紅元顆?？寡祖?zhèn)痛作用的研究

段娟娟 孫建寧 方 芳 何愛先 裴文慧

（北京中醫(yī)藥大學中藥學院中藥藥理系，北京，100102）

紅元顆?？寡祖?zhèn)痛作用的研究

段娟娟 孫建寧 方 芳 何愛先 裴文慧

（北京中醫(yī)藥大學中藥學院中藥藥理系，北京，100102）

目的：研究紅元顆粒的抗炎鎮(zhèn)痛作用。方法：觀察其對二甲苯致小鼠耳廓腫脹、冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高、角叉菜膠致大鼠足跖腫脹、棉球誘導大鼠肉芽腫、冰醋酸致小鼠扭體反應及小鼠熱板實驗的抑制作用。結果：紅元顆粒可以明顯抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹（P＜0.05），降低冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加（P＜0.05），減輕角叉菜膠致大鼠足跖腫脹（P＜0.05），抑制棉球肉芽腫增生（P＜0.01或P＜0.05），顯著減輕熱刺激引起的小鼠疼痛（P＜0.05）；減少小鼠扭體次數(shù)（P＜0.01）。結論：紅元顆粒具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛作用。

紅元顆粒；抗炎；鎮(zhèn)痛

紅元顆粒是治療慢性盆腔炎的臨床經(jīng)驗方，由紅藤、延胡索等中藥配伍組方而成，具有清熱利濕，活血化瘀，理氣止痛的功效，主要用于治療濕熱瘀結型慢性盆腔炎。慢性盆腔炎是常見的女性內(nèi)生殖器及其周圍結締組織和盆腔腹膜發(fā)生的炎性反應，可引起不孕不育、異位妊娠和盆腔疼痛[1]。但目前未見紅元顆?？寡祖?zhèn)痛作用的報道。本研究觀察紅元顆粒的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為其治療慢性盆腔炎的臨床應用提供藥理學依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 紅元顆粒由北京中醫(yī)藥大學中藥制藥系提供，每克相當于8.93 g生藥，臨床人日用量（按生藥量）為34 g/d（批號：20121130）。婦科千金片（株洲千金藥業(yè)股份有限公司，批號：201203010）；醋酸地塞米松片（天津力生制藥股份有限公司，批號：1112025）；羅通定片（山西云鵬制藥有限公司，批號：A130101）；布洛芬緩釋膠囊（中美天津史克制藥有限公司，批號：12100010）。

1.2 動物 SD雌性大鼠，體重200～220 g；ICR雌性小鼠，體重18～22 g；昆明種雌性小鼠，體重18～22 g。均為SPF級，由北京市維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證編號SCXK（京）2012-0001。

1.3 試劑 二甲苯（北京化工廠，批號：20101015）；伊文斯蘭（sigma公司）；冰醋酸（北京化工廠，批號：20110531）；角叉菜膠（sigma公司，批號：15750）；注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號：Y1206306）。

1.4 儀器 角膜環(huán)鉆（蘇州六六視覺科技股份有限公司）；電子分析天平（美國Ohaus公司）；UNICO2000型分光光度計（上海尤尼柯儀器有限公司）；Labofuge 400R低溫離心機（德國Heraeus公司）；YLS-7B足跖容積測量儀（山東省醫(yī)學科學院設備站）；101FAB-2型電熱鼓風干燥箱（上海樹立儀表有限公司）；YLS-6B智能熱板儀（山東省醫(yī)學科學院設備站）。

2 方法

2.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗 將72只ICR雌性小鼠按隨機數(shù)字表法分為6個組：對照組，地塞米松組（2 mg/kg），婦科千金片組（1.05 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。于末次給藥1 h后，右耳涂以二甲苯0.05 mL/只，左耳作對照，30 min后處死動物，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑7 mm角膜鉆環(huán)將雙耳同部位等面積切下，稱切下耳片質(zhì)量，計算鼠耳腫脹率。鼠耳腫脹率＝（右耳片質(zhì)量-左耳片質(zhì)量）/左耳片質(zhì)量×100%。

2.2 小鼠腹腔毛細血管通透性實驗 將ICR雌性小鼠按隨機數(shù)字表法分為7個組：對照組，模型組，地塞米松組（2 mg/kg），婦科千金片組（1.05 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。實驗前動物禁食12 h，末次給藥1 h后各組小鼠ip 0.6%的冰醋酸0.1 mL/10 g，空白對照組ip生理鹽水。30 min后，尾iv 1%的伊文斯蘭生理鹽水溶液0.1 mL/10 g。20 min后，小鼠脫頸椎處死，剪開腹腔，用6 mL生理鹽水分數(shù)次沖洗腹腔，收集沖洗液定容至10 mL。將腹腔沖洗液按3 000 r/min，離心10 min，取上清，在590 nm處測吸光度，計算毛細血管通透性的抑制率。毛細血管通透性抑制率＝（模型組腹腔沖洗液吸光度-給藥組腹腔沖洗液吸光度）/模型組腹腔沖洗液吸光度×100%。

