不同溫度條件下溶壁微球菌和白斑綜合癥病毒對(duì)凡納濱對(duì)蝦的致病性

向 赟，王 剛，楊紹文，陳兆明，孫成波,2

（1．廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東湛江 524025；2.廣東高校熱帶海產(chǎn)無脊椎動(dòng)物養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，廣東湛江 524025；3.廣東海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)部，廣東湛江 524025）

不同溫度條件下溶壁微球菌和白斑綜合癥病毒對(duì)凡納濱對(duì)蝦的致病性

向 赟1，王 剛1，楊紹文1，陳兆明1，孫成波1,2

（1．廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東湛江 524025；2.廣東高校熱帶海產(chǎn)無脊椎動(dòng)物養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，廣東湛江 524025；3.廣東海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)部，廣東湛江 524025）

研究在3種不同溫度（19±1℃、25±1℃、31±1℃）條件下不同濃度的溶壁微球菌和白斑綜合癥病毒對(duì)凡納濱對(duì)蝦的致病性。通過單獨(dú)及合并感染對(duì)蝦記錄其死亡率并檢測(cè)病毒攜帶量。結(jié)果顯示：溫度19±1℃條件下，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束各組累積死亡率和病毒攜帶量分別低于7.7%，8.6×102copy/g。溫度25±1℃條件下，48～96 h單獨(dú)感染W(wǎng)SSV累積死亡率與合并感染組差異顯著（P＜0.05），而且合并感染組不同濃度之間存顯著差異（P＜0.05），死亡率和病毒量最大值分別為71.1%，6.2×105copy/g（合并感染濃度9.5×107cfu/mL組）。溫度31±1℃條件下，各組累積死亡率在48 h迅速升高，合并感染組死亡率和病毒攜帶量（最大值：75.6%，2.0×106copy/g）明顯高于單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組（42.2%，2.2×104copy/g）。隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)，單獨(dú)細(xì)菌感染組對(duì)蝦死亡率隨感染濃度升高而升高（最大值：71.1%）。因此合并感染對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖危害更大，且隨著溫度升高，溶壁微球菌和合并感染的致病力隨溫度升高而升高，即溫度能顯著影響溶壁微球菌和WSSV的致病力。

溫度；溶壁微球菌；白斑綜合癥病毒；凡納濱對(duì)蝦

凡納濱對(duì)蝦是全球3大對(duì)蝦養(yǎng)殖品種之一[1]。但隨著人工養(yǎng)殖規(guī)模擴(kuò)大及密度越來越大，產(chǎn)生的一系列問題限制了對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，如養(yǎng)殖環(huán)境惡化，多種疾病爆發(fā)，種質(zhì)退化等。其中疾病發(fā)生已給對(duì)蝦養(yǎng)殖造成巨大損失，如白斑綜合癥、紅體病、爛鰓病等[2-3]。白斑綜合癥是由一種宿主廣泛，傳染性強(qiáng)，對(duì)蝦高致死性病毒--白斑綜合癥病毒（White spot syndrome virus，WSSV）引起。很多研究報(bào)道白斑綜合癥發(fā)生與蝦體免疫水平，感染方式，環(huán)境因子等有關(guān)[4-5]。人工養(yǎng)殖過程中，養(yǎng)殖動(dòng)物感染的病原體可能不僅僅只有一種，可能有兩種或多種[6-8]。如水質(zhì)惡化，會(huì)引起水體中細(xì)菌數(shù)量增多，極有可能發(fā)生二次感染。溶壁微球菌Micrococcus lysodeikticus屬革蘭氏陽(yáng)性菌，是一種條件致病菌。且溶壁微球菌對(duì)對(duì)蝦致病力較弱，國(guó)內(nèi)關(guān)于溶壁微球菌與白斑綜合癥發(fā)生是否相關(guān)的研究較少，所以本文研究在不同溫度條件下合并注射感染及單獨(dú)注射感染W(wǎng)SSV和不同濃度的溶壁微球菌，探討在不同溫度條件下溶壁微球菌和WSSV對(duì)凡納濱對(duì)蝦的致病性，對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖健康可持續(xù)發(fā)展有重要指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 健康對(duì)蝦來源

