(nèi)流行，給世界范圍內(nèi)的養(yǎng)殖企業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

1 病 原

牛藍(lán)舌病（bluetongue-like disease，BLD）的病原為茨城病病毒（ibaraki disease virus，IDV），其隸屬于呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬。IDV 為RNA 病毒，IDV 的病毒粒子直徑約為52 nm，病毒粒子外層具有衣殼，沒有囊膜，病毒粒子呈圓形。IDV 對酸性環(huán)境十分敏感，但是對氯仿和乙醚具有抵抗力。給予IDV 56 ℃處理30 min 后，IDV 的感染性明顯下降，但是并不能將IDV 完全殺死。

2 發(fā)病機(jī)理

牛藍(lán)舌病是由于牛被感染茨城病病毒的庫蠓叮咬后，茨城病病毒通過在牛的淋巴系統(tǒng)中大量復(fù)制繁殖后，茨城病病毒在牛體內(nèi)的脾、肺和其他淋巴腺體中繼續(xù)復(fù)制和繁殖。茨城病病毒病毒的高發(fā)期在感染病毒后的14～18 d。

3 流行病學(xué)

自然感染條件下，牛是BLD 的唯一易感動(dòng)物，尤其是日本肉牛對IDV 具有很高的易感性。IDV 的主要傳染源為患病牛、帶有IDV 的?；驇Ф镜木?。該病也可通過庫蠓和伊蚊（中間媒介）進(jìn)行傳播，同時(shí)也可經(jīng)過垂直傳播傳染給胎兒。此外，因?yàn)閹祗泛鸵廖每梢宰鳛镮DV 的傳播媒介，所以在每年的8-11月，牛藍(lán)舌病的發(fā)病率較其他月份高[1]。

在牛藍(lán)舌病病毒傳播過程中，處于病毒血癥期間的公?？赏ㄟ^精液進(jìn)行間歇式排毒。有研究表明，公牛的精液中可以分離出低濃度的病毒，不能夠分離出高濃度的病毒，且病毒只有在公牛出現(xiàn)病毒血癥時(shí)排出。感染病毒的公牛通過精液間歇式排毒傳給母牛，母牛產(chǎn)下的牛犢無明顯的異常表現(xiàn)，但可能會(huì)出現(xiàn)病毒感染。

4 臨床癥狀

IDV 感染牛后，一般潛伏期在3～5 d。IDV 的陽性牛在患病初期出現(xiàn)體溫突然升高癥狀，體溫可高達(dá)40 ℃左右，發(fā)燒癥狀一般可持續(xù)3 d 左右，同時(shí)伴有精神沉郁、食欲不佳、被毛粗亂、行動(dòng)遲緩?；疾∨?huì)出現(xiàn)流淚、眼結(jié)膜水腫現(xiàn)象，隨著病情加重，眼角有膿性分泌物、眼部紅腫、結(jié)膜外翻。病牛還會(huì)出現(xiàn)流涎，流出呈泡沫樣的黏稠液體，鼻鏡、鼻腔內(nèi)有大量黏稠的鼻液?？谇槐乔坏酿つこ溲?、潰瘍、壞死。隨后，當(dāng)病牛的口腔和鼻腔癥狀消退，病牛開始出現(xiàn)咳嗽，呼吸變得急促，吞咽困難。病牛精神沉郁，有些牛也會(huì)出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹現(xiàn)象。鼻鏡、外陰、蹄部周圍發(fā)生潰瘍和壞死。隨著病情的發(fā)展，上述癥狀輕微后，病牛會(huì)出現(xiàn)呼吸困難、嘔吐，咽喉部麻痹現(xiàn)象，在病牛飲水時(shí)會(huì)出現(xiàn)通過其口鼻流出來現(xiàn)象，從而發(fā)生吸入性的肺炎，治愈無效后死亡[2]。

