肝細(xì)胞核因子4α:肝臟疾病研究與治療的新方向

劉新育(綜述)，杭化蓮，呂成余1(審校)

(1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院普外科，南京210006;2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院肝臟外科，上海200127)

近年來(lái)，各種肝臟疾病已經(jīng)成為影響人類(lèi)健康的常見(jiàn)疾病，肝臟疾病在我國(guó)發(fā)病率較高。由于大部分肝臟疾病起病隱匿，進(jìn)展緩慢，早期臨床癥狀不典型，大多數(shù)患者就診時(shí)病情已進(jìn)展至晚期，給肝臟疾病的治療帶來(lái)很大困難。而肝臟疾病傳統(tǒng)治療的復(fù)雜性與長(zhǎng)期性則使其治愈率始終不甚理想。因此，為肝臟疾病的研究與臨床治療尋求一個(gè)新的突破口已經(jīng)成為廣大醫(yī)務(wù)工作者為之努力的方向。肝細(xì)胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α，HNF4α)被發(fā)現(xiàn)在多種肝臟疾病中都扮演著重要的角色，成為目前研究的熱點(diǎn)。HNF4α是細(xì)胞核受體超家族2A亞家族的成員[1]，在肝臟中較高表達(dá)?，F(xiàn)有的研究表明，HNF4α參與了肝細(xì)胞的糖類(lèi)代謝、脂肪代謝、蛋白質(zhì)代謝、膽汁酸合成、有毒物質(zhì)轉(zhuǎn)化等重要生理過(guò)程[2-4]，同時(shí)也是決定上皮細(xì)胞表型的重要基因。HNF4α被發(fā)現(xiàn)具有抑制肝臟腫瘤的形成和遷移、阻斷肝硬化進(jìn)程、促進(jìn)肝細(xì)胞的成熟與正常分化的作用，有可能在未來(lái)成為肝臟疾病治療的新靶點(diǎn)。該文主要就HNF4α的功能及其在肝臟疾病中的作用及臨床意義予以綜述。

1 HNF4α概述

HNF家族是一個(gè)首先在肝臟組織中被發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子家族[5]，這些轉(zhuǎn)錄因子及其相互作用構(gòu)成了復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，通過(guò)與各種靶基因調(diào)控區(qū)順式作用元件的結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控肝細(xì)胞分化及重要功能基因的表達(dá)。

HNF4是一種鋅指結(jié)構(gòu)蛋白，包括位于N端含兩個(gè)“鋅指基序”的DNA結(jié)合區(qū)和位于C端的配體結(jié)合區(qū)[6]，其氨基酸序列在進(jìn)化過(guò)程中高度保守。其中，HNF4α是 HNF4的重要亞型，其蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)由標(biāo)準(zhǔn)的六個(gè)功能性結(jié)構(gòu)域(A-F)組成:N端(A/B區(qū)域)，包含活化功能區(qū)1;DNA結(jié)合區(qū)域(區(qū)域C)，可與靶基因特殊DNA序列激素反應(yīng)元件結(jié)合;鉸鏈區(qū)(區(qū)域D);多功能配體結(jié)合區(qū)域(區(qū)域E)，包含了活化功能區(qū)2，具有受體二聚化和配體結(jié)合等功能，能結(jié)合到特定配體并且通過(guò)DNA結(jié)合區(qū)域連接鉸鏈區(qū);C端(區(qū)域F)對(duì)于配體親和力、特異性以及配體誘導(dǎo)的構(gòu)象變化等都有重要影響[7]。成人HNF4亞型依據(jù)不同的組織特異性分別或混合存在于肝臟、消化道、胰腺和腎臟中，但是只有HNF4α在以上組織均有分布[8]。

