中藥抗酒精性肝損傷的實驗研究現(xiàn)狀

太海燕(綜述)，張善玉，樸蓮荀(審校)

(長白山生物資源與功能分子教育部重點實驗室 延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林 延吉 133002)

長期過量飲酒可導(dǎo)致酒精在體內(nèi)蓄積,使肝臟發(fā)生不同程度損傷，最終導(dǎo)致酒精性肝病[1]。在西方國家酒精性肝病已被列為與肝臟疾病相關(guān)的疾病及死亡的主要原因之一[2]。在我國隨著經(jīng)濟的發(fā)展和人民生活水平的提高，酒精消費群體日益龐大，酒精性肝病的發(fā)病率也逐步上升，開發(fā)防治酒精性肝病的藥物及保健食品受到醫(yī)藥及食品行業(yè)的普遍重視。目前，西方國家開發(fā)的產(chǎn)品大多以合成藥物為主，但是西藥有不良反應(yīng)多、價格昂貴、患者不能長期服用等缺陷。因此,探討和研究中藥對酒精性肝損傷的保護(hù)作用及其機制，對研發(fā)高效、低毒、價廉的防治酒精性肝病的新藥，具有重要的社會和臨床意義。

1 酒精性肝損傷模型的建立

酒精性肝損傷模型的建立與多種因素有關(guān)，根據(jù)所用動物種屬、造模方法、造模持續(xù)時間及實驗?zāi)康牡炔煌胁煌奶攸c。理想的動物模型應(yīng)該是與人類患病特征相似，多采用小鼠或大鼠做實驗動物；病變有一定的發(fā)展過程；成功率高、病死率低、重復(fù)性好；造模方法簡便易行，造模停止后病變逆轉(zhuǎn)緩慢，便于進(jìn)行藥物干預(yù)研究[3]。目前，抗酒精性肝損傷實驗研究中酒精中毒模型主要有兩種，即急性酒精中毒模型及慢性酒精中毒模型。

1.1急性酒精性肝損傷模型 急性酒精性肝損傷模型造模時間短，操作方便，大、小鼠均可，所用酒精一般來源于市售白酒，也有用分析純級別的酒精造模，該模型可用于藥效學(xué)的初步判斷。彭勃等[4]采用每日禁食不禁水6 h后，小鼠按14 mL/kg、大鼠按8 mL/kg灌胃56度北京紅星二鍋頭，0.5 h后，給藥或生理鹽水，連續(xù)造模和給藥5 d的方法，探討了橄欖解酒飲對大小鼠急性酒精性肝損傷的影響。也有每次給藥后1 h，用35度二鍋頭白酒灌胃，用量16 mL/kg，每日1次,共10次的方法和每日上午按16 mL/(kg·d)劑量灌胃56度白酒，每日1次，連續(xù)灌胃2周造模的方法[5-6]。

1.2慢性酒精肝損傷模型 慢性酒精性肝損傷模型造模時間一般為數(shù)周至數(shù)月，大、小鼠均可，隨造模時間的延長，可觀察到ALD漸進(jìn)的病理過程。抗酒精性肝損傷中藥開發(fā)研究中普遍采用慢性酒精性肝損傷模型。例如，給予大鼠50度白酒灌胃，每日上午灌胃給藥，下午灌胃給酒，持續(xù)12周，建立酒精性肝損傷大鼠模型[7]。大鼠正常飼養(yǎng)1周后，自由飲用酒精飲料(含18%蔗糖)，其酒精濃度從5%開始，每個濃度維持1周，依次增加為10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%，40%持續(xù)至第12周[8]。以30%酒精(56度北京紅星二鍋頭用蒸餾水稀釋成體積百分比為30%的酒精)10 mL/kg，每日2次灌胃至第4次周末；自第5周，以40%酒精，11 mL/kg,每日2次灌胃至8周末；自第9周，以50%酒精，12 mL/kg，每日2次灌胃至第12周末，造模周期共12周[9]。

2 觀察療效的主要指標(biāo)

