系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者尿液相關(guān)細(xì)胞因子的檢測及臨床意義探討

庹艷紅 盧金金 馬特安

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupus erythematosus，SLE)是一種表現(xiàn)為多器官多系統(tǒng)損害的慢性系統(tǒng)性自身性免疫性疾病，臨床表現(xiàn)多樣。SLE發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，常為遺傳、感染、內(nèi)分泌、藥物等因素相互作用的結(jié)果，這種相互作用激活T細(xì)胞，活化的T細(xì)胞進(jìn)一步激活B細(xì)胞，導(dǎo)致過多的自身抗體產(chǎn)生，被自身抗體損傷的組織細(xì)胞所產(chǎn)生的自身抗原進(jìn)一步致使T細(xì)胞活化。SLE臨床危害大，能夠早期治療多數(shù)患者可獲得疾病緩解，因此及時(shí)的治療非常重要，因此臨床上早期對SLE患者各系統(tǒng)損害診斷具有重要意義。本研究聯(lián)合檢測和比較有腎臟表現(xiàn)的和無腎臟表現(xiàn)的SLE患者的尿液細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β1、IL-6、MCP-1 水平，以探討其與狼瘡疾病活動(dòng)的相關(guān)性?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

資料與方法

1．一般資料:選擇筆者醫(yī)院2011年1月～2012年12月門診就診或住院診斷明確的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者86例，其中女性79例，男性7例，年齡14～49歲，平均年齡23．2±9．8歲，SLE的診斷按第7版《內(nèi)科學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］。所有患者按照系統(tǒng)性紅斑狼瘡病變活動(dòng)指數(shù)［2］(systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)分為疾病活動(dòng)組(SLEDAI≥10分，C組)和疾病非活動(dòng)組(SLEDAI＜10分，B組);另外30健康成年志愿者作為正常對照組(A組)。C組患者52例，男性4例，女性48例，平均年齡22．9±10．7歲;B組患者34例，男性3例，女性31例，平均年齡23．5±9．6歲，A組志愿者男性2例，女性28例，平均年齡24．1±12．0歲。3組受試者兩兩比較，年齡、性別構(gòu)成比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

2．標(biāo)本采集及檢測方法:收集各組受檢者晨尿，離心后除去細(xì)胞及沉淀，置于-80℃冰箱保存，所有標(biāo)本同一時(shí)間由專人按照試劑盒說明書操作檢測。TNF-α、TGF-β1、IL-6、MCP-1檢測試劑盒購自美國Biosource公司，采用免疫散射比濁法檢測。其中C組患者經(jīng)糖皮質(zhì)激素和(或)聯(lián)合免疫抑制劑治療后達(dá)到臨床緩解期后，再次SLEDAI評分，并再次檢測以上4種細(xì)胞因子水平。

3．療效判斷標(biāo)準(zhǔn):患者經(jīng)糖皮質(zhì)激素聯(lián)合免疫抑制劑(環(huán)磷酰胺、或霉酚酸酯、或他克莫司等)治療后，病情得到控制，臨床上蛋白尿明顯減輕或轉(zhuǎn)陰，自身抗體轉(zhuǎn)陰，漿膜炎好轉(zhuǎn)，判定為完全緩解;若患者表現(xiàn)為輕度蛋白尿或低補(bǔ)體血癥，判定為部分緩解。

4．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 18．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組內(nèi)比較采用t檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析。相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1．各組患者 SLEDAI評分及尿液 TNF-α、TGF-β1、IL-6、MCP-1水平:C 組患者臨床上完全緩解，個(gè)別患者部分緩解。SLE患者(B組、治療前后C組)尿液細(xì)胞因子 TNF-α、TGF-β1、IL-6、MCP-1水平均明顯高于A組正常志愿者(P＜0．05)，且疾病活動(dòng)期患者(C組治療前)尿液細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β1、IL-6、MCP-1水平均明顯高于 B組狼瘡疾病非活動(dòng)者(P＜0．05)，而C組患者經(jīng)藥物治療后，疾病活動(dòng)得到控制，其尿液細(xì)胞因子水平較治療前亦明顯下降(P＜0．05)。

表1 各組受試者SLEDAI評分及尿液TNF-α、TGF-β1、IL-6、MCP-1水平比較

2．相關(guān)性分析:B組、治療前后C組患者尿液TNF-α水平與疾病活動(dòng)指數(shù)SLEDAI評分呈正相關(guān)(r值分別為 0．602、0．599、0．784，P 均 ＜ 0．05);B組、治療前后C組患者尿液TGF-β1水平與疾病活動(dòng)指數(shù)SLEDAI評分呈正相關(guān)(r值分別為0．629、0．741、0．683，P 均 ＜0．05);B 組、治療前后 C 組患者尿液IL-6水平與疾病活動(dòng)指數(shù)SLEDAI評分呈正相關(guān)(r值分別為0．596、0．637、0．810，P 均 ＜0．05);B組、治療前后C組患者尿液MCP-1水平與疾病活動(dòng)指數(shù)SLEDAI評分呈正相關(guān)(r值分別為0．633、0．667、0．824，P 均 ＜0．05，表2)。