5 病理變化

IDV 侵入到動(dòng)物機(jī)體后可引發(fā)病牛發(fā)生以下病理變化：皮下組織干燥，可視黏膜潰瘍，出血；食道內(nèi)會(huì)有水樣的內(nèi)容物，食道黏膜出現(xiàn)紅腫；胃內(nèi)容物呈現(xiàn)干燥的塊狀，出現(xiàn)潰瘍，有出血點(diǎn)；真胃發(fā)生明顯的水腫，出血，潰瘍；食管出血，水腫。因?yàn)檎`咽而發(fā)生死亡的病例肺臟出血，壞疽性肺炎，有的牛四肢會(huì)出現(xiàn)水腫。病理組織學(xué)檢查可見：食管肌肉呈現(xiàn)玻璃樣的病變，同時(shí)伴發(fā)纖維細(xì)胞增生現(xiàn)象；肝臟可見出血性的壞死灶，心臟外膜出血，心肌壞死，腎臟出血[3]。

6 診 斷

對于牛的藍(lán)舌病診斷，可以根據(jù)其流行特點(diǎn)、臨床癥狀和病理變化進(jìn)行初步診斷，具體的診斷需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，如病原學(xué)檢查、血清學(xué)試驗(yàn)、分子生物學(xué)診斷等。比較常用的方法是血清學(xué)診斷，其包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。最為準(zhǔn)確的診斷方法為分子生物學(xué)診斷，可以使用DNA 探針技術(shù)進(jìn)行。

6.1 病原學(xué)檢查

1）病料采集牛的全血中并加入2 U 肝素/mL；采集患病動(dòng)物的肝臟、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)和精液等置于低溫轉(zhuǎn)運(yùn)箱中，以上樣品均需在24 h 內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室備檢。

2）將患病牛的脾臟、細(xì)胞培養(yǎng)物或雞胚組織制成的切片經(jīng)過負(fù)染后用電鏡進(jìn)行直接觀察。電鏡下IDV 為直徑55～70 nm 的具有雙層蛋白外膜的球形[4]。

3）將分離的病毒接種在綿羊腎單層細(xì)胞上，綿羊腎單層細(xì)胞在48 h 左右會(huì)發(fā)生細(xì)胞病變，3～4 d綿羊腎單層細(xì)胞全部感染并出現(xiàn)脫落[5]。此外，將分離的病毒接種在非洲綠猴細(xì)胞后會(huì)出現(xiàn)空斑，而加入抗病毒血清能夠抑制空斑的形成。

4）將IDV 經(jīng)腦對幼齡小鼠進(jìn)行感染，小鼠5～6 d 出現(xiàn)致死性腦炎，并將采集的病毒液分別經(jīng)靜脈或皮內(nèi)接種易感羊和免疫羊，3～4 d 后易感羊出現(xiàn)典型的藍(lán)舌病變癥狀，而免疫羊無明顯癥狀。

6.2 血清學(xué)試驗(yàn)

1）瓊脂糖免疫擴(kuò)散試驗(yàn)。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)為可溶性抗原與相應(yīng)抗體在含有電解質(zhì)的半固體凝膠（瓊脂或瓊脂糖）中進(jìn)行的一種沉淀試驗(yàn)[6]。瓊脂糖免疫擴(kuò)散試驗(yàn)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)和檢測量大的特點(diǎn)。

2）中和試驗(yàn)。中和試驗(yàn)是利用同一病毒的不同型的毒株或不同型標(biāo)準(zhǔn)血清，即可測知相應(yīng)血清或病毒的型[7]。中和試驗(yàn)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)和準(zhǔn)確性強(qiáng)的特點(diǎn)。

3）過氧化物酶染色法。過氧化物酶染色法是利用標(biāo)記抗體來檢測蛋白抗原，過氧化物酶染色法包括間接過氧化物酶檢測法、熒光抗體檢測法及過氧化物抗過氧化物酶檢測法3 種方法[8]。過氧化物酶染色法具有靈敏度高和特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。

4）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。ELISA 是同將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上，再進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量方法[9]。ELISA 具有靈敏度高、價(jià)格低廉、特異性強(qiáng)和重復(fù)性好的特點(diǎn)。

6.3 分子生物學(xué)試驗(yàn)

1）RT-PCR 檢測技術(shù)。PCR 又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其主要原理是：首先將IDV 的RNA 通過逆轉(zhuǎn)錄成cDNA 后，然后通過擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA 片段[10]。RT-PCR 檢測技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、產(chǎn)率高和重復(fù)性好的特點(diǎn)。

2）核酸分子雜交技術(shù)。核酸分子雜交技術(shù)是檢測通過堿基互補(bǔ)配對原則將不同來源的DNA 單鏈與RNA 鏈結(jié)合的病原核酸。核酸分子雜交技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)和重復(fù)性好的特點(diǎn)。