2 HNF4α的功能

現(xiàn)有的研究已證明，HNF4α在肝細(xì)胞增殖、分化、基因表達(dá)及形態(tài)結(jié)構(gòu)形成過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。肝細(xì)胞的增殖是指肝細(xì)胞通過(guò)有絲分裂產(chǎn)生子代細(xì)胞的過(guò)程，是一個(gè)受到精確調(diào)控的過(guò)程。Erdmann等[9]在研究HNF4α與糖尿病的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，HNF4α可抑制胰島β細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)其凋亡。Walesky等[10]的最新研究表明，HNF4α的這種抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用在小鼠肝臟亦有體現(xiàn)。肝細(xì)胞的分化是指在肝臟發(fā)育過(guò)程中，肝細(xì)胞的形態(tài)、功能發(fā)生特殊的變化并表現(xiàn)出其他細(xì)胞所沒(méi)有的特征。這個(gè)建立特異性的過(guò)程是在大量轉(zhuǎn)錄因子的協(xié)同作用下有序進(jìn)行的，是肝細(xì)胞特異性基因(包括白蛋白基因、細(xì)胞色素P450基因、轉(zhuǎn)鐵蛋白基因等)有序表達(dá)的結(jié)果。Nagy等[11]發(fā)現(xiàn)，在肝臟發(fā)育過(guò)程中，HNF4α初始表達(dá)于卵圓細(xì)胞分化為肝細(xì)胞時(shí);Hayhurst等[12]的研究則發(fā)現(xiàn)，在HNF4α剔除的小鼠胎肝細(xì)胞，細(xì)胞失去了正常的極性和上皮細(xì)胞特性，并且只能分化為膽管上皮細(xì)胞而不能分化成為肝細(xì)胞簇。此外，還出現(xiàn)了與細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)相一致的細(xì)胞反應(yīng)，表現(xiàn)為應(yīng)激相關(guān)蛋白的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)及細(xì)胞形態(tài)的變化，證明HNF4α可調(diào)控肝臟的正常發(fā)育和分化。Battle等[13]通過(guò)微陣列芯片和分子分析發(fā)現(xiàn)，HNF4α能調(diào)節(jié)包括上皮鈣黏素(E-cadherin)在內(nèi)的許多與細(xì)胞連接和黏附相關(guān)的蛋白的表達(dá)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，HNF4α基因剔除的小鼠在不同發(fā)育階段肝細(xì)胞均出現(xiàn)大量功能基因表達(dá)下調(diào)，這些功能基因參與肝細(xì)胞脂肪代謝、白蛋白合成、藥物解毒、能量代謝、膽汁酸合成等重要功能。Walesky等[10]發(fā)現(xiàn)，在剔除HNF4α基因的大鼠肝內(nèi)，肝糖原和肝脂肪的儲(chǔ)存量明顯減少，糖代謝和脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)下調(diào)。Lu等[14]則發(fā)現(xiàn)，HNF4α剔除后，小鼠肝臟代謝相關(guān)的二相酶，如 Oatp1a1、Ugt2a3、Sult1a1、Gstm4等表達(dá)水平下降，而有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽4(Oatp1a4)、肉毒堿/有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體2(Octn2)、尿苷二磷酸葡糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1(Ugt1a1)、雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶1E1(Sult1E1)、谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶 α4(Gstα4)、谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶m1-m3(Gstm1-m3)、多藥耐藥基因1a(Mdr1a)、多藥耐藥相關(guān)蛋白3(Mrp3)等表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而認(rèn)為HNF4α是一個(gè)反式激活因子和信號(hào)通路的適宜激活劑，調(diào)控著肝臟多種酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)。Li等[15]發(fā)現(xiàn)，HNF4α 剔除后，載脂蛋白 apoAⅠ、apoAⅡ、apoB、apoCⅡ、苯丙氨酸羥化酶、促紅細(xì)胞生成素等與成熟肝細(xì)胞功能相關(guān)的基因不表達(dá)。上述研究結(jié)果均有力證實(shí)了HNF4α是調(diào)控肝細(xì)胞功能和分化相關(guān)基因表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子?？梢?jiàn)，HNF4α具有多方面重要的生物學(xué)功能。

