表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)2型糖尿病大鼠生化指標(biāo)的影響

曹弟勇，紅日木沙，安紅梅，熊 琪，沈 俊，李陽(yáng)友，項(xiàng) 濤，劉 華，鄭 倩

(川北醫(yī)學(xué)院 1.藥理學(xué)教研室；2.2012級(jí)臨床醫(yī)療系；3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心；4.機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心，四川 南充 637100)

近年來(lái)，糖尿病的發(fā)病率呈顯著上升的趨勢(shì)，已成為威脅人類健康的主要疾病之一，我國(guó)糖尿病患者達(dá)到9.6%，總?cè)藬?shù)已經(jīng)超過(guò)7千萬(wàn)，成為糖尿病人口最多的國(guó)家[1]。目前，藥物治療多采用口服降糖藥(磺脲類、雙胍類)或注射胰島素等方法，這雖然可以有效地降低血糖，但會(huì)導(dǎo)致糖尿病患者產(chǎn)生耐藥性，引起低血糖、合并肝、腎功能降低等多種不同程度的毒副作用，加速了糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。因此研究天然降血糖活性成分用以開發(fā)降血糖藥物具有重要意義。

表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(epigollatecatechin gallate,EGCG)是茶葉特有的兒茶素，是茶多酚的主體部分，研究發(fā)現(xiàn)，EGCG對(duì)癌癥、肥胖、糖尿病、心血管疾病都具有預(yù)防功效，已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)。近來(lái)研究認(rèn)為，EGCG可以降低血糖和胰島素水平[2-3]，但是其對(duì)血液脂類代謝、肝功和腎功影響的報(bào)道較少，本課題采用鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)聯(lián)合高脂飲食復(fù)制2型糖尿病大鼠模型，EGCG治療4周，測(cè)定大鼠血液生化指標(biāo)，觀察肝功與腎功變化。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物與試劑

3月齡雄性Wistar大鼠，一級(jí)，重量(195±16)g。常規(guī)飼料：57%碳水化合物，22%蛋白質(zhì)，6%脂肪，8%纖維素，7%其它成分。高能飼料(60%常規(guī)飼料，20%蔗糖，15%豬油，5%膽固醇)。動(dòng)物和飼料均由川北醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供。EGCG(上海雅吉，A-0159)，鏈脲佐菌素(STZ,Sigma)。

1.2 動(dòng)物模型建立與分組治療

T2DM大鼠模型的復(fù)制參照本實(shí)課題組既往方法[4]，高能飼料喂養(yǎng)大鼠4周，空腹12 h后一次性腹腔注射STZ 25 mg·kg-1，STZ臨時(shí)用pH=4.2的枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液配成2.5%的終濃度。對(duì)照組大鼠用等量緩沖液處理，繼續(xù)高能飼料喂養(yǎng)4周后，采尾靜脈血檢測(cè)空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)，以FBG>7.8 mmol·L-1作為T2DM模型成功的判斷標(biāo)準(zhǔn)[5-6]。

隨機(jī)把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為五組(每組n=8)：正常對(duì)照組(NOR)、模型對(duì)照組(MOR)、EGCG低劑量治療組(EGCG1)、EGCG中劑量治療組(EGCG2)、EGCG高劑量治療組(EGCG3)。EGCG1組每日上午一次性腹腔注射EGCG劑量為1 mL·kg-1·d-1，EGCG2組注射劑量為2 mL·kg-1·d-1，EGCG3組注射劑量為5 mL·kg-1·d-1，模型對(duì)照組每次給予等量生理鹽水處理。動(dòng)物飼養(yǎng)于川北醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼養(yǎng)室，自由飲水，治療期間，全部大鼠常規(guī)飼料飼養(yǎng)。飼養(yǎng)期間定期檢測(cè)動(dòng)物空腹血糖水平。8周后，除去死亡動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常組存活8只，模型組存活7只，EGCG1存活7只，EGCG2存活8只，EGCG3存活8只，將實(shí)驗(yàn)大鼠于空腹12 h，心臟采血制備血清標(biāo)本，采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、尿素氮(UREA)，肌酐(CREA)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 大鼠的一般癥狀和體征變化

