酢漿草對小鼠急性腹膜炎的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

郭美仙，王艷雙，施貴榮，沈 磊

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

酢漿草對小鼠急性腹膜炎的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

郭美仙，王艷雙，施貴榮，沈 磊

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

目的：研究酢漿草對醋酸所致急性腹膜炎小鼠的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法：腹腔注射醋酸制備小鼠急性腹膜炎模型，觀察酢漿草乙醇提取物對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響；觀察酢漿草乙醇提取物對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響。結(jié)果：酢漿草乙醇提取物能使小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)減少；能降低小鼠腹腔毛細(xì)血管的通透性。結(jié)論：酢漿草對醋酸所致小鼠急性腹膜炎具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

酢漿草；急性腹膜炎；抗炎；鎮(zhèn)痛

酢漿草（Oxalis corniculata L.），又名酸漿草、酸茭草、斑鳩酸、三葉酸等，白族藥名雙巴子、雙駒駒子。全草入藥，有利濕止瀉、止痛消腫等功效〔1-3〕。李良等〔4〕通過臨床觀察，發(fā)現(xiàn)酢漿草對肝炎、腎盂腎炎、病毒性皰疹等有較好療效，還具有祛痰平喘，止痛的作用。酢漿草的醇提物中含有較高的黃酮類成分〔5〕。王玉仙〔6〕研究結(jié)果表明酢漿草能抑制角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹，降低MDA含量。丁良等〔7-8〕對酢漿草提取物的體外抗氧化活性和抑菌活性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明酢漿草具有抗氧化和抑菌作用。馬鴻軍〔9〕研究結(jié)果表明酢漿草具有較好的調(diào)脂和護肝作用。李靜〔10〕研究結(jié)果表明酢漿草具有一定抗肺癌的活性。目前國內(nèi)外尚未見酢漿草對醋酸所致小鼠腹膜炎的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究報道，本實驗研究了酢漿草對醋酸所致小鼠腹膜炎的抗炎鎮(zhèn)痛作用，現(xiàn)報道如下。

1 實驗材料

1.1動物KM種小鼠，SPF級，雌雄各半，體重18～22 g，由昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，生產(chǎn)合格證：SCXK（滇）2011-0004。

1.2藥品與試劑阿司匹林腸溶片（云南白藥集團股份有限公司，ZFA1307）；葡萄糖注射液（昆明市寧斯藥業(yè)有限責(zé)任公司，H53022077）；伊文思藍(lán)（上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站經(jīng)銷，82-11-02）；冰乙酸（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，080308）；氯化鈉注射液（昆明南疆制藥有限公司，B080817f2）。

1.3儀器ER-5205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SHB-IIIT循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；80-2電動離心機（江蘇金壇市憶通電子有限公司）；722S可見光光度計（上海菁華科技有限公司）。

2 方法

2.1樣品處理樣品采自大理市下關(guān)鎮(zhèn)，經(jīng)大理學(xué)院生藥學(xué)張德全博士鑒定為酢漿草科（Oxalidaceae）酢漿草屬（Oxalis）植物酢漿草（Oxalis corniculata L.）。稱取干燥粉碎后的酢漿草全草10 kg置于合適的容器中，用75%的乙醇浸泡4次每次24 h，用紗布過濾收集4次的浸泡液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮為浸膏，在浸膏中加入95%的乙醇，放置于4℃冰箱24 h，過濾，濾液加水至渾濁，放置于4℃冰箱24 h，再次過濾，濃縮濾液。最后冷凍干燥器后得599 g乙醇提取物，每克浸膏含生藥16.69 g，裝瓶密封置零度以下的冰箱中備用。

2.2酢漿草對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響取小鼠48只，隨機均分為模型對照組（10%葡萄糖溶液）、陽性對照組（2%阿司匹林）、酢漿草低劑量組（6%酢漿草乙醇提取物）、酢漿草高劑量組（12%酢漿草乙醇提取物）；各小鼠按10 mL∕kg灌胃給藥，1次∕d，連續(xù)5 d。于末次給藥后30 min，各小鼠腹腔注射1%的醋酸溶液10 mL∕kg，觀察注射后15 min內(nèi)小鼠產(chǎn)生扭體反應(yīng)（以小鼠出現(xiàn)腹部內(nèi)凹、軀干與后肢伸張，臀部高起為扭體反應(yīng)）的次數(shù)，計算扭體反應(yīng)抑制率〔11-12〕。