健康凡納濱對(duì)蝦取自廣東海洋大學(xué)東海島海洋生物研究基地，體長(zhǎng)為8.61±0.39 cm。實(shí)驗(yàn)前隨機(jī)抽取10尾對(duì)蝦進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為陰性。實(shí)驗(yàn)前暫養(yǎng)5 d，投喂對(duì)蝦人工配合餌料2次/日，換水1次/d，日換水量接近100%。

1.1.2 WSSV粗提液制備

取感染W(wǎng)SSV癥狀明顯的凡納濱對(duì)蝦，去除甲殼，按1:1（W∶V）加入高鹽PBS，冰浴中勻漿，將勻漿液于4℃、7 000 r/min離心15 min；離心后的上清液加入蔗糖至終濃度為30%（W/W），4℃、16 000 r/min超速離心50 min，棄上清，沉淀用PBS（pH 7.4）重懸，將重懸液用0.45 μm的濾膜過濾，分裝后-80℃冰箱保存。

1.1.3 菌株

對(duì)蝦病原菌-溶壁微球菌，由西北農(nóng)林科技大學(xué)劉小林教授實(shí)驗(yàn)室提供，經(jīng)接種、活化培養(yǎng)24 h后，用無菌PBS緩沖液稀釋制備菌懸液菌。

1.1.4 DNA模板提取和引物設(shè)計(jì)

DNA模板提取方法參照SUN等[9]的方法，PCR引物參照YOU等[10]的引物設(shè)計(jì)，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 感染方式

本實(shí)驗(yàn)采用人工注射感染，在凡納濱對(duì)蝦第2腹節(jié)與第3腹肌之間往心臟方向注射40 μl病原緩沖液，3種合并感染注射液含病毒粒子濃度都為3.2×102copy/μL，含溶壁微球菌濃度分別為9.5×107cfu/mL、9.5×106cfu/mL、9.5×105cfu/mL；單獨(dú)感染注射液：含3.2×102copy/μL的病毒稀釋液，3種含9.5×107cfu/ mL、9.5×106cfu/mL、9.5×105cfu/mL的溶壁微球菌菌懸液。

1.2.2 溫度對(duì)感染不同濃度溶壁微球菌和WSSV的凡納濱對(duì)蝦的影響

將實(shí)驗(yàn)對(duì)蝦分別培養(yǎng)在19±1℃、25±1℃、31±1℃有60 L水的0.1 m3塑料桶中，實(shí)驗(yàn)組分為合并感染組（合并感染W(wǎng)SSV與溶壁微球菌）與單獨(dú)感染組（單獨(dú)感染W(wǎng)SSV，單獨(dú)感染3種濃度的溶壁微球菌），各組均設(shè)置3個(gè)平行，每組對(duì)蝦各30尾，對(duì)照組注射40 μl PBS緩沖液。實(shí)驗(yàn)中投喂對(duì)蝦人工配合餌料2次/日，24 h充氣，定時(shí)吸出排泄物，日換水量20%。及時(shí)取出死亡對(duì)蝦放入-20℃冰箱保存。各組在感染后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h取樣保存。觀察記錄對(duì)蝦發(fā)病及死亡率，定期檢測(cè)對(duì)蝦組織中病毒含量，并對(duì)死亡對(duì)蝦進(jìn)行病毒檢測(cè)。

1.2.3 病毒檢測(cè)方法

病毒檢測(cè)采用熒光定量PCR方法參考程曉燕等[11]。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 溫度19±1℃下WSSV和溶壁微球菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦的致病性

