HPLC法測定醋酸曲安奈德搽劑的含量及有關(guān)物質(zhì)

張 磊

（臨沂市食品藥品檢驗檢測中心，山東臨沂276000）

HPLC法測定醋酸曲安奈德搽劑的含量及有關(guān)物質(zhì)

張 磊

（臨沂市食品藥品檢驗檢測中心，山東臨沂276000）

目的建立高效液相色譜法測定醋酸曲安奈德搽劑含量及有關(guān)物質(zhì)的方法。方法使用Capcell Pak C18（4.6mm×150mm，5μm），流動相為甲醇－水（70∶30），檢測波長為240 nm，流速為1.0mL·min－1，柱溫為30℃。結(jié)果醋酸曲安奈德的線性范圍為：5.170～51.70μg·mL－1（r＝0.999 9）；平均回收率為102.90%，RSD為1.3%。結(jié)論該方法簡便，快速，準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可用于醋酸曲安奈德搽劑含量和有關(guān)物質(zhì)的控制方法。

醋酸曲安奈德；高效液相色譜法；含量測定；有關(guān)物質(zhì)

醋酸曲安奈德搽劑是由醋酸曲安奈德溶于二甲基亞砜中，加適量乙醇和甘油制成的醫(yī)院制劑。臨床用于治療神經(jīng)性皮炎、濕疹及銀屑病等有較好的療效。目前，對于該制劑含量測定方法僅限于分光光度法［1，2］。另外，該制劑中醋酸曲安奈德易降解產(chǎn)生曲安奈德［3］，所以有必要對該制劑中有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制。為使該制劑質(zhì)量控制方法快速、準(zhǔn)確，本文建立了高效液相色譜法同時測定含量及有關(guān)物質(zhì)，該方法準(zhǔn)確可靠，操作簡便易行。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Agilent 1200液相色譜儀，包括自動脫氣機(jī)、四元泵、自動進(jìn)樣系統(tǒng)、紫外檢測器、柱溫箱、1200化學(xué)工作站、Mettler XS205電子分析天平。Capcell Pak C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm，Col NO.AKAB04912，Col NO.AKAB04913）；Inertsil ODS SP色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；SunFire C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm）。

1.2 試藥 醋酸曲安奈德搽劑（臨沂市皮膚病醫(yī)院制劑室提供，批號：20120811、20120906、20120911），醋酸曲安奈德對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100125－200404）；曲安奈德對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100055－200302）；色譜純甲醇，高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Capcell PAK C18（4.6 mm×150 mm，5μm），流動相：甲醇－水（70∶30），檢測波長：240 nm，流速：1.0 mL·min－1，進(jìn)樣量：20μL，柱溫：30℃。精密量取混合對照品溶液20μL，注入液相色譜儀，理論板數(shù)按醋酸曲安奈德峰計不低于2 000，醋酸曲安奈德峰與曲安奈德峰之間的分離度符合要求，見圖1。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液 精密量取本品2 mL，置50mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液儲備液 精密稱取醋酸曲安奈德對照品約10 mg，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液儲備液。

2.2.3 混合對照品溶液 精密稱取醋酸曲安奈德對照品與曲安奈德對照品約25 mg，分別置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述兩種對照品溶液各1 mL，置同一100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液。

圖1 HPLC圖譜

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取對照品溶液儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL分別置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為系列溶液，用0.45 μm微孔濾膜過濾后，注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件測定。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，對照品溶液濃度（X，μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y＝39.606X＋2.366 3（r＝0.999 9），表明醋酸曲安奈德在5.170～51.70μg·mL－1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.4 穩(wěn)定性考察 取本品，按“2.2.1”供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果醋酸曲安奈德及曲安奈德峰面積RSD分別為0.7%、1.2%。表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 精密度考察 取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定醋酸曲安奈德峰面積。結(jié)果：RSD＝0.2%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性考察 按“2.2.1”方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣。結(jié)果：6份樣品平均含量為0.54 mg·mL－1，RSD＝0.7%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗 精密量取樣品1 mL，置50 mL量瓶中，分別精密加入對照品儲備液4、5、6 mL，每個濃度制備3份樣品，按“2.2.1”方法制備供試品溶液，精密吸取20μL，注入液相色譜儀，計算加樣回收率。結(jié)果，其平均回收率為：102.90%，RSD＝1.3%。說明該方法可行。加樣回收率試驗結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）

2.8 檢測限和定量限 精密吸取混合對照品溶液適量，加流動相逐步稀釋成不同濃度的溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣，按信噪比S／N＝10測定其定量限，按信噪比S／N＝3測定其檢出限。測得醋酸曲安奈德的定量限為0.3μg·mL－1，曲安奈德的檢出限為0.1μg·mL－1。

2.9 方法專屬性試驗 取本品2 mL，置50 mL量瓶中，分別進(jìn)行以下試驗：①光破壞：加流動相稀釋至刻度，置于強(qiáng)光下（4 500 Lx）照射24 h；②高溫破壞：加流動相適量，置于水浴中加熱5 h后，放至室溫，加流動相至刻度；③氧化破壞：加30%過氧化氫2 mL，振搖，水浴加熱30 mim，放至室溫，加流動相至刻度；④酸破壞：加0.5 mol·L－1的鹽酸溶液2 mL，振搖，水浴加熱30 mim，放至室溫，用0.5 mol· L－1的氫氧化鈉溶液2mL中和，加流動相至刻度；⑤堿破壞：加0.1 mol·L－1的氫氧化鈉溶液2 mL，振搖，水浴加熱30 min，放至室溫，用0.1 mol·L－1的鹽酸溶液2 mL中和，加流動相至刻度；⑥空白：稀釋所用流動相。取上述溶液分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。在建立的色譜條件下，醋酸曲安奈德峰和曲安奈德峰之間的分離度良好，且與其他雜質(zhì)峰之間成到完全分離，基線平穩(wěn)，在醋酸曲安奈德出峰處無雜質(zhì)峰干擾。且經(jīng)破壞試驗后，產(chǎn)生的降解雜質(zhì)主要為曲安奈德。