2.3 角叉菜膠致大鼠足跖腫脹實驗 將60只SD雌性大鼠按隨機數(shù)字表法分為6個組：對照組，地塞米松組（1.4 mg/kg），婦科千金片組（0.735 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（7.93 g/kg、3.97 g/kg、1.98 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。實驗前動物禁食12 h，末次給藥后，測量每只大鼠右下肢足跖容積的基礎值，給藥1 h后，按無菌操作法從大鼠右后足掌心向踝關節(jié)方向進針，ih 1%角叉菜膠0.1 m L/只致炎。測定致炎后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h內(nèi)的足跖容積變化。計算足跖腫脹百分率。足跖腫脹百分率＝（致炎后足跖容積-致炎前足跖容積）/致炎前足跖容積×100%。

2.4 大鼠棉球肉芽腫實驗 將60只SD雌性大鼠按隨機數(shù)字表法分為6個組：對照組，地塞米松組（0.7 mg/kg），婦科千金片組（0.735 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（7.93 g/kg、3.97 g/kg、1.98 g/kg）。腹部脫毛，無菌操作下每只大鼠沿下腹中線切開腹壁，將2粒滅菌棉球（每粒50±1 mg）分別植入兩側(cè)腹股溝皮下，縫合皮膚切口。次日開始各組ig給藥，1次/d，連續(xù)14 d。末次給藥1 h后取出大鼠兩側(cè)腹股溝皮下棉球稱重，于80℃烘箱中干燥24 h再次稱重，分別記錄棉球干、濕重，減去棉球重量，即為肉芽的干、濕重，計算肉芽腫形成抑制率。抑制率＝（對照組肉芽腫重量-給藥組肉芽腫重量）/對照組肉芽腫重量×100%。

2.5 小鼠熱板實驗 將雌性ICR小鼠置于熱板上（55℃±0.5℃），記錄自放入熱板至小鼠舔后足所需要的時間，為該鼠痛閾值，篩選痛閾為5～30 s的小鼠。按照痛閾值均等的原則分為6個組：對照組，羅通定組（60 mg/kg），婦科千金片組（1.05 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。于末次給藥后30 min、1 h、2 h、3 h、4 h分別測量小鼠的痛閾值，若小鼠在60 s內(nèi)仍無痛覺反應，取出，按60 s計算，觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用。

2.6 小鼠冰醋酸扭體實驗 將90只昆明種雌性小鼠按隨機數(shù)字表法分為6個組：對照組，布洛芬組（0.1 g/kg），婦科千金片組（1.05 g/kg），紅元顆粒大、中、小劑量組（11.33 g/kg、5.67 g/kg、2.83 g/kg）。各組ig給藥，1次/d，連續(xù)7 d。實驗前動物禁食12 h，末次給藥1 h后各組小鼠ip 0.6%的冰醋酸0.1 mL/10 g，誘導小鼠扭體反應。記錄注射致痛劑后出現(xiàn)扭體反應的時間和20 min內(nèi)各鼠扭體次數(shù)，觀察藥物鎮(zhèn)痛作用。

2.7 統(tǒng)計方法 運用SPSS 17.0進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)使用（±s）進行記錄。組間比較采用Oneway-ANOVA進行檢測。方差齊者用LSD檢驗，不齊者用Dunnett's T3檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1 紅元顆粒對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

3 結果

3.1 紅元顆粒對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 對照組小鼠在給予二甲苯致炎后，右耳明顯腫脹，腫脹率達到104.63%。與對照組相比，陽性藥地塞米松、婦科千金片對二甲苯致小鼠耳廓腫脹均具有顯著的抑制作用（P＜0.01或P＜0.05），腫脹抑制率分別為45.30%、30.25%；紅元顆粒大、中、小劑量均可顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹（P＜0.05），抑制率分別為34.49%、33.71%、28.44%。結果見表1。

表2 紅元顆粒對冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

3.2 紅元顆粒對冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響 與對照組相比，模型組小鼠在腹腔注射冰醋酸后毛細血管通透性明顯增加，表現(xiàn)為腹腔炎性滲出液的吸光度顯著增加（P＜0.01）。與模型組相比，陽性藥地塞米松和婦科千金片可明顯抑制冰醋酸誘導的毛細血管通透性增加（P＜0.01或P＜0.05），抑制率分別為32.29%、28.70%；紅元顆粒的大、中、小劑量均可降低腹腔毛細血管通透性（P＜0.05），抑制率分別為28.70%、25.56%、28.70%。結果見表2。