2.1.1 溫度19±1℃下感染W(wǎng)SSV和溶壁微球菌的凡納濱對(duì)蝦死亡情況

當(dāng)溫度為19±1℃時(shí)，單獨(dú)感染不同濃度的溶壁微球菌和WSSV與合并感染兩種病原對(duì)凡納濱對(duì)蝦的累積死亡率影響不大，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束各組累積死亡率低于最大值7.7%，如圖1。

圖1 19±1℃下對(duì)感染溶壁微球菌和WSSV的凡納濱對(duì)蝦的影響Fig.1 Impact of M.lysodeikticus and WSSV infected L.vannamei at 19±1℃

2.1.2 溫度19±1℃下感染不同濃度溶壁微球菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦攜帶WSSV的影響

在溫度19±1℃條件下，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中單獨(dú)感染W(wǎng)SSV對(duì)蝦體內(nèi)攜帶病毒量與合并感染組無顯著差異（P>0.05），各組病毒攜帶量都低于8.6×102copy/g，見表1。

表1 溫度19±1℃下感染不同細(xì)菌濃度對(duì)凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)病毒攜帶量的影響Tab.1 Effects on amount of virus in L.vannamei by infected different concentrations of bacterial at 19±1℃

2.2 溫度25±1℃下WSSV和溶壁微球菌的凡納濱對(duì)蝦的致病性

2.2.1 溫度25±1℃下感染W(wǎng)SSV和溶壁微球菌的凡納濱對(duì)蝦死亡情況

在溫度25±1℃條件下，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中0～24 h各組的累積死亡率低于2.0%，幾乎沒有死亡，至48 h單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組對(duì)蝦累積死亡率最大為21.0%顯著高于其他組（P＜0.05）；至72 h出現(xiàn)差異變化，單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組累積死亡率50.0%和合并感染濃度為9.5×107cfu/mL的56.7%顯著高于其他組（P＜0.05），細(xì)菌單獨(dú)感染組濃度為9.5×107cfu/mL（20.0%）明顯高于其它細(xì)菌單獨(dú)感染濃度組的累積死亡率（5.6%）（P＜0.05）。至96 h細(xì)菌單獨(dú)感染濃度為9.5×107cfu/ml顯著高于其他細(xì)菌單獨(dú)感染，所有感染W(wǎng)SSV組與未感染W(wǎng)SSV之間存在顯著差異，如圖2。

圖2 溫度25±1℃下對(duì)感染W(wǎng)SSV和溶壁微球菌凡納濱對(duì)蝦的影響Fig.2 Impact of M.lysodeikticus and WSSV infected L.vannamei at 25±1℃

2.2.2 溫度25±1℃下感染溶壁微球菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦攜帶WSSV的影響

在溫度25±1℃條件下，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，單獨(dú)感染W(wǎng)SSV對(duì)蝦體內(nèi)攜帶病毒量與合并感染組在24 h、48 h、96 h存在顯著差異（P＜0.05），在72 h合并感染濃度為9.5×107cfu/mL組與另兩合并感染組存在顯著差異，72 h單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組對(duì)蝦體內(nèi)攜帶病毒量與合并感染組不存在顯著差異，見表2。

表2 溫度25±1℃下感染不同細(xì)菌濃度對(duì)凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)病毒攜帶量的影響Tab.2 Effects on amount of virus in L.Vannamei by infected different concentrations of bacterial at 25±1℃

2.3 溫度31±1℃下WSSV和溶壁微球菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦的致病性

2.3.1 溫度31±1℃下感染W(wǎng)SSV和溶壁微球菌的凡納濱對(duì)蝦死亡情況

在溫度31±1℃條件下，0～24 h各組的累積死亡率低于5.6%，至48 h合并感染組濃度為9.5×105cfu/mL、9.5×106cfu/mL的累積死亡率明顯高于單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組和細(xì)菌單獨(dú)感染濃度為9.5×105cfu/mL、9.5×106cfu/ mL，顯著低于細(xì)菌單獨(dú)感染濃度為9.5×107cfu/mL（50.0%）及合并感染濃度為9.5×107cfu/mL（48.9%）；至72 h單獨(dú)細(xì)菌感染組累積死亡率升高，單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組和單獨(dú)細(xì)菌感染濃度為9.5×105cfu/mL都顯著低于其它感染組（P＜0.05），且其它感染組之間無顯著差異。至96 h單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組累積死亡率顯著低于所有細(xì)菌感染組（P＜0.05），合并感染濃度為9.5×107cfu/mL組累積死亡率達(dá)到最大值75.6%，見圖3。