3 肝癌:HNF4α的抗腫瘤作用

原發(fā)性肝癌是臨床上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，根據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，全世界每年新發(fā)肝癌患者約60萬(wàn)，居惡性腫瘤的第5位;目前我國(guó)發(fā)病人數(shù)約占全球的50%以上，占全球肝癌患者的55%，肝癌已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅我國(guó)人民健康和生命的一大殺手，其危險(xiǎn)性不容小視[16]。肝癌的早期表現(xiàn)很不典型，往往容易被忽視，出現(xiàn)較典型的臨床癥狀時(shí)疾病往往已進(jìn)展到中晚期。原發(fā)性肝癌的病因至今未能完全闡明，但已證明與病毒性肝炎、肝硬化、酒精、飲食等因素密切相關(guān)。Tanaka等[17]對(duì)比了HNF4α在正常組織和肝癌組織中的表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，相比于正常組織，肝癌組織中HNF4α的表達(dá)受到明顯抑制，并指出在HNF家族中，HNF4α與肝癌的分化程度相關(guān)性最高。Walesky等[10]對(duì)剔除HNF4α基因大鼠的肝細(xì)胞進(jìn)行基因組分析發(fā)現(xiàn)，在剔除HNF4α基因的大鼠肝內(nèi)，與細(xì)胞增殖相關(guān)的細(xì)胞周期基因以及癌基因的表達(dá)被上調(diào)，尤其是c-myc及其下游基因網(wǎng)絡(luò)的表達(dá)上調(diào)最為明顯。Yin等[18]采用搭載HNF4α的腺病毒載體，將 HNF4α基因在人肝腫瘤細(xì)胞株中過(guò)表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝腫瘤細(xì)胞株出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡;將該腺病毒載體注入小鼠體內(nèi)后發(fā)現(xiàn)，肝臟轉(zhuǎn)移腫瘤的生長(zhǎng)受到抑制。Hajra等[19]在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，E-cadherin在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用。Battle等[13]的研究則發(fā)現(xiàn)，E-cadherin的表達(dá)受HNF4α的調(diào)控。Ning等[20]在前人研究的基礎(chǔ)上，取肝細(xì)胞癌造模成功的大鼠肝臟標(biāo)本，采用熒光素酶分析及核質(zhì)抽提分析等技術(shù)手段，證明了HNF4α抑制肝細(xì)胞癌的發(fā)展是通過(guò)Wnt/β聯(lián)蛋白信號(hào)通路起作用的，HNF4α可增強(qiáng)E-cadherin的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)E-cadherin/β聯(lián)蛋白復(fù)合體的活性，進(jìn)而抑制β聯(lián)蛋白的核轉(zhuǎn)位和Wnt/β聯(lián)蛋白信號(hào)通路的活化。

根據(jù)目前的研究成果，有理由認(rèn)為，HNF4α可以抑制肝臟腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移，上調(diào)HNF4α表達(dá)可能成為未來(lái)治療肝癌的“新式武器”。

4 肝硬化:HNF4α能阻斷和逆轉(zhuǎn)肝纖維化

肝硬化是由于病毒、寄生蟲(chóng)、酒食或藥物等不同病因長(zhǎng)期損害肝臟，致廣泛的肝細(xì)胞壞死、殘存肝細(xì)胞結(jié)節(jié)性再生、結(jié)締組織增生與纖維隔形成，導(dǎo)致肝小葉結(jié)構(gòu)破壞和假小葉形成，肝臟逐漸變形、變硬而發(fā)展為肝硬化。主要發(fā)病機(jī)制是肝星狀細(xì)胞在肝受到損傷時(shí)被激活，同時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)合成增加，膠原含量增多并在肝小葉內(nèi)過(guò)分沉積，內(nèi)皮細(xì)胞窗孔明顯減少，使肝竇逐漸演變?yōu)槊?xì)血管，導(dǎo)致血液與肝細(xì)胞間物質(zhì)交換障礙，增生的纖維組織相互連接形成間隔并改變肝小葉的結(jié)構(gòu)，最終導(dǎo)致肝硬化。Rygiel等[21]于2008年發(fā)現(xiàn)，肝臟上皮細(xì)胞通過(guò)上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，增加細(xì)胞外基質(zhì)的合成，從而促進(jìn)肝硬化的發(fā)展。Yue等[22]采用腺病毒載體尾靜脈注射法將HNF4α過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒導(dǎo)入二甲基亞硝胺造模成功的大鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)組大鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞及肝星狀細(xì)胞上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象受到明顯抑制，與間質(zhì)相關(guān)的基因和蛋白表達(dá)減少，肝細(xì)胞特異性蛋白表達(dá)增強(qiáng)，而干擾組則出現(xiàn)相反變化，體外實(shí)驗(yàn)也得出了相同結(jié)論。Kanazawa等[23]的研究發(fā)現(xiàn)，在HNF4α過(guò)表達(dá)的胎鼠腎組織，上皮相關(guān)基因的表達(dá)被上調(diào)，同時(shí)間質(zhì)相關(guān)基因的表達(dá)被下調(diào)，在成纖維細(xì)胞株可發(fā)現(xiàn)相同現(xiàn)象，并且發(fā)現(xiàn)HNF4α與決定細(xì)胞極性的基因表達(dá)有關(guān)。Parviz等[24]將HNF4α基因?qū)氤衫w維細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞出現(xiàn)上皮細(xì)胞特征，表明HNF4α有逆轉(zhuǎn)上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用。Zhang等[25]最近研究發(fā)現(xiàn)，在HNF4α剔除的大鼠，調(diào)控肝臟纖維化相關(guān)基因，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β、血小板源性生長(zhǎng)因子、成纖維生長(zhǎng)因子表達(dá)的關(guān)鍵蛋白早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子1水平顯著下降，最終導(dǎo)致大鼠肝硬化的發(fā)生。這從另一個(gè)新的領(lǐng)域詮釋了HNF4α在肝硬化中的重要作用。

