Ig A腎病患者尿蛋白和血管內(nèi)皮生長因子的相關(guān)性研究

李佩宏，李文奇

（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院：1．外科學(xué)總論實驗室；2．解剖學(xué)實驗室，河南新鄉(xiāng)453003）

血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種分泌性糖蛋白，作為血管內(nèi)皮細胞特異性的促有絲分裂原，可促進血管內(nèi)皮增生，繼而加速新生血管生成［1-2］。近年來發(fā)現(xiàn)多種腎臟疾病的腎組織VEGF水平異常［3］，但對Ig A腎病VEGF的表達水平研究較少，因此本研究從腎組織VEGF表達、血和尿VEGF水平來分析了Ig A腎病的VEGF情況。Ig A腎病是常見的原發(fā)性腎小球病之一，可出現(xiàn)蛋白尿等臨床表現(xiàn)［4］，因此本研究也分析了Ig A腎病尿蛋白與VEGF的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選擇新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院2007年6月至2011年6月收治的67例Ig A腎病患者（Ig A腎病組），其中男39例，女28例，年齡22～62歲，平均（45．3±9．7）歲；Lee氏分級：Ⅰ級14例，Ⅱ級18例，Ⅲ級23例，Ⅳ級12例；臨床分型：孤立性血尿型9例，孤立性蛋白尿型16例，血尿伴蛋白尿型20例，急性腎炎型9例，腎病綜合征型13例；腎小管間質(zhì)輕度損傷22例，中度損傷29例，重度損傷16例；Kataf uci總積分小于9分13例，9～18分26例，＞18分28例。納入標準：（1）均經(jīng)腎活檢確診；（2）年齡在65歲以下；（3）排除紫癜性腎炎、慢性肝病、乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎和狼瘡性腎炎等繼發(fā)性Ig A腎病。同時選取60例健康體檢者（健康對照組）和41例狼瘡性腎炎（狼瘡性腎炎組）作對比，兩組的性別構(gòu)成、年齡與Ig A腎病組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），具有可比性。

1．2 方法

1．2．1 檢測方法 選取入組病例的腎臟組織并行免疫組織化學(xué)技術(shù)PV6000二步法檢測VEGF的表達情況?；颊哂谌朐捍稳?，前臂靜脈抽血5 mL，同時留取空腹中段晨尿5．0 mL，離心后均保留上清，采用固相夾心ELISA測定血和尿VEGF水平，嚴格按照試劑盒說明書進行。

1．2．2 免疫組織化學(xué)法步驟［5］及評價方法［6］將腎臟組織蠟塊復(fù)溫后切成5μm厚的切片，依次經(jīng)二甲苯脫蠟、乙醇水化、檸檬酸緩沖液微波修復(fù)抗原、H2O2去離子水滅活內(nèi)源性過氧化物酶后，加入一抗VEGF（稀釋比例1∶50），37℃溫箱孵育1 h；滴入通用型Ig G抗體-HRP多聚體，37℃溫箱孵育25 min；DAB溶液顯色，蘇木素復(fù)染、分化、脫水、透明、中性樹膠封片。采用陽性細胞計數(shù)與染色強度相結(jié)合的二級計分法評價免疫組織化學(xué)法結(jié)果。染色強度：陰性為0分，淡黃色為1分，黃或深黃色為2分，褐或棕褐色為3分；陽性細胞計數(shù)：0%～10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。

1．2．3 治療方法 均給予Ig A腎病患者潑尼松口服，起始劑量為每天1 mg／kg（最大劑量為60 mg／d），8～12周后減量，每2周減量5～20 mg／d，以后4周每2周減量2．5 mg／d，其后每4周減2．5 mg／d，直至10 mg／d維持。用藥期間不使用其他免疫抑制劑，密切監(jiān)視患者的血常規(guī)、尿常規(guī)及生命體征情況。