抑制率=（模型組扭體反應(yīng)次數(shù)-給藥組扭體反應(yīng)次數(shù)）∕模型組扭體反應(yīng)次數(shù)×100%

2.3酢漿草對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響取小鼠48只，分組及給藥同方法2.2。于末次給藥后30 min，各小鼠尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.2 mL∕只，20 min后腹腔注射1%的醋酸溶液10 mL∕kg。注射后30 min，處死小鼠、剖腹、用生理鹽水5 mL分?jǐn)?shù)次洗滌腹腔，吸出洗滌液，合并后，3 000 r∕min離心5 min，取上清液在578 nm處測定吸光度（OD），計算毛細(xì)血管通透性抑制率〔11，13〕。

抑制率=（模型組OD值-給藥組OD值）∕模型組OD值×100%

2.4統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)以-x±s表示，采用SPSS 17.0軟件處理，進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行兩兩比較（t檢驗）。

3 結(jié)果

3.1酢漿草對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響與模型組比較，陽性組、酢漿草乙醇提取物高劑量組和低劑量組小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù)顯著減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果表明：酢漿草乙醇提取物可減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，具有鎮(zhèn)痛作用，且在一定劑量范圍內(nèi)存在劑量依賴性，但作用強度不及阿司匹林。見表1。

3.2酢漿草對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響與模型組比較，實驗第5天，陽性組、酢漿草乙醇提取物高劑量組小鼠的“體重”顯著減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05），結(jié)果表明：酢漿草乙醇提取物對小鼠胃腸道刺激小于阿司匹林。與模型組比較，陽性組、酢漿草醇提取物高劑量組和低劑量組小鼠的腹腔滲出液中伊文思藍(lán)含量明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果表明：酢漿草醇提取物可降低醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管的通透性，具有抗炎作用，且在一定劑量范圍內(nèi)存在劑量依賴性，但作用強度不及阿司匹林。見表2。

表1 酢漿草對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響（n=12）

表1 酢漿草對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響（n=12）

注：與模型組比較△△P＜0.01；與陽性組比較**P＜0.01。

扭體反應(yīng)抑制率∕% 0.00 73.44 51.56 32.81分組模型組陽性組高劑量組低劑量組給藥劑量∕(g∕kg)—0.20 20.04 10.02第1天體重∕g 23.4±2.2 22.9±1.7 22.7±2.3 23.1±2.5第5天體重∕g 28.7±2.2 23.1±2.8△△25.7±2.3△△**26.8±1.7**扭體反應(yīng)次數(shù)∕次64±13 17±5△△31±8△△**43±10△△**

4 討論

急性腹膜炎是機體針對損傷因子的一種保護性和防御性反應(yīng)，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。滲出是急性腹膜炎重要特征性的改變，滲出的原因是毛細(xì)血管通透性增加，所滲出的體液、蛋白質(zhì)和白細(xì)胞等形成腹腔液〔14〕。醋酸是急性炎癥常用的誘導(dǎo)劑之一，本實驗是利用給小鼠腹腔注射醋酸，引起毛細(xì)血管通透性增加來制備急性腹膜炎動物模型。實驗結(jié)果顯示，酢漿草乙醇提取物能降低小鼠腹腔毛細(xì)血管的通透性，具有抗炎的作用。

表2 酢漿草對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響（）

表2 酢漿草對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響（）

注：①與模型組比較△P＜0.05，△△P＜0.01；與陽性組比較*P＜0.05，**P＜0.01；②低劑量組有1只小鼠腹腔滲出液有血廢棄。

通透性抑制率∕% 0.00 51.02 37.35 24.69分組模型組陽性組高劑量組低劑量組樣本量∕n 12 12 12 11給藥劑量∕(g∕kg)—0.20 20.04 10.02第1天體重∕g 22.9±2.0 23.3±2.4 22.7±1.8 23.5±2.2第5天體重∕g 28.1±2.4 23.6±3.1△△26.0±2.5△**27.2±2.0**腹腔滲出液∕OD值0.490±0.102 0.243±0.059△△0.307±0.081△△*0.369±0.063△△**

