乳酸菌環(huán)境脅迫應(yīng)答分子機(jī)制研究進(jìn)展

趙亞榮，張文羿，孫天松

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 乳品生物技術(shù)與工程教育部重點實驗室，呼和浩特010018)

0 引 言

乳酸菌(Lactic acid bacteria)是一類能夠發(fā)酵乳糖生成乳酸的細(xì)菌，且在自然界中分布廣泛。作為益生菌的乳酸菌對人體健康起著至關(guān)重要的作用，與此同時，作為重要的工業(yè)微生物，乳酸菌菌體及其代謝產(chǎn)物已被廣泛應(yīng)用于食品、藥物、飼料和精細(xì)化學(xué)品等領(lǐng)域[1-3]。但乳酸菌在其生產(chǎn)和應(yīng)用中都不可避免的面臨著多種環(huán)境脅迫。在發(fā)酵過程中，由于乳酸的大量積累和氧的存在對乳酸菌造成酸脅迫和氧脅迫；在乳酸菌冷凍干燥過程中，由于極低的環(huán)境溫度對乳酸菌造成冷脅迫；在人體胃腸道應(yīng)用過程中，膽鹽的存在以及營養(yǎng)物質(zhì)的缺乏均會對乳酸菌造成一定程度的脅迫。這些脅迫環(huán)境會明顯導(dǎo)致乳酸菌生理狀況的惡化，進(jìn)而影響其發(fā)酵和代謝產(chǎn)物的生成。因此，了解乳酸菌在不同環(huán)境脅迫下的分子機(jī)制，對更好的利用乳酸菌具有實際的指導(dǎo)意義。

1 細(xì)菌應(yīng)激反應(yīng)

面對環(huán)境的突變，細(xì)菌會做出一系列的應(yīng)激反應(yīng)，從而更益于其在自然界中生存。如同其它細(xì)菌，乳酸菌對脅迫環(huán)境的敏感性及其所具有的抵御該環(huán)境的能力，使得其可以忍受惡劣的生存環(huán)境。理論上，細(xì)菌的每一個基因都具有特定的調(diào)節(jié)功能，并且能在一定的環(huán)境中進(jìn)行表達(dá)。其中有些功能是受多個基因調(diào)節(jié)的，細(xì)菌對于環(huán)境脅迫的應(yīng)激反應(yīng)便是一個很好的例子。Stortz等證實細(xì)菌的應(yīng)激反應(yīng)主要是依靠基因的共同表達(dá)來調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理過程 (細(xì)胞分裂，DNA代謝，看家基因表達(dá)，細(xì)胞膜的合成以及運輸?shù)?，從而提高細(xì)菌的抗環(huán)境脅迫能力[4]。

適應(yīng)性反應(yīng)是乳酸菌應(yīng)激反應(yīng)中最常見的現(xiàn)象。當(dāng)細(xì)胞處于脅迫環(huán)境中，由適應(yīng)性反應(yīng)所誘導(dǎo)的保護(hù)作用可保護(hù)細(xì)胞抵御更為惡劣的條件，從而有效提高乳酸菌的存活率。而交互保護(hù)作為另一種應(yīng)激反應(yīng)，在提高乳酸菌脅迫條件下的存活率和改進(jìn)工藝性質(zhì)方面具有重要作用。薛峰等研究了不同預(yù)適應(yīng)條件對干酪乳桿菌 ATCC393存活的影響，研究結(jié)果表明，分別經(jīng)熱、酸、過氧化氫和膽鹽預(yù)適應(yīng)的細(xì)胞均能誘導(dǎo)交互保護(hù)作用[5]。乳酸菌脅迫機(jī)理的研究一方面能進(jìn)一步挖掘成熟菌株的應(yīng)用潛力，同時也為篩選具有高脅迫抗性的優(yōu)良菌株提供了可借鑒的思路。

