金魚(yú)寄生三代蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)及基于rDNA ITS序列的分子鑒定

李冉冉李文祥吳旭東,王桂堂

(1. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院, 蘭州 730070; 2. 中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所, 武漢 430072; 3. 寧夏回族自治區(qū)水產(chǎn)研究所, 銀川 750001)

金魚(yú)寄生三代蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)及基于rDNA ITS序列的分子鑒定

李冉冉1李文祥2吳旭東1,3王桂堂2

(1. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院, 蘭州 730070; 2. 中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所, 武漢 430072; 3. 寧夏回族自治區(qū)水產(chǎn)研究所, 銀川 750001)

為查明我國(guó)金魚(yú)三代蟲(chóng)的種類(lèi), 研究采用形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的方法, 對(duì)我國(guó)6個(gè)金魚(yú)主要養(yǎng)殖區(qū)的三代蟲(chóng)進(jìn)行了調(diào)查。通過(guò)形態(tài)測(cè)量分析, 發(fā)現(xiàn)了 4種三代蟲(chóng), 分別為: 小林三代蟲(chóng)(Gyrodactylus kobayashii)、G. gurleyi、G. longoacuminatus和三代蟲(chóng)未定種(Gyrodactylus sp.)。而通過(guò)核糖體rDNA ITS序列比對(duì)分析, 發(fā)現(xiàn)有 2種三代蟲(chóng)分別與小林三代蟲(chóng)和 G. longoacuminatus相似性在 99.1%以上, 有 1種與 G. gurleyi的相似性在98.2%以上, 另外, 還有1種三代蟲(chóng)與現(xiàn)有序列的相似性都較低, 雖然它與小林三代蟲(chóng)的相似性最高, 也僅為91.0%, 暫為未定種。系統(tǒng)發(fā)育分析也顯示, 金魚(yú)寄生的3種三代蟲(chóng)分別與小林三代蟲(chóng)、G. gurleyi和 G. longoacuminatus聚集在一起, 另外 1種單獨(dú)聚在一起, 這 4種三代蟲(chóng)均隸屬于 G. (Limnonephrotus)亞屬, 與G. (Gyrodactylus)亞屬的秀麗三代蟲(chóng)(G. elegans)的親緣關(guān)系很遠(yuǎn)。通過(guò)對(duì)三代蟲(chóng)樣品的抽樣調(diào)查發(fā)現(xiàn), 小林三代蟲(chóng)存在于所有采樣點(diǎn), 在廣州、武漢、鄭州3個(gè)采樣點(diǎn)為優(yōu)勢(shì)種, 所占的比率都在60%以上; G. gurleyi在海口、南京和上海為優(yōu)勢(shì)種, 所占的比率都在50%以上; G. longoacuminatus和三代蟲(chóng)未定種所占比率均較小。由此可見(jiàn), 小林三代蟲(chóng)和 G. gurleyi是我國(guó)金魚(yú)常見(jiàn)的三代蟲(chóng), G. gurleyi 和 G. longoacuminatus是中國(guó)三代蟲(chóng)新記錄種。

金魚(yú); 三代蟲(chóng); 形態(tài)鑒定; ITS分子標(biāo)記

三代蟲(chóng)(Gyrodactylus)一般寄生于魚(yú)類(lèi)的鰓和體表(鰭條), 是金魚(yú)常見(jiàn)的體外寄生蟲(chóng), 也是危害最嚴(yán)重的寄生蟲(chóng)病原之一[1]。除了細(xì)錨三代蟲(chóng)(G. sprostonae), 我國(guó)對(duì)寄生于金魚(yú)的三代蟲(chóng)的報(bào)道僅見(jiàn)于綜述[1,2], 沒(méi)有詳細(xì)的形態(tài)學(xué)與分子鑒定研究,并且與國(guó)外報(bào)道的種類(lèi)存在較大的差異[3—5]。秀麗三代蟲(chóng)(G. elegans)、中型三代蟲(chóng)(G. medius)和細(xì)錨三代蟲(chóng)被認(rèn)為是我國(guó)金魚(yú)寄生的常見(jiàn)三代蟲(chóng)[1], 而國(guó)外報(bào)道的寄生于金魚(yú)的三代蟲(chóng)主要有 3個(gè)種, 分別為: 小林三代蟲(chóng)(G. kaboyashii)、G. gurleyi和 G. longoacuminatus[3—5]。