1．3 評價指標 （1）分析Ig A腎病總體及不同病理參數(shù)（Lee氏分級、臨床分型、腎小管間質(zhì)損傷和Kataf uchi總積分）的腎臟VEGF表達、血和尿VEGF水平，并與健康對照組和狼瘡性腎炎組比較；（2）分析Ig A腎病不同尿蛋白程度（＜1．0 g、1．0～3．0 g、＞3．0 g）的腎臟VEGF表達，血和尿VEGF水平及相關(guān)性；（3）以3．0 g 24 h尿蛋白和200．0 pg／mL尿VEGF為界值，將患者分為4個組合，即“尿蛋白小于或等于3．0 g，尿VEGF≤200．0 pg／mL”、“尿 蛋 白 小 于 或 等 于3．0 g，尿VEGF＞200．0 pg／mL”、“尿蛋白大于3．0 g，尿VEGF≤200．0 pg／mL”和“尿蛋白大于3．0 g，尿VEGF＞200．0 pg／mL”，分析組合間的血清清蛋白（s Alb）、Ig A、肌酐（Cr），估算腎小球濾過率（e GFR）、尿β2-微球蛋白（β2-MG）、尿 滲透壓 和血尿素氮（BUN）及治療效果。

1．4 療效評價標準［7］完全緩解：24 h尿蛋白小于0．3 g，s Alb≥35 g／L，Cr及e GFR恢復(fù)正?；蚍€(wěn)定；部分緩解：相對于基礎(chǔ)值，24 h尿蛋白定量下降幅度超過50%（但大于或等于0．3 g），s Alb≥30 g／L，Cr及e GFR恢復(fù)正?；蚍€(wěn)定；治療無效：相對于基礎(chǔ)值，24 h尿蛋白定量下降幅度小于50%，其他指標惡化。顯效＝完全緩解＋部分緩解，計算顯效率。

1．5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS16．0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，兩組比較采用成組t檢驗，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q法，以尿蛋白水平為因變量行VEGF的直線相關(guān)回歸分析，治療效果采用率表示，并行χ2檢驗。以P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 Ig A腎病不同病理參數(shù)的VEGF分布情況 Ig A腎病組的尿和血VEGF水平高于健康對照組和狼瘡性腎炎組（P＜0．01），腎組織VEGF表達高于狼瘡性腎炎組（P＜0．01）；且Ig A腎病的VEGF水平在Lee氏分級、腎小管間質(zhì)損傷和Kataf uchi總積分方面，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），且隨著病理嚴重程度的增加而升高，但在臨床分型上差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。腎組織的VEGF免疫組織化學(xué)圖，見圖1。

表1 不同病理參數(shù)的VEGF分布情況（±s）

表1 不同病理參數(shù)的VEGF分布情況（±s）

a：P＜0．01，與健康對照組比較；b：P＜0．01，與狼瘡性腎炎組比較；c：組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義；-：表示此項無數(shù)據(jù)。

組別 n 腎組織VEGF表達（分） 尿VEGF（pg／mL） 血VEGF（pg／mL）健康對照組70 - 22．53±1．05 38．42±2．31狼瘡性腎炎組 41 1．24±0．42 41．47±6．42 a 59．76±24．73 a Ig A腎病組 67 7．85±3．25a 314．74±114．38ab 438．77±156．25ab Lee氏分級c Ⅰ級 14 3．05±1．13 67．62±24．35 89．55±32．42 Ⅱ級 18 6．45±2．37 164．38±45．81 218．24±123．73 Ⅲ級 23 9．37±2．62 343．29±107．70 384．69±159．46 Ⅳ級 12 11．72±3．51 429．56±162．46 556．13±242．74臨床分型 孤立性血尿型 9 9．46±3．13 362．91±95．58 412．83±132．82 孤立性蛋白尿型 16 10．36±2．74 455．63±214．76 383．72±176．68 血尿伴蛋白尿型 20 10．73±3．62 392．57±192．35 506．27±235．41 急性腎炎型 9 9．62±3．75 427．38±153．62 394．38±182．57 腎病綜合征型 13 11．08±4．13 345．82±185．94 473．45±213．56腎小管間質(zhì)損傷c 輕度 22 4．47±1．38 144．51±64．26 157．37±78．92 中度 29 8．86±2．03 237．83±108．64 376．56±117．64 重度 16 11．29±3．46 365．58±164．22 492．77±185．78 Kataf uchi總積分c ＜9分 13 3．81±1．62 112．58±56．95 217．56±92．61 9～18分 26 7．59±2．65 238．65±114．37 346．71±158．43 ＞18分28 10．74±4．83 314．74±127．54 507．39±247．56