3.3 紅元顆粒對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響大鼠足跖皮下注射角叉菜膠后，鼠爪呈紅、腫、熱、痛等早期急性炎性反應反應，注射后3～5 h為腫脹高峰期。與對照組相比，陽性藥地塞米松對角叉菜膠致大鼠足跖炎性腫脹全程均具有顯著地抑制作用，表現(xiàn)為足跖腫脹率顯著降低（P＜0.01或P＜0.05）；陽性藥婦科千金片在給藥后1 h、2 h、4 h、5 h、6 h可顯著抑制炎性腫脹（P＜0.01或P＜0.05）；紅元顆粒大、中劑量組給藥后均可顯著減輕致炎后2 h、4 h、6 h的炎性反應反應（P＜0.05）。結果見表3。

表3 紅元顆粒對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響

表4 紅元顆粒對棉球致大鼠肉芽腫形成的影響

3.4 紅元顆粒對棉球致大鼠肉芽腫形成的影響 滅菌棉球在植入大鼠兩側(cè)腹股溝皮下14 d后產(chǎn)生肉芽增生現(xiàn)象。與模型組相比，陽性藥地塞米松和婦科千金片均可顯著抑制棉球肉芽腫形成，表現(xiàn)為肉芽的濕重、干重顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），對濕肉芽腫的抑制率分別為26.27%、11.40%，對干肉芽腫的抑制率分別為43.68%、15.26%；紅元顆粒的大、中、小劑量均可顯著抑制棉球肉芽腫的形成（P＜0.05或P＜0.01），對肉芽濕重的抑制率分別為12.61%、 11.80%、10.26%，對肉芽干重的抑制率分別為17.50%、17.11%、16.18%。結果見表4。

3.5 紅元顆粒對小鼠熱板法痛閾值的影響 與對照組相比，陽性藥羅通定可以顯著提高熱致痛小鼠的痛閾值（P＜0.05），藥效可維持4 h；陽性藥婦科千金片可緩解熱刺激導致的疼痛，但未出現(xiàn)顯著的抑制作用；紅元顆粒的3個劑量組均可不同程度緩解熱刺激帶來的疼痛，其中大劑量組在給藥3 h后，表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)痛作用（P＜0.05），藥效達到最高峰。結果見表5。

表5 紅元顆粒對小鼠熱板法痛閾值的影響

3.6 紅元顆粒對冰醋酸致小鼠扭體反應的影響 同對照組相比，陽性藥布洛芬可顯著延長冰醋酸致小鼠內(nèi)臟疼痛的痛反應潛伏時間（P＜0.05），并減少小鼠在10 min內(nèi)及10～20 min內(nèi)的扭體次數(shù)（P＜0.01）；陽性藥婦科千金片可顯著減少小鼠在10 min內(nèi)的扭體次數(shù)（P＜0.05）及10～20 min內(nèi)的扭體次數(shù)（P＜0.01）；紅元顆粒各個劑量組均可延長潛伏時間，但無統(tǒng)計學意義，紅元顆粒的大劑量能顯著減少10 min內(nèi)及10～20 min內(nèi)的扭體次數(shù)（P＜0.01），中劑量能顯著減少小鼠在10～20 min的扭體次數(shù)（P＜0.01）。結果見表6。

表6 紅元顆粒對冰醋酸致小鼠扭體反應的影響

4 討論

炎性反應是具有血管系統(tǒng)的活體組織對局部損傷的防御反應，可將其病理過程概括分為早、中、晚3期，早期主要表現(xiàn)為毛細血管擴張、通透性增強、滲出和水腫；中期主要是白細胞向炎灶聚集；晚期以炎灶屏障形成和組織增生為特點。本實驗采用各種急、慢性炎性反應模型觀察紅元顆粒的抗炎作用。二甲苯涂于小鼠耳廓，引起局部組織損傷，炎性遞質(zhì)釋放，如組胺、緩激肽和纖維蛋白溶解酶等，使得局部毛細血管通透性增加，炎性細胞浸潤，造成耳部急性滲出性炎性水腫。尾靜脈注射的染料伊文斯蘭可與血漿蛋白結合，當腹腔注射冰醋酸誘導毛細血管通透性增高時，在一定范圍內(nèi)，染料的滲出量可反映毛細血管滲出的血漿蛋白量，從而指示毛細血管的通透性。大鼠足跖注射角叉菜膠，造成致炎局部白細胞浸潤，引發(fā)PGE2合成增加以及補體系統(tǒng)的激活，可模擬炎性反應腫脹的病理變化。棉球埋入大鼠局部皮下后，病灶處主要有T與B淋巴細胞、漿細胞和單核巨噬細胞浸潤，并釋放多種炎性反應遞質(zhì)，同時毛細血管、淋巴管以及成纖維細胞和單核巨噬細胞增殖，可產(chǎn)生與臨床某些炎性反應后期病理變化相似的肉芽增生，屬于慢性炎性反應模型[2]。