三代蟲(chóng)的種類(lèi)鑒定主要依靠后吸器和交配囊的幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)[6], 這些幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)的種間差異較小,而且宿主、地理位置和溫度等因素可造成個(gè)體間的變異[7], 因此, 僅僅依靠形態(tài)學(xué)特征來(lái)鑒定容易出現(xiàn)錯(cuò)誤, 而分子生物學(xué)方法可輔助對(duì)三代蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行有效的鑒定和區(qū)分[8]。由于ITS序列種內(nèi)變異較小,種間變異較大, 目前對(duì)于三代蟲(chóng)的分子鑒定, 一般基于rRNA 基因的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)序列分析[9]。為了查明我國(guó)金魚(yú)寄生三代蟲(chóng)的種類(lèi), 本研究利用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法對(duì)我國(guó)金魚(yú)主要養(yǎng)殖區(qū)的三代蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行了調(diào)查和鑒定。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

2012年5—7月, 對(duì)河南省鄭州市(ZZ)、江蘇省南京市(NJ)、湖北省武漢市(WH)、廣東省廣州市(GZ)、上海市(SH)和海南省?？谑?HK)等6個(gè)地區(qū)的金魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行了調(diào)查, 每個(gè)采樣點(diǎn)收集30條金魚(yú), 在解剖鏡下檢查鰭條和鰓, 收集三代蟲(chóng), 固定于 80%的酒精中, 從每尾金魚(yú)上收集的三代蟲(chóng)分開(kāi)保存。

1.2 三代蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)鑒定

每個(gè)采樣點(diǎn)隨機(jī)選取30條三代蟲(chóng), 用苦味酸銨固定[10], 壓片后在顯微鏡下觀察并拍照, 根據(jù)測(cè)微標(biāo)尺測(cè)量蟲(chóng)體、錨鉤、邊緣小鉤和聯(lián)結(jié)片等分類(lèi)特征的大小[10], 通過(guò)與已發(fā)表三代蟲(chóng)的形態(tài)特征進(jìn)行比較[4,5,11—13], 鑒定種類(lèi)。

1.3 三代蟲(chóng)的分子鑒定

每個(gè)采樣點(diǎn)隨機(jī)選取10條三代蟲(chóng), 每條三代蟲(chóng)作為一個(gè)樣品提取基因組 DNA[8], 使用三代蟲(chóng)特異性引物擴(kuò)增及測(cè)序[9], 將獲得的 ITS1-ITS2在 NCBI上BLAST比對(duì)分析, 一般認(rèn)為序列相似性在99%以上為同一種。并基于P-距離計(jì)算ITS序列的變異程度, 如果三代蟲(chóng)ITS序列的變異在1%以內(nèi), 則認(rèn)為是同一物種[14]。

1.4 基于ITS1-5.8S-ITS2的系統(tǒng)發(fā)育分析

基于 ITS全序列(ITS1-5.8S-ITS2), 以壞鰓指環(huán)蟲(chóng)(Dactylogyrus vastator)為外類(lèi)群, 每個(gè)采樣點(diǎn)每種三代蟲(chóng)分別選取1條代表序列(在系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)中以采樣點(diǎn)漢語(yǔ)拼音首字母加數(shù)字編號(hào)的形式表示, 如廣州的3種三代蟲(chóng)序列表示為: GZ1、GZ2和GZ3), 與23種已發(fā)表的分屬于6個(gè)亞屬的三代蟲(chóng)的序列(表1)一起構(gòu)建分子系統(tǒng)樹(shù)。分子系統(tǒng)樹(shù)的構(gòu)建采用最大簡(jiǎn)約法(MP)、貝葉斯法(BI)和最大似然法(ML)。其中最大簡(jiǎn)約樹(shù)和貝葉斯樹(shù)參照彭作剛等的方法[15], 后者在TVM+I+G模型下構(gòu)建; ML分析在 PhyMLv.3.0[16]軟件上運(yùn)行。使用PAUP*4.0b10的Shimodaira-Hasegawa test(S-H檢驗(yàn))[17]和Kishino-Hasegawa test ( K-H檢驗(yàn))[18]對(duì)上述三種方法產(chǎn)生的系統(tǒng)發(fā)育假設(shè)的同質(zhì)性進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。