圖3 溫度31±1℃對(duì)感染W(wǎng)SSV和溶壁微球菌的凡納濱對(duì)蝦的影響Fig.3 Impact of M.lysodeikticus and WSSV infected L.vannamei at 31±1℃

2.3.2 溫度31±1℃下感染溶壁微球菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦攜帶WSSV的影響

在溫度31±1℃條件下，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，至12 h單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組病毒攜帶量明顯低于合并感染濃度為9.5×107cfu/mL、9.5×106cfu/mL組（P＜0.05），24 h時(shí)合并感染濃度為9.5×107cfu/mL、9.5×106cfu/mL組與合并感染濃度為9.5×105cfu/mL組、單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組存在顯著差異（P＜0.05），至48 h病毒攜帶量迅速增加，各組之間無顯著差異，72～96 h病毒攜帶量維持在較高水平，見表3。

表3 溫度31±1℃下感染不同細(xì)菌濃度對(duì)凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)病毒攜帶量的影響Tab.3 Effects on amount of virus in L.vannamei by infected different concentrations of bacterial at 31±1℃

3 討論

隨著凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，伴隨的一系列問題不容忽視，尤其是病害問題，如在表面健康無明顯癥狀的對(duì)蝦體內(nèi)能檢測(cè)到WSSV，且在夏季對(duì)蝦體內(nèi)病毒攜帶量高于秋季[12]。對(duì)蝦養(yǎng)殖中也出現(xiàn)WSSV和致病弧菌合并感染現(xiàn)象，如SELVIN等[13]在感染W(wǎng)SSV對(duì)蝦體內(nèi)分離到致病性鰻弧菌。溫度不僅直接影響對(duì)蝦的新陳代謝、抗病能力、進(jìn)食、生存發(fā)育，還對(duì)病毒及弧菌在對(duì)蝦體內(nèi)增殖有重要影響。如對(duì)蝦偷死綜合癥一般發(fā)生在養(yǎng)殖60 d后，且多在高溫季節(jié)暴發(fā)，尤其在蛻殼期間極易發(fā)生，在低溫和養(yǎng)殖前期危害不大[14]。

在溫度為19±1℃條件下，各組對(duì)蝦累積死亡率和病毒含量都很低，累積死亡率低于7.7%，病毒含量低于8.6×102copy/g。說明在低溫19±1℃條件下，WSSV和溶壁微球菌的增殖都受到了抑制，溶壁微球菌致病力與感染劑量無關(guān)，屬于潛伏感染，此結(jié)果與管越強(qiáng)等[15]報(bào)道當(dāng)水溫低于15℃對(duì)日本囊對(duì)蝦體內(nèi)WSSV的增殖情況相符，DU等[16]報(bào)道在低溫10±1℃條件下蝦體內(nèi)病毒攜帶量明顯低于24±1℃條件下病毒攜帶量。