5 肝母細(xì)胞瘤:HNF4α是希望

肝母細(xì)胞瘤是兒童最常見(jiàn)的肝臟原發(fā)性惡性腫瘤[26]，占兒童肝臟原發(fā)性惡性腫瘤的50%～60%。多見(jiàn)于嬰幼兒，尤以生后1～2年最多見(jiàn)，其中60%為小于1歲嬰兒，小于3歲者占85%～90%，男女之比為(3∶2)～(2∶1)，男性明顯多于女性。東南亞地區(qū)的發(fā)病率高于歐洲及北美地區(qū)[27]。由于其發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前肝母細(xì)胞瘤手術(shù)治療或其他介入、化療、肝移植等治療均無(wú)法從根本上治療肝母細(xì)胞瘤。隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，肝母細(xì)胞瘤相關(guān)基因的研究不斷進(jìn)步。Ishiyama等[28]采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法研究了肝母細(xì)胞瘤來(lái)源細(xì)胞系HepG2、Li24的腫瘤分化相關(guān)基因后認(rèn)為，HNF4α是與腫瘤分化相關(guān)性最高的基因之一，并提出可將HNF4α作為衡量腫瘤細(xì)胞分化程度的標(biāo)志。Lopez-Terrada等[29]收集了32例肝母細(xì)胞瘤患者的肝臟標(biāo)本，研究其Wnt、Notch信號(hào)通路的激活程度和HNF4α、表皮生長(zhǎng)因子受體、胰島素樣生長(zhǎng)因子2等腫瘤惡性轉(zhuǎn)化和異質(zhì)性相關(guān)基因的表達(dá)變化時(shí)發(fā)現(xiàn)，HNF4α僅在肝母細(xì)胞瘤的胚胎時(shí)期表達(dá)增高，其余時(shí)期均表達(dá)下降。Mizutani等[30]發(fā)現(xiàn)，在肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞系HepG2，轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Smad2/3的32.5%的結(jié)合序列能同時(shí)與HNF4α發(fā)生結(jié)合，HNF4α可影響轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β/Smad信號(hào)通路，參與調(diào)控該信號(hào)通路下游基因的表達(dá)。查閱近幾年的文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，研究HNF4α與肝母細(xì)胞瘤之間關(guān)系的文獻(xiàn)較少，鑒于HNF4α在腫瘤細(xì)胞增殖與分化過(guò)程中的特殊地位，其在肝母細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用是一個(gè)值得深入探索的新領(lǐng)域。

6 病毒性肝炎:HNF4α也許是“幫兇”