2.1觀察動物的一般情況 酒精性肝損傷模型鼠大多是毛色黯淡、無光澤，出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象，體質(zhì)量減輕。觀察醉酒潛伏期、醉酒動物數(shù)、死亡數(shù)，以便隨時掌握最佳灌酒量及藥物作用的有效性。劉超群等[10]實驗發(fā)現(xiàn)與模型組比較大蒜多糖各組小鼠體質(zhì)量有所增加，以高、中劑量組效果顯著，且各劑量組肝質(zhì)量指數(shù)顯著降低，表明大蒜多糖具有改善慢性酒精中毒小鼠的食欲和吸收功能的作用，并對其肝臟損傷有一定保護(hù)作用。也有采用醉酒率和醒/醉比為觀察指標(biāo)觀察抗酒精毒性的研究，即彭勃等[4]實驗發(fā)現(xiàn)在醉酒率方面,橄欖解酒飲大、中、小劑量組小鼠均顯著低于模型組，在醒/醉比方面,橄欖解酒飲中、小劑量小鼠組、橄欖解酒飲中劑量組小鼠均顯著高于模型組和對照組，說明橄欖解酒飲既有預(yù)防醉酒的作用,又有醉酒后加快醒酒的作用。

2.2生化指標(biāo)的檢測 由于酒精在胃腸道中很快被吸收并進(jìn)入肝臟代謝，因此肝臟是受到酒精損傷最嚴(yán)重的器官。轉(zhuǎn)氨酶是肝細(xì)胞損傷最敏感的生化指標(biāo)之一[11]。血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性的升高在一定程度上反映了肝細(xì)胞損傷的程度。肝細(xì)胞脂肪變性是酒精性肝病的最初階段，這一過程復(fù)雜，存在多種機制。引起脂肪變性的主要致病因子包括脂肪酸和三酰甘油。測定血液及肝組織脂肪水平是抗酒精性肝病藥物及保健食品開發(fā)研究中廣泛采用的方法之一。例如，實驗發(fā)現(xiàn)[12]南極磷蝦油能有效降低肝組織中三酰甘油水平，故能減少脂肪滴在肝細(xì)胞中的積蓄，從而緩解酒精對肝細(xì)胞的損傷；清肝利濕解酒湯和復(fù)方益肝靈片[13]能顯著降低大鼠血清中三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白的水平，復(fù)方益肝靈片高劑量組能顯著升高低密度脂蛋白的水平，具有改善脂質(zhì)及脂蛋白代謝紊亂、防止肝細(xì)胞脂肪變性的作用。童妍等[14]在實驗中發(fā)現(xiàn)荊防敗毒散加減可顯著降低大鼠丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶及天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的活性，且陽性對照組大鼠與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。宋寧等[15]研究表明，柴胡黃芩配伍不同部位能夠顯著降低急性酒精性肝損傷大鼠血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的水平。

2.3觀察肝臟病理組織學(xué)變化 肉眼觀察：正常的肝臟顏色暗紅，被膜光滑，質(zhì)地較軟；異常的肝臟色澤較晦黯，無光澤，肝細(xì)胞腫大，質(zhì)地較韌。光鏡下觀察：H/E染色，正常的肝臟，肝細(xì)胞以小葉中央經(jīng)脈中心呈放射狀排列，肝小葉輪廓清晰；異常的肝臟，多數(shù)肝細(xì)胞有水樣變性，輕度脂肪變，散在炎性細(xì)胞浸潤[15-16]。例如，姬菇多糖低劑量組較模型組癥狀減輕，脂肪空泡減少，中劑量組除了血管周圍少量肝細(xì)胞腫脹之外，肝細(xì)胞排列較整齊，而高劑量組接近空白對照組，說明姬菇多糖對酒精致急性肝損傷有較好的保護(hù)作用[17]。大蒜多糖具有抑制和減緩肝細(xì)胞脂肪變性、減輕炎癥和修復(fù)肝臟細(xì)胞的作用[10]。葛根保健飲料干預(yù)后，肝組織病理變性明顯好轉(zhuǎn)，說明葛根保健飲料有保護(hù)肝細(xì)胞作用[18。

3 作用機制的研究

酒精的致病因素單一，但目前尚未能明確其發(fā)病機制，因而如何有效地進(jìn)行治療仍是當(dāng)前科學(xué)工作者面臨的一大難題。但是對酒精性肝病的研究已經(jīng)進(jìn)入了蛋白質(zhì)組學(xué)層面，廣大醫(yī)學(xué)工作者為發(fā)現(xiàn)新的、更有效以及不良反應(yīng)少的藥物，采用多種實驗方法進(jìn)行了大量研究。