在溫度25±1℃條件下，0～24 h各組的累積死亡率低于2.0%（P＞0.05），病毒攜帶量低于6.0×102copy/g，48 h單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組累積死亡（21.1%）和病毒含量（1.9×105copy/g）明顯高于其他組。72 h后死亡加速，伴有死亡高峰（P＜0.05），病毒含量隨著合并感染濃度升高而提高，與累積死亡率結(jié)果相符。說明在溫度25±1℃條件下，對(duì)蝦感染病原體沒有立即發(fā)病，有一定的潛伏期，但隨著時(shí)間延長(zhǎng)，死亡加快，病毒增殖也加快，合并感染組中病毒增殖受溶壁微球菌感染濃度影響顯著（P＜0.05），但前期比單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組病毒增殖要慢，有研究報(bào)道少量病原菌侵入對(duì)蝦體內(nèi)，酚氧化酶原系統(tǒng)被病原菌細(xì)胞壁的多糖激活，產(chǎn)生一種細(xì)胞毒殺作用[17]，是否由于少量細(xì)菌入侵，短暫提高對(duì)蝦免疫力，對(duì)WSSV初期增殖產(chǎn)生影響有待進(jìn)一步研究。而且李侃等認(rèn)為WSSV在對(duì)蝦體內(nèi)增殖速度受到感染初期病毒侵染對(duì)蝦組織細(xì)胞能力高低的直接影響[18]。單獨(dú)感染溶壁微球菌中發(fā)現(xiàn)溶壁微球菌數(shù)量達(dá)到產(chǎn)生毒力閥值所需時(shí)間因感染濃度不同而不同，因此溫度25±1℃條件下，溶壁微球菌的致病力和WSSV在對(duì)蝦體內(nèi)增殖與溶壁微球菌感染濃度密切相關(guān)。

在溫度31±1℃條件下，0～24 h各組的累積死亡率低于5.6%（P＞0.05），但對(duì)蝦體內(nèi)病毒在12 h時(shí)出現(xiàn)增殖高峰期，明顯高于單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組，48 h后合并感染組累積死亡率隨溶壁微球菌感染濃度升高而升高，病毒含量同樣高于單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組，說明在高溫條件下，提高了合并感染中病原體對(duì)對(duì)蝦的致死率，并大大縮短了發(fā)病時(shí)間。對(duì)比溫度25±1℃條件下單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組結(jié)果可知在溫度31±1℃下單獨(dú)感染W(wǎng)SSV組對(duì)蝦體內(nèi)WSSV增殖受到一定程度的抑制，與研究報(bào)道在高溫33℃條件下，可以延緩感染W(wǎng)SSV對(duì)蝦發(fā)病，抑制WSSV在對(duì)蝦體內(nèi)增殖，降低死亡率相符[19-20]。合并感染組的病毒增殖情況剛好相反，溫度31±1℃條件下整個(gè)實(shí)驗(yàn)中病毒在對(duì)蝦體內(nèi)增殖迅速，死亡率至48 h迅速升高。說明合并感染后，高溫引起溶壁微球菌迅速增殖，并促使WSSV在對(duì)蝦體內(nèi)迅速增殖，現(xiàn)在對(duì)高溫對(duì)WSSV增殖的抑制作用機(jī)理尚不清楚，高溫可能引起感染宿主細(xì)胞加速凋亡[21]；甲殼動(dòng)物體內(nèi)血細(xì)胞數(shù)會(huì)隨著溫度升高而增加，溫度升高將激活酚氧化酶原系統(tǒng)，提高對(duì)蝦免疫水平[22-24]；高溫能影響多數(shù)昆蟲病毒復(fù)制的多個(gè)環(huán)節(jié)，推測(cè)高溫也能影響WSSV復(fù)制的多個(gè)環(huán)節(jié)[25]。從單獨(dú)感染溶壁微球菌組結(jié)果中發(fā)現(xiàn)在高溫條件下，溶壁微球菌致病力明顯提高，且發(fā)病時(shí)間隨感染濃度升高而縮短，較溫度25±1℃條件下結(jié)果，說明感染溶壁微球菌發(fā)病時(shí)間隨溫度升高而縮短。已有研究報(bào)道某些弧菌致病力隨著溫度升高而升高，同等溫度條件下鰻弧菌感染劑量與感染程度密切相關(guān)，高溫能提高對(duì)蝦對(duì)鰻弧菌的易感性，大大縮短對(duì)蝦的發(fā)病時(shí)間[26,27]。此結(jié)果也說明現(xiàn)在的連續(xù)養(yǎng)殖模式中，隨著養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大和養(yǎng)殖時(shí)間推移，引起水體富營(yíng)養(yǎng)化加重，高溫促使合并感染發(fā)生，引起對(duì)蝦死亡。這可能也是目前華南地區(qū)中造蝦變的難養(yǎng)的原因。