與正常對(duì)照組大鼠比較，建立的T2DM模型大鼠體重明顯增加，并出現(xiàn)腹型肥胖和多飲、多食、多尿的癥狀，毛發(fā)色澤黯淡，精神萎靡，活動(dòng)減少；EGCG干預(yù)4周后，大鼠精神狀態(tài)、反應(yīng)、毛色、尿量和飲食等得到明顯改善。

2.2 血清血脂水平的變化

結(jié)果見表1，模型組TG、TCHO比正常情況高，與正常組相比，TG明顯增高P<0.01,TCHO高于正常組，P<0.05，提示糖尿病大鼠有血脂紊亂的表現(xiàn)。給予四周不同濃度EGCG治療后，于模型組相比，TG降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TCHO降低，但是低濃度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，高濃度組有差異(P<0.05)。

表1 EGCG干預(yù)各組大鼠血脂的變化

*P<0.01，與NOR組比較；#P<0.05，△P<0.01與MOR組比較。

2.3 血清肝功能指標(biāo)的變化

結(jié)果見表2，模型組AST、ALT高于正常組，可見糖尿病大鼠肝臟功能有損傷，EGCG治療后，AST、ALT均有不同程度降低，低濃度組與模型組相比P<0.05，中、高濃度組與模型組相比P<0.01，EGCG對(duì)糖尿病大鼠肝臟功能有保護(hù)作用。

表2 EGCG干預(yù)各組大鼠AST、ALT的變化

*P<0.01，與NOR組比較；#P<0.05，△P<0.01與MOR組比較。

2.4 血清腎功能指標(biāo)的變化

結(jié)果見表3，模型組UREA、CREA高于正常組，可見糖尿病大鼠腎臟功能有損傷，EGCG治療后，UREA、CREA均有不同程度降低，低濃度組與模型組相比P<0.05，中、高濃度組與模型組相比P<0.01，提示EGCG可以保護(hù)2型糖尿病大鼠腎臟功能。

表3 EGCG干預(yù)各組大鼠UREA、CREA的變化

*P<0.01，與NOR組比較；#P<0.05，△P<0.01與MOR組比較。

3 討論

STZ是一種含亞硝基的化合物，具有抗菌、抗腫瘤和致糖尿病的作用，對(duì)胰島B細(xì)胞具有高度選擇性的毒性作用，STZ聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)動(dòng)物模型已經(jīng)成為常用的2型糖尿病的造模方法[7-9]。該模型能夠較好地評(píng)價(jià)治療型糖尿病的藥物以及進(jìn)行型糖尿病病理機(jī)理和糖尿病并發(fā)癥相關(guān)方面的研究，具備方法簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、節(jié)省時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)。

2型糖尿病的主要特征為胰島素抵抗和胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足，由此導(dǎo)致糖、蛋白質(zhì)和脂肪代謝紊亂。本研究結(jié)果也證實(shí)，2型糖尿病大鼠血脂代謝紊亂，血清中TG和TCHO比正常對(duì)照顯著增加，而使用EGCG干預(yù)后無(wú)論是低濃度或者是高濃度TG可明顯降低，EGCG可以降低血清中TG含量；不過(guò)低濃度組EGCG對(duì)TCHO不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是高濃度組EGCG可以降低大鼠血清中TCHO水平,提示EGCG可以改善脂代謝。Shimada等[10]在對(duì)非肥胖糖尿病Kakizaki大鼠研究中也證實(shí)，EGCG可以降低其TG的水平，認(rèn)為與提高脂聯(lián)素水平，改善肝胰島素抵抗有關(guān)。

尿素氮和肌酐是蛋白質(zhì)代謝的終末產(chǎn)物，測(cè)定其含量可以反映腎臟功能，2型糖尿病大鼠尿素氮和肌酐明顯增加，EGCG使用后，均可以降低二者的含量，且有劑量依賴性，說(shuō)明EGCG有保護(hù)腎臟功能的作用，其機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

ALT、AST可以反映肝臟功能，在2型糖尿病大鼠中，含量明顯升高，可能與肝臟組織的氧化損傷有關(guān)，而使用EGCG后ALT、AST顯著降低，可見EGCG對(duì)肝臟有保護(hù)作用，其機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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