HPLC法測定依諾沙星膠囊的溶出度

蔡 群，孔令洋，孫巧巧

（1.濟寧市第一人民醫(yī)院，山東濟寧272100；2.濟寧市藥品檢驗所，山東濟寧272100）

HPLC法測定依諾沙星膠囊的溶出度

蔡 群1，孔令洋2，孫巧巧2

（1.濟寧市第一人民醫(yī)院，山東濟寧272100；2.濟寧市藥品檢驗所，山東濟寧272100）

目的建立依諾沙星膠囊的溶出度測定方法。方法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.025 mol·L－1磷酸溶液（用三乙胺調節(jié)pH至3.0）－甲醇－乙腈（80∶10∶10）為流動相，檢測波長為269 nm；分別采用HPLC法和藥典規(guī)定的紫外對照品對照法測定依諾沙星膠囊的溶出度。結果依諾沙星在5～200μg·mL－1范圍內線性良好（r＝0.999 9，n＝6），回收率為100.6%，RSD＝0.6%。結論本方法準確、靈敏、重現性好、可行。

溶出度；依諾沙星膠囊；紫外分光光度法；高效液相色譜法

依諾沙星是第三代的氟喹諾酮類抗生素，具有廣譜、強效殺菌作用，與其他抗菌藥物間并無明顯交叉耐藥，對多重耐藥的腸桿菌科仍高度敏感。原標準收載的溶出度測定方法為紫外法測定，其缺點是專一性不強，靈敏度和準確度不高。測定的結果明顯偏高，很可能是輔料及膠囊殼引起的干擾，而用高效液相色譜法可以很好的避免這種現象。

1 儀器和試劑

Agilent 1200 series高效液相色譜儀，TU－1800SPC紫外分光光度計，D－800LS溶出度儀，電子分析天平（BT25S d＝0.01 mg北京賽多利斯儀器系統有限公司），500型超聲清洗機（山東濟寧亨達超聲設備有限公司）；甲醇（色譜純），純化水，乙腈（色譜純），85%磷酸溶液，依諾沙星對照品（91.1%，中國藥品生物制品檢定所），3批依諾沙星膠囊（0.1 g，兗州生寶制藥有限公司）。

2 方法

2.1 色譜條件 照依諾沙星含量測定項下色譜方法［1］：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.025 mol／L磷酸溶液（用三乙胺調節(jié)pH至3.0）－甲醇－乙腈（80∶10∶10）為流動相，流速：1 mL·min－1，柱溫：30℃，檢測波長為269 nm。

2.2 溶出方法 照溶出度測定法［1］（籃法），以稀鹽酸溶液（稀鹽酸24 mL加水至1 000 mL）900 mL為溶出介質，轉速為100 rmp，溫度設定37℃，依法操作，經30 min取樣。

2.3 線性關系考察 精密稱取依諾沙星對照品0.021 67 g置100 mL容量瓶中，加流動相溶解至刻度，搖勻，作為儲備液。分別取2.5、5、10、25、50 mL置100mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成溶液。于上述6份溶液中分別取20μL進樣測定。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程A＝150.724 1C－147.668，r＝0.999 9（n＝6）。結果表明，依諾沙星在5～200μg·mL－1濃度范圍內，其濃度與吸收度呈現良好的線性關系。

2.4 輔料干擾試驗 取約相當于一粒膠囊的輔料成分，置100 mL容量瓶中，加適量溶出介質，超聲使其溶解，再加至刻度，搖勻，濾過（0.45μm微孔濾膜），取續(xù)濾液5 mL至50 mL容量瓶中，加溶出介質稀釋至刻度，高效液相下進樣。在15 min內無明顯色譜峰。

2.5 精密度試驗 取“2.3”項下儲備液，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成溶液，作為對照品溶液。重復進樣5次，RSD＝0.12%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取“2.3”項下的50μg·mL－1對照品溶液，分別在1、2、4、6、8 h進行測定，RSD＝0.5%，結果表明，依諾沙星溶液在8 h內穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗 取同一批樣品6份，加溶出介質溶解并稀釋至50μg·ml－1的供試品溶液，分別進樣測定，記錄色譜圖計算含量，結果RSD＝0.4%，表明該方法重復性良好。

2.8 回收率試驗 按依諾沙星膠囊的80%、100%、120%分別精密稱取依諾沙星對照品適量，與相應輔料混合均勻。照溶出度測定法（籃法）進行測定，30min后取樣，濾過，取續(xù)濾液；另精密稱取依諾沙星對照品適量，制成約50μg·mL－1的對照品溶液。外標法測定，計算回收率（見表1）。實驗結果表明，本方法的回收率較好，平均回收率為100.6%（RSD＝0.6%，n＝9）。

表1 回收率試驗測定結果

2.9 供試品溶出度測定 紫外分光光度法：取過濾后的溶出液適量，用溶出介質定量稀釋成每1 mL中約含依諾沙星4μg的溶液，在268 nm的波長處測定吸光度；另取依諾沙星對照品適量，加溶出介質定量稀釋成每1 mL中約含依諾沙星4μg的溶液，同法測定，計算每粒膠囊的溶出量。

高效液相色譜法：取過濾后的溶出液適量，用流動相稀釋成50μg·mL－1溶液，照含量測定法進行測定（見表2、圖1）。

圖1 供試品溶液色譜圖

表2 供試品測定結果

3 結果和討論

3.1 結果 溶出度測定方法比較（見表3）。

表3 溶出度測定方法比較

3.2 討論 原標準收載的溶出度測定方法簡便易行，但其缺點是專一性不強，靈敏度和準確度不高［2］。如上表3所示，紫外法測定的結果明顯偏高，很可能是輔料及膠囊殼引起的干擾，而用高效液相色譜法可以很好的避免這種現象。膠囊殼質量的不同，紫外吸收強度也各不相同，故UV法測定時常常有干擾。一般采用取6?？瞻啄z囊殼測定，以排除干擾（《中國藥典》2010年版）。但筆者認為，嚴格按照樣品測定的步驟，取6?？瞻啄z囊殼進行試驗，工作量大，且由于干擾不一，會給測定結果帶來誤差。故仍建議采用HPLC法，而無需再進行膠囊殼的空白試驗。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版（二部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］孔令洋，孫巧巧，薛雯.HPLC法測定頭孢羥氨芐膠囊的溶出度［J］.藥學研究，2013，32（9）：515－516.

Determ ination of the dissolution of Enoxacin Capsules by HPLC

CAIQun1，KONG Ling-yang2，SUN Qiao-qiao2
（1.Jining First People′s Hospital，Jining 272100，China；2.Jining Institute for Drug Control，Jining 272100，China）

ObjectiveTo establish the assay method of dissolution test on Enoxacin Capsules.M ethodsA Phenomenex C18Column was used with themobile phase of0.025mol·L－1phosphoric acid（pH was adjusted to 3 with triethylamine）－methanol－acetonitrile（80∶10∶10）.The determination wavelength was 269 nm.The method of HPLC and the method of UV was compared.ResultsThe Enoxacin Capsules was linear within the concentration range of 5～200μg· mL－1（r＝0.999 9，n＝6）.The average recovery was100.6%and RSD was0.6%.ConclusionThe result shows that the method was accurat，reliable，recurrentwell，and can be used for the quality control.

Dissolution；Enoxacin Capsules；UV；HPLC

R927.11

A

2095－5375（2014）02－0096－003

蔡群，女，研究方向：醫(yī)學檢驗，E－mail：konglingyang123＠eyou.com