表1 本實(shí)驗(yàn)中用到的已發(fā)表的三代蟲(chóng)ITS序列信息Tab. 1 List of published Gyrodactylus ITS sequences utilized in this study

2 結(jié)果

2.1 三代蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)鑒定

三代蟲(chóng)的種類(lèi) 通過(guò)形態(tài)學(xué)比較, 共發(fā)現(xiàn) 4種三代蟲(chóng): 小林三代蟲(chóng)、G. gurleyi、G. Longoacuminatus和三代蟲(chóng)未定種。小林三代蟲(chóng)存在于所有采樣點(diǎn), 在廣州、武漢、鄭州3個(gè)采樣點(diǎn)為優(yōu)勢(shì)種, 所占的比率均在60%以上; G. gurleyi在除鄭州外的5個(gè)采樣點(diǎn)有發(fā)現(xiàn), 在?？凇⒛暇┖蜕虾閮?yōu)勢(shì)種; G. longoacuminatus僅在武漢和鄭州采樣點(diǎn)發(fā)現(xiàn), 三代蟲(chóng)未定種存在于除南京和鄭州外的 4個(gè)采樣點(diǎn), 這兩種三代蟲(chóng)所占比率較小(表2)。

表2 不同采樣地點(diǎn)金魚(yú)寄生三代蟲(chóng)的種類(lèi)與所占比率Tab. 2 Species of Gyrodactylus and their percentages in the sampling locations

四種三代蟲(chóng)的形態(tài)特征 小林三代蟲(chóng)(圖 1 a-d)蟲(chóng)體長(zhǎng) 517.8 μm (312.4—653.1), 蟲(chóng)體中部寬121.9 μm (67.8—179.7)。交配囊橢圓形, 由1個(gè)彎曲的大刺和 6個(gè)排成拱形的小刺組成, 靠近大刺的兩個(gè)小刺與大刺形態(tài)類(lèi)似, 其他 4小刺為尖形。錨鉤全長(zhǎng)58.7 μm (55.2—65.7), 基部長(zhǎng)18.4 μm (15.9—22.5), 鉤柄長(zhǎng)43.4 μm (40.3—48.2), 鉤尖長(zhǎng)27.5 μm (25.2—29.9)。腹聯(lián)結(jié)片長(zhǎng) 23.3 μm (21.6—25.2), 基部寬8.7 μm (6.6—10.2), 中間寬6.0 μm (4.1—7.3),耳狀突較小而鈍, 長(zhǎng)2.1 μm (1.1—3.1), 兩耳狀突起間長(zhǎng)度22.3 μm (18.8—24.4), 小于腹聯(lián)結(jié)片的最大長(zhǎng)度; 腹聯(lián)結(jié)片膜呈舌形, 高15.0 μm (12.1—16.3)。邊緣小鉤全長(zhǎng)27.4 μm (24.3—28.7), 鉤柄長(zhǎng)21.9 μm (19.1—23.6), 鉤體長(zhǎng)5.5 μm (4.4—6.7), 鐮部(末端)寬3.5 μm (2.2—4.1), 鉤體基部寬2.9 μm (2.2—3.6),扣環(huán)長(zhǎng)10.7 μm (8.2—12.2)。