2 乳酸菌環(huán)境脅迫機(jī)理

目前，對乳酸菌環(huán)境脅迫機(jī)制的研究主要包括酸脅迫、冷脅迫、膽鹽脅迫、氧脅迫以及營養(yǎng)脅迫。研究益生菌環(huán)境脅迫機(jī)制需要一個特定的綜合系統(tǒng)，其研究方法包括傳統(tǒng)生物學(xué)手段、蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)以及代謝組學(xué)。其中，蛋白質(zhì)組學(xué)是研究細(xì)菌在環(huán)境脅迫條件下應(yīng)激機(jī)理的最可靠手段，此方法可分析在特定的時間和條件下，一個細(xì)胞或生物樣品中所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)[6]。O＇Farrell等提出的雙向凝膠電泳法(Two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的核心技術(shù)[7]。此前，蛋白質(zhì)組學(xué)僅是用于對蛋白質(zhì)的分離，利用雙向電泳技術(shù)構(gòu)建蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜，從而分離出蛋白質(zhì)。而現(xiàn)在，蛋白質(zhì)組學(xué)為研究乳酸菌在脅迫環(huán)境中的生理反應(yīng)提供了新的借鑒和思路。

2.1 酸脅迫

乳酸菌可發(fā)酵乳糖產(chǎn)生乳酸，從而降低生長環(huán)境的pH，而pH的變化會對菌體的發(fā)酵能力和代謝產(chǎn)物產(chǎn)生一定影響，值得關(guān)注的是，乳酸菌在食品加工過程中所遇到的酸抑制和在通過人體胃腸道時所經(jīng)歷的低pH環(huán)境的應(yīng)答機(jī)制是不同的[8]。

研究發(fā)現(xiàn)，低pH環(huán)境會誘導(dǎo)乳酸菌產(chǎn)生各種分子伴侶、酶以及氨基酸，這些物質(zhì)會參與其酸應(yīng)激，并對菌體在酸應(yīng)激過程中維持pH動態(tài)平衡以及細(xì)胞的修復(fù)具有重要作用。Sanchez等研究了長雙歧桿菌在低pH環(huán)境中的應(yīng)答和適應(yīng)性機(jī)制，發(fā)現(xiàn)在此環(huán)境中，與糖酵解相關(guān)的一些酶被誘導(dǎo)合成，其中α-1,4-糖苷酶，磷酸葡萄糖變位酶和UDP-4-葡萄糖異構(gòu)酶均被上調(diào)[9]。結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)對德氏乳桿菌保加利亞亞種 (Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus)在低pH值環(huán)境中進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在酸脅迫下也會誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的分子伴侶(GroES，GroEL，HrcA，GrpE，DnaK，DnaJ，ClpE，ClpP，ClpL) 以及與脂肪酸合成相關(guān)的基因(fabH，accC，fabI)，而使類異戊二烯合成的甲羥戊酸途徑的基因(mvaC,mvaS)受到抑制[10]，從而幫助菌體來適應(yīng)該脅迫環(huán)境。在對干酪乳桿菌Lactobacillus casei Zhang的研究中，研究者發(fā)現(xiàn)天冬氨酸也參與了酸脅迫的耐受性。實驗以野生菌株做為對照進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在pH3.5的條件下變異株細(xì)胞內(nèi)的天冬氨酸和精氨酸的含量均高于野生菌株，表明天冬氨酸和精氨酸可提高菌體對酸的耐受性[11]。

2.2 膽鹽脅迫

乳酸菌對膽鹽耐受能力的大小是檢驗其在人體腸道中能否存活的指標(biāo)之一。膽鹽具有殺菌作用，它不僅可以破壞細(xì)胞膜，而且還會使DNA氧化受損。乳酸菌可產(chǎn)生膽鹽水解酶 (Bile Salt Hydrolases，BSH)將膽鹽進(jìn)行解共軛，同時使類固醇物質(zhì)水解成為氨基酸或?；撬幔怂饷缚梢愿淖兡扄}的特性，從而大大降低其在低pH環(huán)境中的溶解性。在高膽鹽環(huán)境中，各種相關(guān)酶的表達(dá)會發(fā)生顯著變化。Yokota等首次研究證明乳酸菌和雙歧桿菌的膜蛋白與膽鹽脅迫具有密切的關(guān)系，該膜蛋白可以使膽鹽從細(xì)胞中流出[12]。采用蛋白質(zhì)組學(xué)觀察長雙歧桿菌在膽鹽環(huán)境中的生長情況，發(fā)現(xiàn)許多與雙歧分流相關(guān)酶的表達(dá)上調(diào)[13]。在動物雙歧桿菌乳酸亞種(Bifidobacterium animalis subsp.lactis)中發(fā)現(xiàn)此類與膽鹽耐受相關(guān)的酶均參與了該菌株糖類的代謝。而且，參與菌體細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的相關(guān)蛋白質(zhì)也受到膽鹽的影響，這可能是與細(xì)胞內(nèi)部的NADH和FAD+的濃度有關(guān)系。