本研究結果顯示，紅元顆粒可以明顯抑制急性期毛細血管擴張及滲出、炎性反應和中期炎性水腫、慢性肉芽腫，表明其具有明顯的抗炎作用。研究表明，方中紅藤具有很強的抗炎、免疫、抑菌、活血等生物活性[3]，臨床上用于治療慢性盆腔炎，取得很好的療效[4-5]。根據(jù)各種模型的作用機制，推測其抗炎作用機制可能與抑制組胺、緩激肽、纖維蛋白溶解酶、PGE2合成與釋放，抑制白細胞游走，調(diào)節(jié)機體的免疫功能有關，也可能依賴于垂體-腎上腺系統(tǒng)，還有待進一步研究。

熱板法是將小鼠放置于一定溫度熱板上，通過足部溫度感受器感受熱刺激，疼痛信息經(jīng)軀體神經(jīng)傳入，在高位中樞參與下完成軀體縮爪反應的中樞疼痛模型[6]。扭體法將刺激性化學物質(zhì)冰醋酸注入小鼠腹腔內(nèi)，刺激臟層和壁層腹膜，產(chǎn)生大量的炎性因子，如5-HT、組胺、緩激肽、PGE等，刺激與非甾體抗炎藥敏感的痛覺神經(jīng)，是一種非選擇性外周疼痛模型[7]。紅元顆?？梢悦黠@減輕小鼠熱刺激引起的疼痛，顯示其可能有中樞鎮(zhèn)痛的作用。紅元顆粒組方中所含延胡索具有活血化瘀，行氣止痛的功效。有文獻證實延胡索中的延胡索乙素為中樞多巴胺受體阻滯劑，可通過抑制中腦網(wǎng)狀結構和下丘腦的誘發(fā)電位，減少交感神經(jīng)節(jié)后末梢釋放應激性物質(zhì)，產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用[8-9]，據(jù)此，紅元顆粒的中樞鎮(zhèn)痛作用可能與此有關。此外，紅元顆粒可顯著減少醋酸引起的扭體次數(shù)，提示其具有外周鎮(zhèn)痛作用，在抗炎實驗中，紅元顆粒對冰醋酸引起的小鼠腹腔毛細血管通透性增加有顯著的抑制作用，表明其外周鎮(zhèn)痛作用可能與降低毛細血管通透性，減少炎性反應遞質(zhì)釋放有關。

綜上所述，紅元顆粒具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，與婦科千金片的抗炎、鎮(zhèn)痛作用差異無統(tǒng)計學意義，但其確切的作用機制還需深入研究。

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（2014-09-22收稿 責任編輯：曹柏）

Study on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Hongyuan Granule

Duan Juanjuan，Sun Jianning，F(xiàn)ang Fang，He Aixian，PeiWenhui
（Department of Traditional Chinese Medicine Pharmacology，School of Chinese Pharmacy，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China）

Objective：To study anti-inflammatory and analgesic effects of Hongyuan granule.Methods：The inhibitory effects were studied by observing xylene-induced swelling ear inm ice，acetic acid-induced increase of abdominal capillary permeability inmice，carrageenin-induced paw edema and cotton ball-induced proliferation of granuloma in rats，hot-induced pain and acetic acid-induced writhing inmice.Results：Hongyuan granule significantly reduced swelling ear inmice（P＜0.05），decreased abdominal capillary permeability inmice（P＜0.05），evidently relieved paw edema in rats（P＜0.05），and remarkably inhibited proliferation of granuloma in rats（P＜0.01 or P＜0.05），notably alleviated pain induced by hot plate（P＜0.05），as well as obviously reduced the writhing times in mice（P＜0.05）.Conclusion：Hongyuan granule has obvious anti-inflammatory and analgesic effects.

Hongyuan granule；Anti-inflammatory；Analgesic

R285.6

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.04.024

北京中醫(yī)藥大學科研創(chuàng)新團隊資助項目（編號：2011-CXTD-12）

方芳，副教授，從事中藥藥理研究，E-mail：fangf1166＠126.com