G. gurleyi (圖1 e-h)蟲(chóng)體長(zhǎng)541.3 μm (309.8—730.9), 蟲(chóng)體中部寬122.6 μm (68.5—170.6)。交配囊橢圓形, 由1個(gè)彎曲的大刺和7—8個(gè)排成拱形的小刺組成, 靠近大刺的兩個(gè)小刺與大刺形態(tài)類(lèi)似, 其他小刺為尖形。錨鉤全長(zhǎng)53.8 μm (48.9—56.2), 基部長(zhǎng) 15.9 μm (12.7—18.2), 鉤柄長(zhǎng) 40.5 μm (36.5—43.2), 鉤尖長(zhǎng)26.6 μm (22.5—28.4)。腹聯(lián)結(jié)片長(zhǎng)20.6 μm (18.2—23.6), 基部寬8.1 μm (6.6—9.5), 中間寬5.1 μm (3.5—6.1), 耳狀突較小而略尖, 長(zhǎng)2.6 μm (1.7—3.5),兩耳狀突起間長(zhǎng)度22.2 μm (19.4—26.5), 長(zhǎng)于腹聯(lián)結(jié)片的最大長(zhǎng)度; 腹聯(lián)結(jié)片膜呈舌形延伸, 膜上具紋, 長(zhǎng)13.4 μm (12.1—13.9)。邊緣小鉤全長(zhǎng)27.3 μm (24.0—28.5), 鉤柄長(zhǎng)22.2 μm (18.7—22.4), 鉤體長(zhǎng)5.1 μm (4.5—5.5), 鐮部(末端)寬3.5 μm (2.4—4.1),

鉤體基部寬3.2 μm (2.0—3.9), 扣環(huán)長(zhǎng)10.8 μm (8.8—13.0)。

G. longoacuminatus蟲(chóng)體長(zhǎng)404.9 μm (312.5—497.2 ), 蟲(chóng)體中部寬122.9 μm (120.2—125.6)。錨鉤全長(zhǎng)60.0 μm (59.4—60.3), 基部長(zhǎng)19.0 μm (18.6—19.6), 鉤柄長(zhǎng)45.3 μm (44.8—46.0), 鉤尖長(zhǎng)28.9 μm (28.8—29.0)。腹聯(lián)結(jié)片長(zhǎng)23.9 μm (23.2—25.1), 基部寬8.8 μm (8.3—9.6), 中間寬6.3 μm (6.1—6.4), 耳狀突較小而略尖, 長(zhǎng)2.4 μm (2.2—2.8), 兩耳狀突起間長(zhǎng)度24.3 μm (23.31—25.98), 大于腹聯(lián)結(jié)片的長(zhǎng)度; 腹聯(lián)結(jié)片膜呈舌形延伸, 膜上具紋。邊緣小鉤全長(zhǎng)29.1 μm (29.0—29.1), 鉤柄長(zhǎng)23.4 μm (23.2—23.7),鉤體長(zhǎng)5.6 μm (5.4—5.8), 鐮部(末端)寬2.8 μm (2.5—3.1), 鉤體基部寬2.3 μm (2.2—2.3), 扣環(huán)長(zhǎng)10.8 μm (10.7—11.0)。

還有一種三代蟲(chóng), 與上述3種三代蟲(chóng)都有差異,暫定為三代蟲(chóng)未定種。蟲(chóng)體長(zhǎng) 466.7 μm (388.8—585.2), 蟲(chóng)體中間寬128.2 μm (101.8—151.2)。交配囊橢圓形, 由1個(gè)彎曲的大刺和6個(gè)排成拱形的小刺組成, 靠近大刺的兩個(gè)小刺與大刺形態(tài)類(lèi)似, 其他小刺為尖形。錨鉤全長(zhǎng)50.0 μm (48.4—52.1), 基部長(zhǎng)14.8 μm (13.9—16.4), 鉤柄長(zhǎng)37.0 μm (35.4—39.8), 鉤尖長(zhǎng)24.9 μm (24.1—26.6)。腹聯(lián)結(jié)片長(zhǎng)18.6 μm (17.1—20.0), 基部寬7.7 μm (7.0—9.1), 中間寬5.0 μm (4.1—6.2), 耳狀突較小而略尖, 長(zhǎng)2.3 μm (1.5—2.7), 兩耳狀突起間長(zhǎng) 20.1 μm (17.3—21.8),大于腹聯(lián)結(jié)片的長(zhǎng)度。邊緣小鉤全長(zhǎng) 25.3 μm (21.6—28.4), 鉤柄長(zhǎng)20.8 μm (17.3—23.5), 鉤體長(zhǎng)4.5 μm (3.8—5.4), 鐮部(末端)寬3.5 μm (2.6—4.2),鉤體基部寬 3.2 μm (2.9—3.6), 扣環(huán)長(zhǎng) 10.2 μm (8.6—11.1)。