綜上，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果較好的解釋目前對(duì)蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)中一些想象，如（1）冬棚養(yǎng)殖成功率較高，即低溫狀態(tài)下病毒和細(xì)菌增殖較慢，對(duì)蝦病毒病和細(xì)菌病不容易暴發(fā)；（2）華南地區(qū)早、晚造蝦發(fā)病率高，原因主要是因?yàn)榇合慕惶婧拖那锝惶鏁r(shí)，溫度較適宜WSSV等在對(duì)蝦體內(nèi)增殖，造成WSS暴發(fā)流行。（3）隨著養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大和養(yǎng)殖時(shí)間推移，引起水體富營(yíng)養(yǎng)化加重，細(xì)菌容易大量繁殖，目前華南地區(qū)中造蝦同樣暴發(fā)病害，成功率較低，原因可能是在高溫條件細(xì)菌與WSSV合并或繼發(fā)感染，引起對(duì)蝦發(fā)病，這一點(diǎn)也和本文研究結(jié)果相吻合，因此在今后的對(duì)蝦養(yǎng)殖中，病害防治要同時(shí)防控病毒單一引發(fā)、細(xì)菌單一引發(fā)及病毒和細(xì)菌合并感染或繼發(fā)感染3種情況。

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The Pathogenicity of Micrococcus lysodeikticus and White Spot Syndrome Virus to Litopenaeus vannamei under Different Temperature Conditions

XIANG Yun,WANG Gang,YANG Shao-wen,et al
(Fisheries College,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524025,China)

Explored the pathogenicity of different concentrations of Micrococcus lysodeikticus and White Spot Syndrome Virus to Litopenaeus vannamei under three different temperature conditions(19±1℃,25±1℃, 31±1℃).The paper recorded the mortality and detect viral load in vannamei by singal or combined infection with two pathogens.The results showed that when the temperature was 19±1℃,the cumulative mortality andviral load of each group were respectively lower than 7.7%and 8.6×102copy/g;When the temperature was 25± 1℃,there was a significant difference between the WSSV single-infection group and co-infection group at 48-96 h(P＜0.05),and there was also a remarkable disparity between co-infection group in different concentrations(P＜0.05)with the maximum mortality and viral load of 7.7%and 6.2×105copy/g(under the concentration of 9.5×107cfu/mL).Under the condition of 31±1℃,the cumulative mortality of each group rose rapidly at 48 h. The mortality and virus carrying amount of co-infection group(max:75.6%，2.0×106copy/g)were obviously higher than the single-infection ones(42.2%，2.2×104copy/g).As the time of infection prolonged,the mortality caused by single-infection group grew with the increase of virus concentration(mortality max:71.1%).Therefore,coinfection is more harmful than single ones.What is more,the pathogenicity of M.lysodeikticus and co-infection group on L.vannamei′s breeding increase as the temperature goesd up,from which we learned that temperature could significantly affect the pathogenicity of M.lysodeikticus and WSSV.

temperature;Micrococcus lysodeikticus;White Spot Syndrome Virus;Litopenaeus vannamei

S945.4+9

A

1008－830X(2014)04－0304－07

2014-03-10

科技部星火計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2010GA800008)；廣東省海洋漁業(yè)科技推廣專項(xiàng)（A201301D02）；湛江市自主創(chuàng)新企業(yè)科技創(chuàng)新項(xiàng)目（2011[79]）

向赟（1987-），男，湖南懷化人，碩士研究生，研究方向：對(duì)蝦養(yǎng)殖和病害防治.E-mail:x418312@126.com

孫成波（1970-），男，江蘇贛榆人，博士，教授，研究方向：對(duì)蝦養(yǎng)殖和病害防治.E-mail:suncb@gdou.edu