2.10 耐用性考察 通過改變流動相比例變化甲醇－水（65∶35）與甲醇－水（75∶25）；柱溫變化30、40℃及室溫；流速0.8 mL·min－1及1.2 mL·min－1；色譜柱品牌型號Capcell Pak C18色譜柱（4.6 mm× 150 mm，5μm，Col NO.AKAB04912，Col NO.AKAB04913）；Inertsil ODS SP色譜柱（4.6 mm ×150 mm，5μm）；SunFire C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm）等試驗條件，經(jīng)試驗，以上變動均能通過本試驗系統(tǒng)適用性試驗的要求。

圖2 破壞試驗色譜圖

2.11 樣品含量測定 按“2.2.1”方法制備供試品溶液，按色譜條件進(jìn)液相，記錄色譜圖，求得樣品中醋酸曲安奈德含量見表2。同時，按照參考文獻(xiàn)［1］報道的方法進(jìn)行含量測定，3批樣品的含量測定結(jié)果如表2所示。

表2 樣品測定結(jié)果（n＝2）

2.12 有關(guān)物質(zhì) 分別取3批樣品，按“2.2.1”方法制備供試品溶液，每批2份；按“2.2.3”方法制備雜質(zhì)對照品溶液。分別取供試品溶液和雜質(zhì)對照品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分保留時間的2倍。按外標(biāo)法以醋酸曲安奈德標(biāo)示量計算雜質(zhì)曲安奈德的含量，結(jié)果見表2，3批樣品雜質(zhì)含量均未超過1.0%，且未檢出其他有關(guān)物質(zhì)。

3 討論

3.1 流動相的選擇 本研究分別考察了甲醇－水在不同比例時的色譜圖，結(jié)果表明，甲醇比例大于75%時，曲安奈德峰保留時間太短，與輔料峰分離較差；當(dāng)甲醇比例小于65%時，醋酸曲安奈德峰保留時間太長，峰形較寬，積分不準(zhǔn)確；選擇甲醇－水比例為70∶30時，色譜峰之間的分離度較好，且基線平穩(wěn)峰形較好，積分準(zhǔn)確。

3.2 檢測波長的選擇 本研究對醋酸曲安奈德和曲安奈德進(jìn)行紫外光譜掃描，發(fā)現(xiàn)兩種成分在240 nm處均有較大吸收。同時參考《中國藥典》2010年版（二部）中醋酸曲安奈德原料藥的檢測方法［4］，選擇在240 nm紫外波長處進(jìn)行檢測。

醋酸曲安奈德是臨床廣泛應(yīng)用的激素類藥物，臨床應(yīng)用時往往做成各種劑型，《中國藥典》2010年版（二部）收載的有乳膏和注射液［4］，其含量測定方法也有分光光度法和高效液相色譜法，對于醋酸曲安奈德搽劑含量測定方法僅有分光光度法。但是，分光光度法受顯色條件的影響較大，其測定結(jié)果準(zhǔn)確性較差。本研究采用高效液相色譜法，其測定結(jié)果準(zhǔn)確度和靈敏度均較分光光度法有較大提高。且此方法操作簡單，重復(fù)性好，對于該制劑的質(zhì)量控制具有較高的實用價值。

［1］劉榮，張顯杰，譚賀文，等.醋酸曲安奈德搽劑的含量測定［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2004，20（4）：308－310.

［2］陳新善，劉玉波，張波，等.分光光度法測定復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德的含量［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2004，17（4）：227－228.

［3］郭江紅，趙亞萍，姜紅，等.RP－HPLC法測定曲安奈德氯霉素溶液的含量及有關(guān)物質(zhì)［J］.藥物分析雜志，2012，32（2）：323－326.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1122－1123.

Determ ination of triam cinolone acetonide and its related substances in Triam cinolone Acetonide Acetate Liniment by HPLC

ZHANG Lei
（Linyi Center for Food and Drug Testing，Linyi276000，China）

ObjectiveTo establish amethod for the determination of triamcinolone acetonide and its related substances in Triamcinolone Acetonide Acetate Liniment.M ethodsA Capcell Pak C18（4.6mm×150mm，5μm）column was adopted with amobile phase ofmethanol－water（70∶30）at the flow rate of1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 240 nm，and the column temperature was 30℃.ResultsThe linear range of triamcinolone acetonide acetate was 5.170～51.70μg·mL－1（r＝0.999 9）.The average recovery was102.90%，and the RSD was1.3%.ConclusionThe proposed method was simple，rapid，accurate，repeatable，and can be used to control the quality of Triamcinolone Acetonide Acetate Liniment.

Triamcinolone acetonide acetate；HPLC；Determination；Rrelated substances

R927.2

A

2095－5375（2014）02－0087－003

張磊，男，研究方向：藥品檢驗，E－mail：lei0528＠126.com