3.1清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化作用 長期大量飲酒或急性酒精中毒會引起肝臟脂質(zhì)過氧化，從而導(dǎo)致肝損傷。體內(nèi)少量的酒精可在酒精脫氫酶和乙醛脫氫酶的作用下代謝成二氧化碳和水排出體外，但過量飲酒時酒精不能及時氧化代謝，酒精可通過酶或非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，引起脂質(zhì)過氧化，并形成脂質(zhì)過氧化物，導(dǎo)致大量的自由基生成，并使反應(yīng)終產(chǎn)物丙二醛水平增加，具有較大的細(xì)胞毒性作用[19]。酒精的代謝產(chǎn)物乙醛能直接與還原型谷胱甘肽結(jié)合，并降低超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽過氧化酶的活性，使內(nèi)源性抗氧化劑進(jìn)行性耗竭，肝細(xì)胞損傷進(jìn)一步加重，肝功能異常，脂肪代謝紊亂，肝組織廣泛脂肪樣和空泡樣變性，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞廣泛壞死，細(xì)胞腫脹死亡[6]。因此，通過測定體內(nèi)丙二醛水平和SOD及谷胱甘肽的活性，可間接反映體內(nèi)自由基對機體的損傷程度。

雙葛解酲丸[21]可以顯著提高血清SOD和谷胱甘肽過氧化酶活力并減低血清中丙二醛和非酯化脂肪酸，對酒精性脂肪肝具有良好的防治效果。孟巍等[21]在實驗中發(fā)現(xiàn)復(fù)方甘草苷顯著提高SOD及谷胱甘肽活性，降低丙二醛水平，與陽性對照組大鼠及模型組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。祝冬青等[18]從葛根保健飲料顯著降低大鼠肝組織丙二醛水平，使谷胱甘肽過氧化酶活性水平接近正常方面，證實葛根飲料通過清除自由基，抗脂質(zhì)過氧化作用，從而提高肝組織抗氧化能力。

3.2干預(yù)Toll樣受體4-核因子κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的炎性反應(yīng) 大量的研究表明，過量的飲酒使內(nèi)毒素誘導(dǎo)庫普弗細(xì)胞Toll樣受體4-核因子κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化，促進(jìn)炎性細(xì)胞因子的釋放，如腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素(interleukin,IL)1、IL-6、IL-8等；使前列腺素類合成過程中一個限速酶(環(huán)加氧酶2)的活性表達(dá)增強，促進(jìn)炎性介質(zhì)前列腺素E2的合成。當(dāng)炎性因子過度釋放時，則造成宿主的炎癥或損傷[22]。周曉蓉等[23]用魚油加酒精灌胃制作大鼠酒精性肝損傷模型,觀察茶多酚及兒茶素對酒精性肝損傷的影響,以及對肝組織CD14、脂多糖結(jié)合蛋白、腫瘤壞死因子α、IL-1及IL-18的表達(dá)與內(nèi)毒素血癥的影響,其作用機制可能與降低內(nèi)毒素血癥，抑制庫普弗細(xì)胞活性、促炎細(xì)胞因子的表達(dá)及分泌等有關(guān)。另外，孫屹峰等[24]通過參芪扶正注射液治療酒精誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠,觀察大鼠活性氧、SOD、脂質(zhì)過氧化物含量、核因子κB和結(jié)締組織生長因子信使RNA表達(dá),證實參芪扶正注射液以清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化為突破口,打斷了脂質(zhì)過氧化-核因子κB-結(jié)締組織生長因子促肝纖維化的正反饋網(wǎng)絡(luò),顯示出良好的抗纖維化效果，為臨床上使用參芪扶正注射液治療肝纖維化提供了實驗和理論依據(jù)。

4 結(jié) 語

近年來中藥在抗酒精性肝損傷的實驗方面的研究已有突飛猛進(jìn)的進(jìn)展，隨著其藥理作用及作用機制的深入研究,中藥抗酒精性肝損傷的研究必將迎來廣闊的應(yīng)用開發(fā)前景。但是,目前關(guān)于中藥有效成分和組分的研究尚少，也缺乏深入研究，有必要加強中藥活性成分的分子機制的研究，以便為今后研發(fā)抗酒精性肝損傷的臨床用藥奠定科學(xué)的理論依據(jù)。

[1] 肖鳳霞,林勵,馬艷艷,等.毛橘紅總黃酮對酒精性肝損傷大鼠炎性細(xì)胞因子的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2011,28(4):396-401.