表2 各組患者尿液TNF-α、TGF-β1、IL-6、MCP-1水平與SLEDAI評分相關(guān)性

討 論

SLE臨床表現(xiàn)多樣化，多系統(tǒng)受累，如狼瘡腎炎(lupus nephritis，LN)是SLE最常見且嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)之一，25%的SLE患者以腎臟受累為首發(fā)癥狀，經(jīng)腎活檢證實(shí)超過90%的SLE患者均存在不同程度的腎臟損害，腎臟受累和進(jìn)行性腎功能損害仍是SLE患者死亡的主要原因，尤其是活動(dòng)性狼瘡，臨床預(yù)后兇險(xiǎn)［3］。腎活檢是狼瘡性腎炎或狼瘡確診的重要檢查手段，但是部分患者因病情過重不能行腎活檢檢查，或者部分患者腎活檢檢查明確病理診斷并激素治療后需要再次評估病情或判斷預(yù)后，需要一些無創(chuàng)的檢測方法，因此如果能通過尿液無創(chuàng)性檢測一些生物標(biāo)志物為患者疾病活動(dòng)性以及預(yù)后判斷，將會(huì)給患者臨床藥物治療提供有益的參考。

疾病的活動(dòng)程度與病程進(jìn)展、疾病治療效果、疾病預(yù)后密切相關(guān)。SLE疾病活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)常用來作為臨床上患者疾病活動(dòng)的定量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，其評分可較好地反映疾病活動(dòng)程度，患者治療后疾病處于穩(wěn)定期評分較低［4，5］。SLE 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，免疫調(diào)節(jié)異常為其主要發(fā)病機(jī)制。近年來SLE患者尿液標(biāo)志物檢測成為研究熱點(diǎn)。TGF-β1由樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和NK細(xì)胞合成，具有多種效能，是一種強(qiáng)效的免疫抑制因子，有抗炎作用。De Muro等［6］研究發(fā)現(xiàn)尿液TGF-β1水平和腎活檢結(jié)果相關(guān)檢測顯示，其與多種腎臟病理改變，如新月體形成、免疫復(fù)合物的沉積和血管增生程度顯著相關(guān)，Jin等［7］研究發(fā)現(xiàn)SLE患者血液TGF-β1水平也與腎臟病變嚴(yán)重性明顯相關(guān)。但是尿TGF-β1與SLE患者疾病活動(dòng)是否也具有相關(guān)性，尚未見報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，SLE患者尿液TGF-β1水平較正常者明顯升高，且活動(dòng)性SLE患者其水平較穩(wěn)定期患者明顯升高。同時(shí)活動(dòng)性狼瘡患者經(jīng)藥物治療后，病情得到控制，其活動(dòng)性評分下降，同時(shí)尿液TGF-β1水平也下降，且SLE患者尿液TGF-β1水平與疾病活動(dòng)指數(shù)SLEDAI評分呈正相關(guān)。由此推測尿液細(xì)胞因子檢測可能成為判斷疾病是否活動(dòng)的標(biāo)志以及間接判斷藥物治療效果。

為了提高尿液細(xì)胞因子的檢測對疾病的活動(dòng)程度價(jià)值，本研究還同時(shí)觀察了其他幾種細(xì)胞因子的變化。IL-6是由單核細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞和血管間皮細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，它能促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生抗體。Brugos等［8］研究顯示血、尿IL-6水平與SLE患者或狼瘡性腎炎患者疾病嚴(yán)重程度明顯相關(guān)，如狼瘡性腎炎患者尿IL-6水平明顯高于SLE不伴腎損害患者的水平，推測其可作為預(yù)測SLE患者早期腎損害的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，SLE患者尿IL-6水平與SLEDAI評分呈正相關(guān)，提示SLE患者尿液IL-6水平的檢測也可能成為判斷狼瘡疾病是否活動(dòng)的標(biāo)志以及間接判斷藥物治療效果。

MCP-1是單核-吞噬細(xì)胞趨化因子，主要由浸潤的單核-吞噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞，以及腎小球系膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、間質(zhì)纖維母細(xì)胞、足突細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞等在各種細(xì)胞因子、理化作用下合成和分泌，是腎臟表達(dá)最廣泛的趨化因子。Singh等［9］研究發(fā)現(xiàn)狼瘡性腎炎患者尿液MCP-1水平較SLE非腎綜損害患者水平明顯升高，進(jìn)而推測尿液MCP-1可以作為一種無創(chuàng)性檢查判斷SLE患者腎臟損害嚴(yán)重程度。TNF-α是一種單核因子，主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，脂多糖是較強(qiáng)的刺激劑。中性粒細(xì)胞、星狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞亦可產(chǎn)生TNF-α。國外多項(xiàng)研究也發(fā)現(xiàn)LN患者尿TNF-α水平明顯高于SLE不伴腎損害患者的水平［8，10］。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)，SLE患者尿液TGF-β1、IL-6水平較正常者明顯升高外，其他細(xì)胞因子MCP-1、TNF-α也具有與TGF-β1相同的變化趨勢，且SLE患者尿液MCP-1、TNF-α水平與SLEDAI評分均呈正相關(guān)。因此推測聯(lián)合檢測以上尿液細(xì)胞因子的水平可進(jìn)一步提高其判斷狼瘡活動(dòng)性的價(jià)值。

綜上所述，尿液細(xì)胞因子檢測是一種無創(chuàng)性檢查，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者尿液相關(guān)細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β1、IL-6、MCP-1 水平與患者疾病活動(dòng)明顯相關(guān)，可作為判斷狼瘡是否活動(dòng)的指標(biāo)，值得臨床大規(guī)模實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

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