病毒性肝炎是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，全球每年有超過(guò)100萬(wàn)人死于病毒性肝炎[31]。全世界估計(jì)有57%的肝硬化病例和78%的肝細(xì)胞癌病例與乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒感染有關(guān)[32]。盡管目前甲型肝炎和乙型肝炎具備有效的預(yù)防方法，但在發(fā)展中國(guó)家，多數(shù)慢性乙型肝炎和丙型肝炎患者尚未得到有效的治療。HNF4α與病毒性肝炎的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。He等[33]采用高壓尾靜脈水動(dòng)力注射法為感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)的小鼠注入載體質(zhì)粒干擾HNF4α表達(dá)后，小鼠肝臟組織HBV的信使RNA數(shù)量減少，HBcAg陽(yáng)性減弱，說(shuō)明HNF4α與HBV病毒復(fù)制呈正相關(guān)，在感染HBV的HepG2細(xì)胞株上進(jìn)行短發(fā)夾RNA干擾實(shí)驗(yàn)，也得出類(lèi)似結(jié)論。Long等[34]對(duì)86例慢性乙型肝炎的患者行肝穿刺活檢并研究了這些患者肝內(nèi)HNF4α的表達(dá)與乙肝病毒復(fù)制的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HNF4α在患肝高水平表達(dá)的患者，其HBsAg，HBcAg和HBV DNA的升高程度較對(duì)照組更高，提示HNF4α對(duì)乙型肝炎病毒的復(fù)制起著促進(jìn)作用。而HNF4α與乙型病毒性肝炎以外其他類(lèi)型的病毒性肝炎的關(guān)系尚缺乏相關(guān)研究。

7 脂肪肝:HNF4α調(diào)控脂類(lèi)代謝

脂肪肝是一種綜合性代謝性疾病，是由肝內(nèi)脂肪氧化減弱，脂肪酸合成增多，引起肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積所致。隨著人民生活水平的提高，人們的飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生變化以及B超等檢查手段的普及，近年來(lái)發(fā)病率日漸增多，尤其是酒精性脂肪肝、肥胖性脂肪肝、糖尿病性脂肪肝最為常見(jiàn)。脂肪肝并不是一種良性及靜止性的病變，它可在短期內(nèi)發(fā)展為不可逆的肝損害，肝纖維化的發(fā)生率約為25%，1.5%～8.0%的患者可進(jìn)展為肝硬化[35]。因此，脂肪肝的防治對(duì)于阻止慢性肝病進(jìn)展和改善預(yù)后都是十分重要的。大量編碼載脂蛋白的基因和脂代謝相關(guān)酶基因都是HNF4α的下游靶基因[36]，HNF4α與脂質(zhì)的穩(wěn)態(tài)也有密切的關(guān)系[37]。Yin等[38]為小鼠尾靜脈注入腺病毒載體干擾HNF4α表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，小鼠肝臟發(fā)生脂肪化，而血清三酰甘油、總膽固醇、高密度脂蛋白水平下降了80%，同時(shí)肝細(xì)胞極低密度脂蛋白分泌功能受損。Guan等[39]發(fā)現(xiàn)，分泌型磷脂酶A2GXIIB是HNF4α的靶基因，該基因剔除后的大鼠肝內(nèi)三酰甘油、膽固醇、脂肪酸堆積，引起肝脂肪變。Chen等[40]研究發(fā)現(xiàn)，脂素基因Lipin1的活化可引起多個(gè)脂肪酸代謝相關(guān)酶的表達(dá)增強(qiáng)，而Lipin1的表達(dá)受到HNF4α的調(diào)控。可見(jiàn)，HNF4α調(diào)控著許多脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)，其缺失會(huì)引發(fā)機(jī)體嚴(yán)重的脂代謝紊亂，HNF4α在維持正常脂質(zhì)代謝方面必不可少。HNF4α在脂肪肝發(fā)生、發(fā)展中的作用將繼續(xù)成為今后的研究熱點(diǎn)之一。

8 小結(jié)

HNF4α在不同的肝臟疾病中所起的作用不同，研究結(jié)果表明，HNF4α表達(dá)的高低，會(huì)直接影響某些肝臟疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。人們可以通過(guò)研究HNF4α在肝臟疾病中的表達(dá)變化及其與細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)、信號(hào)通路的激活和抑制等方面的聯(lián)系，探索某些肝臟疾病的發(fā)病機(jī)制。同時(shí)，可以參考HNF4α在各種常見(jiàn)肝臟疾病中的作用，通過(guò)人工調(diào)節(jié)HNF4α表達(dá)的方法，抑制疾病的進(jìn)展，促進(jìn)患者的康復(fù)。但是HNF4α在某些肝臟疾病中的作用及相互關(guān)系尚不清楚，有待進(jìn)一步的研究。鑒于HNF4α在肝臟疾病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的重要作用，HNF4α的進(jìn)一步深入探索必將為肝臟疾病的研究及治療提供新的思路及方向。

[1]Jiang H，Lucy MC.Involvement of hepatocyte nuclear factor-4 in the expression of the growth hormone receptor 1A messenger ribonucleic acid in bovine liver[J].Mol Endocrinol，2001，15(6):1023-1034.