[2] Woo GA,O′Brien C.Long-term management of alcoholic liver disease[J].Clin Liver Dis,2012,16(4):763-781.

[3] 王玲,孫嫵弋,姜玲，等.酒精性肝病動物模型的研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2010,17(7):745-747.

[4] 彭勃，苗明三，王穎芳.橄欖解酒飲對大小鼠急性酒精性肝損傷的影響[J].上海中醫(yī)藥雜志，2003,37(10):48-51.

[5] 宋清,曹玫,劉曉涵，等.復(fù)方清肝湯對小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用的研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2006,12(3):53-55.

[6] 李素婷，陳龍，王冉，等.山楂葉總黃酮對小鼠急性酒精性肝損傷保護(hù)作用的實驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2012,23(11):2903-2904.

[7] 白明，汪保英，苗明三.保肝降脂膠囊對酒精性脂肪肝大鼠的實驗研究[J].中醫(yī)學(xué)報,2013,28(4):537-538.

[8] 胡成穆，曹琦，解雪峰,等.豹皮樟總黃酮體外對酒精性脂肪肝大鼠肝細(xì)胞脂肪變性的影響[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2013,27(2):1-6.

[9] 顧芳，周艷，楊浩然，等.β-酪啡肽-7對小鼠酒精肝損傷防治作用的研究[J].中國藥理學(xué)通報,2013,29(3):397-400.

[10] 劉超群，陳靜，黃雪松，等.大蒜多糖對慢性酒精中毒小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J].吉林大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2012,38(1):23-27.

[11] 殷曉軒,尹常健.酒精性肝病中醫(yī)用藥規(guī)律探討[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(12):285-297.

[12] 王軍仁，趙傳凱，吳志強，等.南極磷蝦油對小鼠酒精性脂肪肝模型作用的研究[J].食品工業(yè)科技，2012,33(24):399-402.

[13] 梁衛(wèi)，吳承玉，梁濤.清肝利濕解酒湯對酒精性脂肪肝大鼠肝損傷保護(hù)作用研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013,19(4):164-167.

[14] 童妍,李銳,吳曉青.荊防敗毒散加減對急性酒精中毒小鼠的解酒作用[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(21):221-223.

[15] 宋寧,王憲齡,李瑞琴.柴胡黃芩配伍不同提取部位對大鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用[J].中藥藥理與臨床,2006,22(6):8-9.

[16] 黃澤偉,程江鳳,蔡珊,等.黃皮果提取物的解酒及護(hù)肝作用的研究[J].食品研究與開發(fā),2012,33(9):33-36.

[17] 周斌，陶明煊，程光宇，等.姬菇多糖對酒精所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].食品科學(xué)，2012,33(23):323-326.

[18] 祝冬青，黃亞東.葛根保健飲料的研制及其對大鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用[J].中國釀造，2008,26(24):50-53.

[19] Masalkar PD,Abhang SA.Oxidative stress and antioxidant status in patients with alcoholic liver disease[J].Clin Chim Acta,2005,355(1/2):61-65.

[20] 魏文茂，朱麗麗，羅華麗，等.雙葛解酲丸對酒精性脂肪肝大鼠的保護(hù)作用[J].中成藥，2012,34(12):2281-2285.

[21] 孟巍，王柏軍，任世成.復(fù)方甘草酸苷對大鼠酒精性肝損傷的預(yù)防作用研究[J].中國醫(yī)藥指南，2013,11(3):482-483.

[22] Ding RB,Tian K,Huang LL,etal.Herbal medicines for the prevention of alcoholic liver disease:a review[J].J Ethnopharmacol,2012,144(3):457-465.

[23] 周曉蓉,龔作炯,袁光金，等.綠茶多酚對實驗性酒精性肝損傷大鼠的治療作用[J].世界華人消化雜志，2006,14(1):50-56.

[24] 孫屹峰,郭李柯,秦詠梅，等.參芪扶正注射液對酒精性肝纖維化大鼠ROS、SOD、LPO、NF-κB及CTGF mRNA表達(dá)的干預(yù)作用[J].世界華人消化雜志，2012,20(16):1463-1467.