腫節(jié)風總黃酮對阿糖胞苷誘發(fā)小鼠血小板減少癥模型的影響※

何志堅 劉海云

（1江西省腫瘤醫(yī)院放療科，南昌 330029；2江西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南昌 330004）

腫節(jié)風是金粟蘭科植物草珊瑚屬植物，又名草珊瑚，九節(jié)茶，味苦、辛，性平，歸心、肝經(jīng)，具有活血化瘀、消腫散結(jié)、主骨生髓、涼血止血的功效，主要用于血熱妄行，原發(fā)性、繼發(fā)性紫癜。藥理作用研究表明腫節(jié)風主要成分總黃酮有抑制腫瘤、廣譜抗菌、抑制免疫、減輕化療藥物對骨髓系統(tǒng)的抑制，恢復(fù)骨髓巨核系造血功能等作用，血康口服液治療特發(fā)性血小板減少性紫癜報道較多，總有效率為84.3%左右。目前應(yīng)用腫節(jié)風能有效治療特發(fā)性血小板減少性紫癜已經(jīng)成為臨床共識，但應(yīng)用腫節(jié)風治療化療引起血小板減少癥的臨床研究甚少[1-2]。

1 材料與方法

1.1藥材制備 0．9%氯化鈉注射液，腫節(jié)風總黃酮（ZJF）使用前用蒸餾水配制，按腫節(jié)風片的用藥劑量配成 6.5、 13、 26mg/ml。

1.2 動物 昆明種3月齡小鼠60只，體質(zhì)量22～25g，雌雄各半。小鼠隨機分為6組：正常對照組、模型組、腫節(jié)風總黃酮低中高劑量組和陽性藥強的松龍組，每組10只。

1.3 實驗方法 除正常對照組外，其余5組均通過腹腔注射阿糖胞苷建立血小板減少癥小鼠模型。各給藥組灌胃給藥，正常對照組、模型組灌等體積的生理鹽水，各組每次灌胃量均為0.1ml/10g，每天2次，強的松龍配成 2mg/ml，總黃酮配成 6.5、13、26mg/ml的低、中、高劑量，從開始腹腔注射阿糖胞苷時各給藥組同時灌胃給藥，第9天，將各組動物禁食12小時。第10天，稱體重、給藥1小時后小鼠眼眶靜脈取血，置于室溫靜置 1h，3000r/min離心20分鐘，取上清，-20℃保存作外周血象檢測備用，最后頸椎脫臼處死小鼠。

1.4 觀察指標 觀察內(nèi)容包括：外周血象檢測、骨髓病理切片及骨髓涂片檢測腫節(jié)風總黃酮對體內(nèi)巨核細胞的影響。觀察外周血血小板數(shù) （PLT）、血小板平均體積 （MPV）、 紅細胞數(shù) （RBC）、 血紅蛋白含量（HGB）和白細胞數(shù) （WBC）的變化。1.5統(tǒng)計學(xué)分析 研究中所得到的相關(guān)數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件進行處理分析，連續(xù)性變量以均數(shù)±標準差表示，組間對比應(yīng)用兩獨立樣本計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

小鼠經(jīng)阿糖胞苷造模后，模型組PLT顯著低于正常對照組，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；腫節(jié)風總黃酮中劑量組、陽性藥強的松龍組PLT顯著高于模型組，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；陽性藥強的松龍組WBC顯著低于正常對照組，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；而各組MPV、RBC、HGB與正常對照組相比，數(shù)據(jù)差異無顯著性 （P＞0.05）， 見表 1。

表1 各組小鼠外周血象的變化

表1 各組小鼠外周血象的變化

注：①與正常對照組相比，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；②與模型組相比，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）

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3 討論

血小板減少現(xiàn)在已經(jīng)成為臨床化療常見的副作用，迄今現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對化療引起血小板減少癥的防治不甚理想，作用明顯且副作用少的藥物少之又少[5]。而中藥卻有廣闊的前景和優(yōu)勢。

目前西醫(yī)對化療產(chǎn)生的血小板減少癥多采用輸注血小板，但療效并不理想，且反復(fù)輸注會產(chǎn)生抗血小板抗體而影響療效，另外還增加了血源性感染 （如乙肝、丙肝、AIDS）的機會。隨著基因重組技術(shù)的發(fā)展，臨床還經(jīng)常足時、足量應(yīng)用巨核細胞正向調(diào)節(jié)因子TPO和IL-11，TPO能特異性地刺激巨核系祖細胞增殖分化成熟并產(chǎn)生血小板，但其對巨核細胞成熟釋放血小板的最終生成過程作用更為強烈，可能誘發(fā)血小板聚集、黏附，影響到正常的凝血和止血功能，且反復(fù)使用TPO會產(chǎn)生抗體，直接影響藥物的療效。在美國，TPO因出現(xiàn)深部靜脈血栓等嚴重不良反應(yīng)而被迫停止了臨床試驗[4]。IL-11是一種血小板生長因子，可直接刺激巨核系祖細胞增殖分化成熟，加速體內(nèi)血小板的生成，是迄今FDA批準的唯一一種用來防治血小板減少癥的藥物，但IL-11易產(chǎn)生一些不良反應(yīng)，如水腫、頭痛、發(fā)熱、肌肉骨骼疼痛及中性粒細胞減少性發(fā)熱、心動過速等，而且重組人IL-11價格昂貴，臨床常規(guī)使用也極大地加重了患者的經(jīng)濟負擔。輸注血小板和各類造血因子的使用，雖然也能取得一定的臨床效果，但仍存在造血恢復(fù)時間較長，并發(fā)癥多的問題，威脅患者治療過程的安全性，并降低化療的效果，影響患者的預(yù)后。中醫(yī)藥以其獨特的理論與療效在治療化療引起血小板減少癥方面有廣闊的前景及優(yōu)勢?；熞鹧“鍦p少癥歸屬于 “虛勞”、“血證”、 “外感發(fā)熱”或 “內(nèi)傷發(fā)熱”等病證門類，以熱、虛、瘀為主要病機特點，以扶正祛邪、益氣養(yǎng)陰、調(diào)補脾腎、清熱解毒涼血為治則[5]。

本試驗利用阿糖胞苷建立了化療后血小板減少小鼠模型，研究腫節(jié)風總黃酮對化療后血小板減少小鼠模型的治療效果，為治療化療引起血小板減少癥提供新的思路，為開發(fā)腫節(jié)風治療化療引起血小板減少癥提供科學(xué)依據(jù)，并研究其作用機制[6-7]。

本研究結(jié)果顯示，小鼠經(jīng)注射阿糖胞苷造模后，模型組PLT顯著低于正常對照組，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；腫節(jié)風總黃酮中劑量組、陽性藥強的松龍組PLT顯著高于模型組，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；陽性藥強的松龍組WBC顯著低于正常對照組，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）；而各組MPV、RBC、HGB與正常對照組相比，數(shù)據(jù)差異無顯著性 （P＞0.05）。結(jié)合研究結(jié)果認為，腫節(jié)風總黃酮中劑量、陽性藥強的松龍具有提升PLT功效，同時腫節(jié)風總黃酮中劑量、陽性藥強的松龍可實現(xiàn)小鼠模型PLT回到正常水平，即腫節(jié)風總黃酮作用部位為導(dǎo)致血小板減少的有效環(huán)節(jié)，本次研究結(jié)果與相關(guān)文獻報道相符[8-9]。

總而言之，阿糖胞苷能夠有效建立小鼠血小板減少模型，腫節(jié)風總黃酮能夠明顯對血小板起到提升作用。

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