疼痛是直接作用于身體的傷害性刺激在腦內(nèi)的對應(yīng)，是一種保護性的警覺功能，是多種疾病的常見癥狀之一〔15〕。醋酸致小鼠扭體法目前廣泛用于中藥的止痛藥效學(xué)評價，通過化學(xué)刺激產(chǎn)生持久的疼痛，致使小鼠出現(xiàn)腹部內(nèi)凹、軀干后腿伸張、臀部高起等扭體反應(yīng)。實驗結(jié)果表明：酢漿草乙醇提取物具有一定的鎮(zhèn)痛作用。

阿司匹林常見不良反應(yīng)為胃腸道反應(yīng)，實驗過程中每組小鼠都給等量飼料，其中陽性組（阿司匹林）的飼料每天都有剩余，實驗第5天，陽性組、酢漿草乙醇提取物高劑量組小鼠的體重顯著減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），結(jié)果表明：酢漿草乙醇提取物對小鼠胃腸道可能存在刺激作用。酢漿草中含有黃酮類成分，酢漿草的抗炎、鎮(zhèn)痛作用可能與其有關(guān)，作用機理還有待研究。

〔1〕中國科學(xué)院《中國植物志》編委會.中國植物志〔M〕.北京：科學(xué)出版社，1998，43（1）：11.

〔2〕蘭茂.滇南本草〔M〕.昆明：云南人民衛(wèi)生出版社，1959：74-75.

〔3〕大理白族自治州人民政府.大理中藥資源志〔M〕.昆明：云南民族出版社，1991：89-90.

〔4〕李良，李傳芹.酢漿草的臨床應(yīng)用〔J〕.中國臨床與保健，1992，4（4）：50.

〔5〕王海生，王隸書，范艷君，等.酢漿草提取物中總黃酮含量的分光光度法測定〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2011，22（3）：578-579.

〔6〕王玉仙.酢漿草水提物對大鼠角叉菜膠性炎的影響〔D〕.保定：河北大學(xué)，2011.

〔7〕丁良，李靜，楊慧.酢漿草提取物體外抗氧化活性研究〔J〕.遼寧中醫(yī)雜志，2011，38（10）：2055-2056.

〔8〕丁良，李靜，楊慧，等.酢漿草的體外抑菌活性〔J〕.醫(yī)學(xué)研究與教育，2010，27（6）：16-18.

〔9〕馬鴻軍.酢漿草對高脂血癥大鼠血脂代謝和護肝作用的研究〔D〕.保定：河北大學(xué)，2010.

〔10〕李靜.酢漿草提取物體外抗腫瘤和抗氧化研究〔D〕.保定：河北大學(xué)，2011.

〔11〕孫曉萍，歐立娟，宓穗卿，等.冰片抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究〔J〕.中藥新藥與臨床藥理，2007，18（5）：353-355.

〔12〕賀海波，石孟瓊，陳濤，等.珠子參水提物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究〔J〕.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2010，32（20）：2224-2227.

〔13〕楊宇杰，劉振虹，王春民，等.提取-共沸精餾耦合工藝提取揮發(fā)油制備頸復(fù)康顆粒的抗炎鎮(zhèn)痛作用〔J〕.中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（5）：274-278.

〔14〕王恩華.病理學(xué)〔M〕.2版.北京：高等教育出版社，2008：62-63.

〔15〕尤啟冬.藥物化學(xué)〔M〕.7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：237-239.

（責(zé)任編輯 李 楊）

Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Oxalis corniculata L.on Acute Peritonitis in Mice

GUO Meixian,WANG Yanshuang,SHI Guirong,SHEN Lei
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000，China）

Objective:To study the analgesic and anti-inflammatory effects of Oxalis corniculata L.on acute peritonitis induced by acetic acid in mice.Methods:Mice peritonitis model caused by intraperitoneal injection of acetic acid was used to observe the effects of the ethanol extract of Oxalis corniculata L.on the body torsion reaction and the abdominal blood capillary permeability.Results:The ethanol extract of Oxalis corniculata L.reduced the body torsion times and the abdominal capillary permeability of mice induced by acetic acid.Conclusion:Oxalis corniculata L.showed anti-inflammatory and analgesic effects on acute peritonitis in mice.

Oxalis corniculata L.;acute peritonitis;anti-inflammatory;analgesic

R285.5

A

1672-2345（2014）02-0006-03

10.3969∕j.issn.1672-2345.2014.02.003

2013-12-06

2013-12-23

郭美仙，實驗師，主要從事中藥藥理學(xué)研究.