2．2 Ig A腎病不同尿蛋白水平的VEGF分布及其相關(guān)性 Ig A腎病不同程度尿蛋白患者的腎組織VEGF表達、尿和血VEGF水平之間，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），且隨著尿蛋白水平的增加遞增，見表2。Ig A腎病的尿蛋白水平與腎組織VEGF表達、尿和血VEGF呈正相關(guān)（r＝0．59，P＜0．01；r＝0．46，P＜0．01；r＝0．37，P＜0．05），見圖2。

2．3 Ig A腎病不同尿蛋白和VEGF組合的生化指標 Ig A腎病同一尿蛋白水平不同VEGF水平間的s Alb、血Ig A、Cr、e GFR、β2-MG、尿滲透壓和BUN差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）；尿VEGF≤200．0 pg／mL的患者中，除β2-MG外，尿蛋白不同水平間，其余指標差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）；尿VEGF＞200．0 pg／mL的患者中，除血Ig A和e GFR外，尿蛋白不同水平間，其余指標差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），見表3。

2．4 Ig A腎病不同尿蛋白和VEGF組合的治療效果 Ig A腎病同一尿蛋白水平，尿VEGF≤200．0 pg／mL的顯效率高于尿VEGF＞200．0 pg／mL（P＜0．05）；同一VEGF水平，不同尿蛋白間的完全緩解和部分緩解例數(shù)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），但顯效率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05），見表4。

圖1 腎臟組織的VEGF免疫組織化學(xué)圖

表2 不同尿蛋白水平的VEGF分布（±s）

表2 不同尿蛋白水平的VEGF分布（±s）

a：P＜0．05，與“＜1．0 g”比較；b：P＜0．05，與“1．0～3．0 g”比較。

24 h尿蛋白（g） n 腎組織VEGF表達（分） 尿VEGF（pg／mL） 血VEGF（pg／mL）＜1．0 9 3．52±0．97 117．56±64．38 248．73±87．61 1．0～3．0 37 5．67±2．35 a 204．37±127．51 a 365．28±125．46 a＞3．0 21 9．92±3．23 ab 367．29±145．76 ab 518．61±172．69 ab

圖2 Ig A腎病尿蛋白與VEGF的直線回歸分析圖

表3 Ig A腎病不同尿蛋白和VEGF組合的生化指標（±s）

表3 Ig A腎病不同尿蛋白和VEGF組合的生化指標（±s）

項目尿蛋白“≤3．0 g”尿VEGF≤200．0（n＝27） 尿VEGF＞200．0（n＝19）尿蛋白“＞3．0 g”尿VEGF≤200．0（n＝6） 尿VEGF＞200．0（n＝15）s Alb（g／L） 14．25±3．28 22．56±6．57a 25．77±8．03 b 36．29±12．37 ab血Ig A（g／L） 2．67±0．73 3．38±1．14a 3．14±1．07 b 3．89±1．58a Cr（μmol／L） 56．87±12．32 84．25±17．89 a 73．61±12．85 b 94．54±22．63 ab e GFR 89．13±17．56 67．58±12．35 a 71．36±22．42b 60．27±14．59 a