7 防控措施

BLD 是一種非接觸性的傳染病，傳播途徑為蚊蟲叮咬，可以通過血液或精液進(jìn)行傳播。養(yǎng)殖戶對飼養(yǎng)場中的蚊蟲要嚴(yán)格進(jìn)行撲滅，防止中間宿主進(jìn)行病毒的擴(kuò)散，可以實(shí)現(xiàn)對BLD 的有效控制。可以使用除蟲菊酯干粉與煤油混合制成溶液或0.2%除蟲菊酯煤油溶液進(jìn)行消滅庫蠓，一般夏季間隔1 周要進(jìn)行全場消毒1 次。牛體表消毒可用1.25%馬拉硫磷或0.05%蠅毒磷體表上進(jìn)行噴淋，可以有效防止庫蠓和伊蚊的叮咬。養(yǎng)殖戶應(yīng)堅(jiān)持自繁自養(yǎng)原則，如必須引種的話，嚴(yán)禁在IDV 流行的國家和地區(qū)引進(jìn)牛，要從正規(guī)渠道引進(jìn)，對于引進(jìn)的牛要有合格的檢疫證明，引進(jìn)牛時(shí)同樣也要嚴(yán)格進(jìn)行檢疫，引進(jìn)后隔離飼養(yǎng)至少半年以上，臨床無癥狀并且檢測結(jié)果為陰性的牛才能與健康牛進(jìn)行混群飼養(yǎng)，帶毒的牛堅(jiān)決不允許進(jìn)入飼養(yǎng)場；養(yǎng)殖戶應(yīng)該加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保持牛舍的環(huán)境衛(wèi)生，定期消毒，改善牛群的生活環(huán)境；定期進(jìn)行檢查，對于檢測結(jié)果陽性牛，堅(jiān)決進(jìn)行撲殺，并進(jìn)行無害化處理，是徹底凈化疾病的根本措施[11]。

8 治 療

目前，針對牛藍(lán)舌病市場上尚無有效的治療藥物，獸醫(yī)臨床上主要采取的是對癥療法進(jìn)行治療。如磺胺類藥物可有效防治患有牛藍(lán)舌病的患病牛發(fā)生繼發(fā)性感染，但患病牛應(yīng)避免日光照射。當(dāng)前控制牛藍(lán)舌病非常困難，養(yǎng)殖戶應(yīng)聯(lián)系當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門執(zhí)業(yè)獸醫(yī)，并聽取獸醫(yī)的建議和對策，做出科學(xué)合理的處置。此外，養(yǎng)殖戶在進(jìn)行引種時(shí)，嚴(yán)禁從有該病流行的國家或地區(qū)引進(jìn)種畜、凍精和胚胎。

9 小 結(jié)

對于牛藍(lán)舌病的預(yù)防，要本著“防大于治”的原則。養(yǎng)殖戶要根據(jù)自身養(yǎng)殖場的狀況，制定科學(xué)合理的飼養(yǎng)管理方案。預(yù)防最重要的一點(diǎn)是切斷中間宿主的傳播和擴(kuò)散途徑。對于檢測結(jié)果陽性的牛，要堅(jiān)決進(jìn)行撲殺，并進(jìn)行無害化處理。牛養(yǎng)殖過程要積極預(yù)防此病，降低此病的發(fā)生，促進(jìn)養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展。筆者建議：1）養(yǎng)殖戶應(yīng)向牛群的飼料中添加維生素、礦物質(zhì)等，以此來提高牛群的抵抗力。2）養(yǎng)殖戶還應(yīng)做好養(yǎng)殖場飼養(yǎng)管理，有效地做好免疫規(guī)劃工作，以便更大程度地降低牛藍(lán)舌病的發(fā)病率和死亡率。3）針對患病?；虿∷琅＃B(yǎng)殖戶應(yīng)進(jìn)行焚燒或深埋等無害化處理，嚴(yán)禁販賣。4）養(yǎng)殖戶應(yīng)堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，杜絕引種，如在必須引進(jìn)種牛時(shí)，養(yǎng)殖戶應(yīng)加強(qiáng)檢疫檢驗(yàn)工作和隔離工作。