[2]Bagwell AM，Bailly A，Mychaleckyj JC，et al.Comparative genomic analysis of the HNF-4alpha transcription factor gene[J].Mol Genet Metab，2004，81(2):112-121.

[3]Watt AJ，Garrison WD，Duncan SA.HNF4:a central regulator of hepatocyte differentiation and function[J].Hepatology，2003，37(6):1249-1253.

[4]Chiang JY.Hepatocyte nuclear factor 4alpha regulation of bile acid and drug metabolism[J].Expert Opin Drug Metab Toxicol，2009，5(2):137-147.

[5]Courtois G，Morgan JG，Campbell LA，et al.Interaction of a liverspecific nuclear factor with the fibrinogen and alpha 1-antitrypsin promoters[J].Science，1987，238(4827):688-692.

[6]Petrescu AD，Hertz R，Bar-Tana J，et al.Role of regulatory F-domain in hepatocyte nuclear factor-4alpha ligand specificity[J].J Biol Chem，2005，280(17):16714-16727.

[7]Hertz R，Kalderon B，Byk T，et al.Thioesterase activity and acyl-CoA/fatty acid cross-talk of hepatocyte nuclear factor-4{alpha}[J].J Biol Chem，2005，280(26):24451-24461.

[8]Odom DT，Zizlsperger N，Gordon DB，et al.Control of pancreas and liver gene expression by HNF transcription factors[J].Science，2004，303(5662):1378-1381.

[9]Erdmann S，Senkel S，Arndt T，et al.Tissue-specific transcription factor HNF4alpha inhibits cell proliferation and induces apoptosis in the pancreatic INS-1 beta-cell line[J].Biol Chem，2007，388(1):91-106.

[10]Walesky C，Edwards G，Borude P，et al.Hepatocyte nuclear factor 4 alpha deletion promotes diethylnitrosamine-induced hepatocellular carcinoma in mice[J].Hepatology，2013，57(6):2480-2490.

[11]Nagy P，Bisgaard HC，Thorgeirsson SS.Expression of hepatic transcription factors during liver development and oval cell differentiation[J].J Cell Biol，1994，126(1):223-233.

[12]Hayhurst GP，Strick-Marchand H，Mulet C，et al.Morphogenetic competence of HNF4 alpha-deficient mouse hepatic cells[J].J Hepatol，2008，49(3):384-395.

[13]Battle MA，Konopka G，Parviz F，et al.Hepatocyte nuclear factor 4alpha orchestrates expression of cell adhesion proteins during the epithelial transformation of the developing liver[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2006，103(22):8419-8424.

[14]Lu H，Gonzalez FJ，Klaassen C.Alterations in hepatic mRNA expression of phaseⅡenzymes and xenobiotic transporters after targeted disruption of hepatocyte nuclear factor 4 alpha[J].Toxicol Sci，2010，118(2):380-390.

[15]Li J，Ning G，Duncan SA.Mammalian hepatocyte differentiation requires the transcription factor HNF-4alpha[J].Genes Dev，2000，14(4):464-474.

[16]陸再英，鐘南山.內(nèi)科學(xué)[M].7版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:457-462.

[17]Tanaka T，Jiang S，Hotta H，et al.Dysregulated expression of P1 and P2 promoter-driven hepatocyte nuclear factor-4alpha in the pathogenesis of human cancer[J].J Pathol，2006，208(5):662-672.

[18]Yin C，Lin Y，Zhang X，et al.Differentiation therapy of hepatocellular carcinoma in mice with recombinant adenovirus carrying hepatocyte nuclear factor-4alpha gene[J].Hepatology，2008，48(5):1528-1539.

[19]Hajra KM，Chen DY，F(xiàn)earon ER.The SLUG zinc-finger protein represses E-cadherin in breast cancer[J].Cancer Res，2002，62(6):1613-1618.

[20]Ning BF，Ding J，Yin C，et al.Hepatocyte nuclear factor 4 alpha suppresses the development of hepatocellular carcinoma[J].Cancer Res，2010，70(19):7640-7651.

[21]Rygiel KA，Robertson H，Marshall HL，et al.Epithelial-mesenchymal transition contributes to portal tract fibrogenesis during human chronic liver disease[J].Lab Invest，2008，88(2):112-123.