續(xù)表3 Ig A腎病不同尿蛋白和VEGF組合的生化指標

表4 Ig A腎病不同尿蛋白和VEGF組合的治療效果［n（%）］

3 討 論

VEGF可促進血管再生，同時亦可促進腎臟缺血性疾病的側(cè)支循環(huán)建立，增加代償機制，改善組織缺血［7-8］。在腎臟的基本結(jié)構(gòu)中，腎小球主要由毛細血管組成，VEGF可在內(nèi)皮細胞中表達，而Ig A腎病是常見的原發(fā)性腎小球病，在腎小球系膜區(qū)可見Ig A或Ig A沉積為主的病理改變，導(dǎo)致腎小球結(jié)構(gòu)損傷［9］，如間質(zhì)損傷和系膜增生等，因此推測Ig A腎病的VEGF水平會出現(xiàn)異常。在狼瘡性腎炎中發(fā)現(xiàn)腎臟組織的VEGF表達升高，認為缺氧、缺血是導(dǎo)致VEGF升高的主要原因［10］，而Ig A腎病由于腎臟受損，也存在缺氧、缺血環(huán)境，故刺激了Ig A患者VEGF的表達。腎活檢是診斷疾病的金標準，也是獲取腎臟組織VEGF表達的直接途徑，但具有創(chuàng)傷性，很難在基層醫(yī)院開展。尿和血VEGF水平易檢測，易操作，可反復(fù)操作，目前常用于多種疾病的診斷和預(yù)測［11-12］，相比腎臟組織VEGF表達水平的檢測優(yōu)勢明顯。

本研究發(fā)現(xiàn)，Ig A腎病的尿和血VEGF水平高于健康對照組和狼瘡性腎炎組，腎組織VEGF表達高于狼瘡性腎炎組，以上均表明Ig A腎病的VEGF出現(xiàn)異常表達，可能原因：（1）Ig A腎病的缺氧、缺血環(huán)境導(dǎo)致VEGF表達代償性上調(diào)，而腎小球毛細血管基底膜結(jié)構(gòu)的改變導(dǎo)致VEGF分泌和釋放量增多［10］；（2）Ig A腎病的病理改變導(dǎo)致調(diào)節(jié)VEGF表達合成的因素變化，間接導(dǎo)致VEGF表達增強。Ig A腎病VEGF不同形式的水平均上調(diào)，提示該指標的同質(zhì)性較好，可用于Ig A腎病的輔助治療。VEGF不同形式的水平在不同病理參數(shù)上的分布有差異，且隨著嚴重程度的加重而上升，提示VEGF水平可用于預(yù)測Ig A腎病的嚴重程度，但在臨床分型上沒有差異，主要原因是該參數(shù)的異質(zhì)性較高，包含多種其他參數(shù)［13］。由以上可看出，血和尿VEGF水平與腎組織VEGF表達的趨勢相同，且在病理參數(shù)上的分布也一致，推測可用血和尿VEGF水平來替代腎組織VEGF表達的檢測。

蛋白尿是Ig A腎病的常見臨床表現(xiàn)［4］，本研究分析VECF不同形式與尿蛋白的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)3種形式的VECF水平均隨尿蛋白水平升高而增加，同時與尿蛋白的表達呈正相關(guān)，表明VEGF水平與Ig A腎病的腎損傷程度有關(guān)。本研究的特點是將尿蛋白和VEGF結(jié)合起來，分為4個亞組來分析亞組間的生化指標和治療效果，發(fā)現(xiàn)組間在多種常見的生化指標及治療效果間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），提示檢測Ig A腎病VEGF水平有更好的應(yīng)用價值，可與尿蛋白共同預(yù)測Ig A腎病的嚴重程度及預(yù)后。

綜上所述，Ig A腎病患者腎臟組織的VEGF表達增強、血和尿VEGF水平升高，均與尿蛋白呈正相關(guān)，且不同尿蛋白和VEGF組合的病理指標和治療效果差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05）。

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