把放久了的包埋組織塊放在濕盒里濕潤(rùn)可避免或減少組織切片碎裂

楊正偉，向 宇，郭 洋，彭 彬，白桂芹，董興堂，黃小麗，馬 利，陳 靜，杜 馨，張思航

(川北醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)研究所，四川 南充 637000)

1 經(jīng)驗(yàn)

2013年4月，我們擬切七八十個(gè)甲基丙烯酸樹(shù)脂(2-hydroxyethyl methacrylate，德國(guó)Leica生產(chǎn))包埋的大鼠眼球組織塊，這些組織塊已包埋2年多，切片時(shí)遇到嚴(yán)重問(wèn)題：組織塊的脆性都大，一切片就碎裂，無(wú)法切得完好的組織切片。我們思考很久后想出一個(gè)辦法：先把樹(shù)脂塊放入濕盒過(guò)夜(半天至一天)，即在一密閉的盒子里盛水，水面之上放一有孔的隔層板，板上放樹(shù)脂塊，然后再切片。果然有效，所有的組織塊就這樣都切得完好的切片(厚度15 μm)。

2014年2月，我們要切二三百個(gè)石蠟(德國(guó)Leica生產(chǎn))包埋的金黃地鼠胰腺和肝臟組織塊。它們已包埋3年多，且包埋后不久就切過(guò)(切片厚度7 μm)，當(dāng)時(shí)切片完全沒(méi)問(wèn)題。但這次再切這些組織塊時(shí)問(wèn)題嚴(yán)重，一切就粉碎。基于上面的經(jīng)歷，我們?cè)囍咽瀴K放入濕盒三天左右，且把石蠟浸在水里，結(jié)果也出乎意料的好：都切得完好的切片(厚度5 μm)。

最近，我們又要切五六十個(gè)石蠟包埋的大鼠腎臟組織塊。它們已包埋6年半，2年半前曾切過(guò)(切片厚度7 μm)，當(dāng)時(shí)切片問(wèn)題不大，部分組織塊雖有些脆，但向石蠟塊切面哈氣(用口吹氣)之后，還是切得不錯(cuò)的切片。但這次切片(厚度10 μm)問(wèn)題較大，組織碎裂嚴(yán)重。依樣畫(huà)葫蘆，我們把石蠟塊放入濕盒幾天，結(jié)果也避免或減少了切片碎裂。

2 討論

我們的上述經(jīng)驗(yàn)表明，組織塊放置或保存(一般放在切片盒里，注意勿讓組織塊受壓變形)幾年后會(huì)變干、變脆。因此切片時(shí)組織易碎裂，難以切得完整的組織切片。把組織塊放在濕盒里濕潤(rùn)過(guò)夜或幾天的方法，可部分或完全解決這個(gè)問(wèn)題。

筆者所在實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期從事形態(tài)定量研究，經(jīng)常要成批的包埋(尤其是用甲基丙烯酸樹(shù)脂)組織塊并制作質(zhì)量要求高的切片[1]，但很少遇到上述嚴(yán)重問(wèn)題?？赡苁且?yàn)槲覀兺ǔＧ械氖恰靶迈r”組織塊，即包埋后幾個(gè)月之內(nèi)就要切片。這說(shuō)明，組織變脆可能更常見(jiàn)于“陳舊”的組織塊。難怪文獻(xiàn)總結(jié)的石蠟切片的十多個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題中，也沒(méi)有包括這個(gè)問(wèn)題[2]。

不過(guò)，組織脆性增加、切片易碎裂的問(wèn)題，實(shí)踐中可能并非不常見(jiàn)，也未必只見(jiàn)于放久了的組織塊。也許，由于問(wèn)題不那么嚴(yán)重，或由于同時(shí)包埋、同時(shí)切片的組織塊少，對(duì)這個(gè)問(wèn)題不易引起重視。我們常見(jiàn)或常聞切片中這樣那樣的小竅門(mén)，例如哈氣(上述)，用冰塊冰或用濕布擦(濕化)石蠟塊切面，把石蠟塊切面浸泡在溫水里三五分鐘[3]，甚至把整個(gè)石蠟塊冰凍之后再切片。如這些方法有效，它實(shí)際上說(shuō)明組織塊有些干燥或變脆了，但是人們可能多半會(huì)把這個(gè)問(wèn)題歸咎于脫水、透明、浸蠟或包埋過(guò)程[4]，不會(huì)想到用濕盒來(lái)濕潤(rùn)整個(gè)組織塊的解決辦法。最近，我們用石蠟包埋了六七十個(gè)大鼠脊髓組織塊，包埋后二三個(gè)月之內(nèi)就切片，每塊都要切上百?gòu)堖B續(xù)切片(厚度14 μm)。我們后來(lái)發(fā)現(xiàn)，為保證連續(xù)切片的質(zhì)量，切片前先把石蠟塊放入濕盒3～7 d的方法很有幫助。

話又說(shuō)回來(lái)，濕潤(rùn)組織塊雖有利于切片，但未必有利于組織塊的長(zhǎng)期保存。從常識(shí)講，干燥才利于組織本身的保存。事實(shí)上，筆者之一(楊正偉)一二十年前保存甲基丙烯酸樹(shù)脂包埋的組織塊，就要在盒子里放入干燥硅膠顆粒，切片前一二天才把組織塊拿出來(lái)。此外，組織處理、包埋介質(zhì)甚至切片刀等方面的問(wèn)題也可能引起切片時(shí)的組織碎裂，組織的質(zhì)地以及組織塊的大小想必也與切片脆裂有關(guān)，這樣的問(wèn)題就未必能用濕潤(rùn)組織塊的方法很好或有效的解決。例如，我們最近在切一些組織塊時(shí)又注意到，濕潤(rùn)石蠟塊使切片好切了，但換用更鋒利的刀片才使蠟帶更成形——更易切取連續(xù)切片。

【參考文獻(xiàn)】

[1]楊正偉.生物組織形態(tài)定量研究基本工具:實(shí)用體視學(xué)方法[M].北京:科學(xué)出版社,2012.

[2]趙 熒,唐軍民.組織切片技術(shù)[A].見(jiàn):李繼承(主編).組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010：13-20.

[3]馬新峰,趙利萍.影響免疫器官石蠟切片質(zhì)量的因素分析[J].河南職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,19(6):586-587.

[4]侯春春，徐 水.淺析影響石蠟切片質(zhì)量的關(guān)鍵因素[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2009,25(23):94-98.