[22]Yue HY，Yin C，Hou JL，et al.Hepatocyte nuclear factor 4alpha attenuates hepatic fibrosis in rats[J].Gut，2010，59(2):236-246.

[23]Kanazawa T，Ichii O，Otsuka S，et al.Hepatocyte nuclear factor 4 alpha is associated with mesenchymal-epithelial transition in developing kidneys of C57BL/6 mice[J].J Vet Med Sci，2011，73(5):601-607.

[24]Parviz F，Matullo C，Garrison WD，et al.Hepatocyte nuclear factor 4alpha controls the development of a hepatic epithelium and liver morphogenesis[J].Nat Genet，2003，34(3):292-296.

[25]Zhang Y，Bonzo JA，Gonzalez FJ，et al.Diurnal regulation of the early growth response 1(Egr-1)protein expression by hepatocyte nuclear factor 4alpha(HNF4alpha)and small heterodimer partner(SHP)cross-talk in liver fibrosis[J].J Biol Chem，2011，286(34):29635-29643.

[26]Stiller CA，Pritchard J，Steliarova-Foucher E.Liver cancer in European children:incidence and survival，1978-1997.Report from the Automated Childhood Cancer Information System Project[J].Eur J Cancer，2006，42(13):2115-2123.

[27]董倩.小兒肝膽外科學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:225-235.

[28]Ishiyama T，Kano J，Minami Y，et al.Expression of HNFs and C/EBP alpha is correlated with immunocytochemical differentiation of cell lines derived from human hepatocellular carcinomas，hepatoblastomas and immortalized hepatocytes[J].Cancer Sci，2003，94(9):757-763.

[29]Lopez-Terrada D，Gunaratne PH，Adesina AM，et al.Histologic subtypes ofhepatoblastoma are characterized by differential canonical Wnt and Notch pathway activation in DLK+precursors[J].Hum Pathol，2009，40(6):783-794.

[30]Mizutani A，Koinuma D，Tsutsumi S，et al.Cell type-specific target selection by combinatorial binding of Smad2/3 proteins and hepatocyte nuclear factor 4alpha in HepG2 cells[J].J Biol Chem，2011，286(34):29848-29860.

[31]McBride G.Hepatitis B virus-induced liver cancer in Asian Americans:a preventable disease[J].J Natl Cancer Inst，2008，100(8):528-529.

[32]李杰，莊輝.病毒性肝炎流行病學(xué)進(jìn)展[J].肝臟，2012，17(1):2-5.

[33]He F，Chen EQ，Liu L，et al.Inhibition of hepatitis B virus replication by hepatocyte nuclear factor 4-alpha specific short hairpin RNA[J].Liver Int，2012，32(5):742-751.

[34]Long Y，Chen E，Liu C，et al.The correlation of hepatocyte nuclear factor 4 alpha and 3 beta with hepatitis B virus replication in the liver of chronic hepatitis B patients[J].J Viral Hepat，2009，16(8):537-546.

[35]曾民得.脂肪肝[J].中華消化雜志，1999，19(2):120-122.

[36]Sladek FM.Orphan receptor HNF-4 and liver-specific gene-expression[J].Receptor，1993，3(3):223-232.

[37]Hayhurst GP，Lee YH，Lambert G，et al.Hepatocyte nuclear factor 4alpha(nuclear receptor 2A1)is essential for maintenance of hepatic gene expression and lipid homeostasis[J].Mol Cell Biol，2001，21(4):1393-1403.

[38]Yin LY，Ma HY，Ge XM，et al.Hepatic hepatocyte nuclear factor 4α is essential for maintaining triglyceride and cholesterol homeostasis[J].Arterioscl Throm Vas，2011，31(2):328-336.

[39]Guan M，Qu LB，Tan WJ，et al.Hepatocyte nuclear factor-4 alpha regulates liver triglyceride metabolism in part through secreted phospholipase A2GXIIB[J].Hepatology，2011，53(2):458-466.

[40]Chen Z，Gropler MC，Mitra MS，et al.Complex interplay between the lipin 1 and the hepatocyte nuclear factor 4 alpha(HNF4alpha)pathways to regulate liver lipid metabolism[J].PLoS One，2012，7(12):e51320.