2.2 分子鑒定

獲得的60條ITS1-ITS2序列經(jīng)過(guò)多重比對(duì), 為1236 bp, 保守位點(diǎn)815個(gè), 變異位點(diǎn)406個(gè), 簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)351個(gè); 聚類(lèi)分析后分為4組: Gk、Gg、Gl和Gsp。通過(guò)與GenBank中已知三代蟲(chóng)的ITS序列的比對(duì)分析, Gk組中的序列與小林三代蟲(chóng)的相似性達(dá)到99.4%以上; Gg組中的序列與G. gurleyi的相似性為 98.2%以上; Gl 組中的序列與 G. longoacuminatus的相似性為99.1%以上; 而與Gsp組中的序列相似性最大的也只有91.0%, 無(wú)法確定種類(lèi)。遺傳變異分析顯示, Gk、Gg、Gsp組內(nèi)的ITS序列變異都在1%以內(nèi), Gl組變異稍高, 為1.3%—1.8%, 均為種內(nèi)變異[12]; Gk、Gg和Gsp組間的變異均在15.1%以上,為種間變異。根據(jù)上述的ITS序列的相似性和遺傳變異分析, 認(rèn)為寄生于金魚(yú)的三代蟲(chóng)有4種, Gk、Gg和Gl組分別為小林三代蟲(chóng)、G. gurleyi和 G. longoacuminatus (GenBank登錄號(hào)分別為: KC922452, KC922453, KC922451), 而Gsp組為一種未知三代蟲(chóng)。

系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)也顯示, 寄生于金魚(yú)的三代蟲(chóng)有 3種分別與小林三代蟲(chóng)、G. gurleyi和 G. longoacuminatus聚在一起, 另外1種單獨(dú)聚在一起, 這4種三代蟲(chóng)又與位于進(jìn)化樹(shù)頂端的 G. (Limnonephrotus)亞屬的三代蟲(chóng)聚為一支, 而隸屬于G. (Gyrodactylus)亞屬的秀麗三代蟲(chóng)位于進(jìn)化樹(shù)的基部(圖2)。

通過(guò)分子鑒定的三代蟲(chóng)種類(lèi)與形態(tài)學(xué)鑒定的結(jié)果一致, 且 4種三代蟲(chóng)在各采樣點(diǎn)所占比率較相似(表2)。

3 討論

通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子鑒定, 共發(fā)現(xiàn) 4種三代蟲(chóng),即: 小林三代蟲(chóng)、G. gurleyi、G. longoacuminatus和三代蟲(chóng)未定種。在國(guó)外的金魚(yú)中也發(fā)現(xiàn)并詳細(xì)描述了小林三代蟲(chóng)[4]、G. gurleyi[3]和G. longoacuminatus[5]的形態(tài)特征, 本文描述的這 3種三代蟲(chóng)與國(guó)外報(bào)道的幾乎完全一致。小林三代蟲(chóng)與G. gurleyi的主要區(qū)別在邊緣小鉤鐮部的形態(tài)、腹聯(lián)結(jié)片上耳狀突的形態(tài)以及交配囊小刺的數(shù)目。小林三代蟲(chóng)鐮部的鐮刀狀開(kāi)口較大, 鐮狀尖指向水平方向與趾狀末端指向呈鈍角; 耳狀突短而圓潤(rùn), 兩耳狀突起間長(zhǎng)度小于腹聯(lián)結(jié)片的最大長(zhǎng)度; 交配囊的小刺 6枚。而 G. gurleyi的鐮刀狀開(kāi)口較小, 鐮狀尖指向大致與趾狀末端指向平行, 且鐮狀尖和趾狀末端更尖銳; 耳狀突較為突出, 兩耳狀突起間長(zhǎng)度大于腹聯(lián)結(jié)片的最大長(zhǎng)度; 交配囊的小刺7—8枚。G. longoacuminatus和G. gurleyi形態(tài)非常相似, 最大的區(qū)別僅在于前者固著器的幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)更大, Cone和Wiles也認(rèn)為該特征是兩者最大的區(qū)別[3]。三代蟲(chóng)未定種與上述三種三代蟲(chóng)的主要區(qū)別在于其腹聯(lián)結(jié)片更短, 耳狀突比小林三代蟲(chóng)尖銳, 比 G. gurleyi的略小, 而且在GenBank中也沒(méi)有較相似的 ITS序列, 所以暫定為三代蟲(chóng)未定種。

圖2 基于ITS1-5.8S-ITS2序列構(gòu)建的三代蟲(chóng)的最大簡(jiǎn)約樹(shù)(節(jié)點(diǎn)上的數(shù)值依次為MP、ML法自展支持率及貝葉斯后驗(yàn)概率)Fig. 2 Phylogram constructed from ITS1-5.8S-ITS2 sequences for subgenera and selected species of Gyrodactylus by maximum parsimony (Statistical node support is consequently shown as follows: maximum parsimony bootstrap /maximum likelihood bootstrap / Bayesian posterior probability)

該結(jié)果與中國(guó)以往報(bào)道的種類(lèi)存在較大差異。我國(guó)已報(bào)道的寄生于金魚(yú)和鯽魚(yú)的三代蟲(chóng)有中型三代蟲(chóng)、秀麗三代蟲(chóng)、舒里曼三代蟲(chóng)(G. shulmani)、細(xì)錨三代蟲(chóng)和小林三代蟲(chóng)等[11], 其中秀麗三代蟲(chóng)、中型三代蟲(chóng)和細(xì)錨三代蟲(chóng)等被認(rèn)為是金魚(yú)常見(jiàn)的三代蟲(chóng)種類(lèi), 尤其是秀麗三代蟲(chóng), 被認(rèn)為是金魚(yú)上最常見(jiàn)的種類(lèi)[1,2]。本次調(diào)查在 5—7月開(kāi)展, 采樣地點(diǎn)為我國(guó)的 6個(gè)主要金魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)區(qū), 即鄭州、武漢、南京、上海、海口、廣州, 全國(guó)各地的金魚(yú)很多都是從這些地方引進(jìn), 因此, 本文所調(diào)查的三代蟲(chóng)可基本上代表我國(guó)金魚(yú)寄生三代蟲(chóng)的種類(lèi)。然而在調(diào)查中并未發(fā)現(xiàn)秀麗三代蟲(chóng), 而且通過(guò)系統(tǒng)發(fā)育分析,發(fā)現(xiàn)金魚(yú)寄生的 4種三代蟲(chóng)親緣關(guān)系較近, 都隸屬于 G. (Limnonephrotus)亞屬, 與秀麗三代蟲(chóng)所屬亞屬 G. (Gyrodactylus)的親緣關(guān)系很遠(yuǎn)。G. (Limnonephrotus)亞屬的三代蟲(chóng)具有“長(zhǎng)”ITS的特征, ITS1的長(zhǎng)度在600 bp以上, 而G. (Gyrodactylus)亞屬的三代蟲(chóng)具有“短”ITS特征, ITS1的長(zhǎng)度在300—500 bp之間[19]。另外, 秀麗三代蟲(chóng)系在歐鳊屬(Abramis)魚(yú)類(lèi)中發(fā)現(xiàn)并命名, 盡管后來(lái)有些報(bào)道說(shuō)在其他鯉科魚(yú)類(lèi)中發(fā)現(xiàn)了秀麗三代蟲(chóng)[20], 但是由于三代蟲(chóng)通常具有較強(qiáng)的宿主特異性, 秀麗三代蟲(chóng)一般不會(huì)感染歐鳊屬以外的其他魚(yú)類(lèi), 因此, 后來(lái)的研究認(rèn)為金魚(yú)寄生秀麗三代蟲(chóng)的鑒定是錯(cuò)誤的[3,4]。上述結(jié)果說(shuō)明, 盡管秀麗三代蟲(chóng)與金魚(yú)寄生的幾種三代蟲(chóng)形態(tài)上較相似, 但寄生于金魚(yú)的三代蟲(chóng)中不應(yīng)該有秀麗三代蟲(chóng), 因此, 關(guān)于我國(guó)金魚(yú)寄生秀麗三代蟲(chóng)的報(bào)道很可能是錯(cuò)誤的。

小林三代蟲(chóng)和 G. gurleyi通常是金魚(yú)中常見(jiàn)的三代蟲(chóng)種類(lèi)。在日本、英國(guó)、澳大利亞等都已有小林三代蟲(chóng)的報(bào)道[4,21,22], G. gurleyi則在美國(guó)、加拿大、伊朗等地區(qū)都被廣泛報(bào)道[3,8]。在本次調(diào)查中,所有的采樣點(diǎn)均有小林三代蟲(chóng), 而且小林三代蟲(chóng)在廣州、武漢、鄭州等3個(gè)采樣點(diǎn)為優(yōu)勢(shì)種; G. gurleyi在5個(gè)采樣點(diǎn)的金魚(yú)中都有寄生, 而且在海南、南京和上海 3個(gè)采樣點(diǎn)為優(yōu)勢(shì)種。因此, 小林三代蟲(chóng)和G. gurleyi應(yīng)該是我國(guó)金魚(yú)比較常見(jiàn)的三代蟲(chóng)種類(lèi)。

我國(guó)對(duì)三代蟲(chóng)的研究始于 1948年[23], 目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了三代蟲(chóng)屬的52種三代蟲(chóng)[24], 但是還未見(jiàn)G. gurleyi和G. longoacuminatus的報(bào)道, 因此, G. gurleyi和G. longoacuminatus是中國(guó)三代蟲(chóng)新記錄種。

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IDENTIFICATION OF GYRODACTYLUS SPECIES IN GOLDFISH (CARASSIUS AURATUS) THROUGH MORPHOLOGICAL STUDY AND THE ANALYSIS OF THE rDNA ITS SEQUENCE

LI Ran-Ran1, LI Wen-Xiang2, WU Xu-Dong1,3and WANG Gui-Tang2
(1. Faculty of Animal Science and Technology, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China; 2. Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan 430072, China; 3. Ningxia Fisheries Research Institute, Yinchuan 750001, China)

In order to determine the Gyrodactylus species in China, we applied morphological and molecular approaches to identify specimens of Gyrodactylus collected from 6 principal goldfish farming areas. Four Gyrodactylus species, including G. kobayashii, G. gurleyi, G. longoacuminatus and G. sp., were identified with morphological measurements. According to rDNA ITS sequence alignment, 2 species of Gyrodactylus were identical to G. kobayashii and G. longoacuminatus with a similarity of higher than 99.1%. One species of Gyrodactylus was identical to G. gurleyi with the similarity higher than 98.2%. The other Gyrodactylus species had low similarity to all the currently available sequences, with the relatively high similarity of only 91.0% to G. kobayashii. The results of Phylogenetic analysis indicated that these three Gyrodactylus species were clustered with G. kobayashii, G. gurleyi and G. longoacuminatus, respectively. The fourth Gyrodactylus species clustered in a separate clad. All the 4 Gyrodactylus species in goldfish belonged to G. (Limnonephrotus), and they were distant from G. elegans that belonged to G. (Gyrodactylus). G. kobayashii was found in all sampling areas and was dominant in Guangzhou, Wuhan and Zhengzhou with a proportion of more than 60%. G. gurleyi was found in 5 areas except for Zhengzhou, and dominated in Haikou, Nanjing and Shanghai with the percentage of higher than 50%. G. longoacuminatus and G. sp. formed a small proportion. The results suggested that G. kobayashii and G. gurleyi were the most common Gyrodactylus species in goldfish, and G. gurleyi and G. longoacuminatus were the newly reported in China.

Carassius auratus; Gyrodactylus; Morphological identification; rDNA ITS sequence

S941.5

A

1000-3207(2014)05-0903-07

10.7541/2014.135

2013-08-14;

2014-03-09

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專(zhuān)項(xiàng)資金(CARS-46-08); 國(guó)家自然科學(xué)基金(31272695)資助

李冉冉(1986—), 女, 山東濟(jì)寧人; 碩士研究生; 主要從事魚(yú)類(lèi)寄生蟲(chóng)研究。E-mail: respond@163.com

吳旭東, E-mail: amy95@126.com; 王桂堂, E-mail: gtwang@ihb.ac.cn