烏日娜等對L.casei Zhang在1.5%膽鹽的培養(yǎng)基中生長的蛋白質(zhì)組進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)有26種蛋白質(zhì)表達(dá)發(fā)生了變化，如細(xì)胞膜保護(hù)蛋白、代謝關(guān)鍵酶等[14]。當(dāng)乳酸菌處于膽鹽脅迫環(huán)境中時，利用2-DE法對其蛋白質(zhì)學(xué)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)和糞腸球菌(Enterococcus faecalis)中分別有23個和45個與細(xì)胞質(zhì)相關(guān)的蛋白被上調(diào)[15]，已有研究證實，大部分此類蛋白質(zhì)都與細(xì)菌耐受膽鹽脅迫環(huán)境有關(guān)。利用蛋白質(zhì)組學(xué)與轉(zhuǎn)錄組學(xué)相結(jié)合的手段，對鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)LGG在0.2%的膽鹽中的耐受性進(jìn)行研究，結(jié)果其轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的基因表達(dá)均會有差異[16]。

2.3 冷脅迫

乳酸菌作為發(fā)酵劑在加工和貯存過程中一般處于低溫環(huán)境中。低溫環(huán)境不僅影響細(xì)胞活性，損傷細(xì)胞膜的形態(tài)及其流動性，而且還影響DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯。生物體自身為了克服此種影響會誘導(dǎo)產(chǎn)生大量蛋白，稱為冷誘導(dǎo)蛋白 (cold-induced proteins，CIPS)，不同乳酸菌個體在冷脅迫下誘導(dǎo)形成的CIPS的數(shù)量不同，如乳桿菌、嗜熱鏈球菌可分別誘導(dǎo)產(chǎn)生22和24種蛋白質(zhì)。其中分子量大約7.5kDa的冷誘導(dǎo)蛋白被稱為冷激蛋白(cold-shock proteins，Csp)。 冷激蛋白的數(shù)量會因菌種的不同而不同，乳酸鏈球菌乳酸亞種IL1403和植物乳桿菌C3.8只有2個Csp基因，植物乳桿菌NC8有3個Csp基因，而乳酸乳球菌乳脂亞種MG1363中卻含有7個Csp基因(CspA-CspG)[17-18]。 Kim等研究發(fā)現(xiàn)Csp的誘導(dǎo)機(jī)制非常復(fù)雜，但似乎都是控制在轉(zhuǎn)錄后水平[19]。研究表明，很多乳酸菌對低溫環(huán)境的適應(yīng)性與其之前所生存的環(huán)境具有密切的關(guān)系，Wang等對嗜酸乳桿菌的蛋白質(zhì)組進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過一個溫和的低溫過渡環(huán)境(28℃)能夠提高細(xì)胞對寒冷環(huán)境的適應(yīng)能力[20]。還有研究表明菌體先在26℃環(huán)境中生存8小時會到達(dá)其最適的耐受寒冷的能力，在德氏乳桿菌保加利亞亞種中發(fā)現(xiàn)菌株先受到酸脅迫(pH5.25中30min)，也可提高其對低溫環(huán)境的適應(yīng)能力[21]。乳酸菌在不同溫度環(huán)境中其蛋白表達(dá)也存在差異。

2.4 高溫脅迫

眾所周知，菌體細(xì)胞均有最適生長溫度，溫度太高時會引起蛋白降解，進(jìn)而引起核糖體和RNA等一些大分子物質(zhì)的不穩(wěn)定性，并且細(xì)胞膜流動性也會發(fā)生改變。熱激反應(yīng)的特征是誘導(dǎo)產(chǎn)生一系列伴侶蛋白和蛋白酶，稱為熱激蛋白(Heat Shock Protein，HSP)。 在乳酸菌中，熱應(yīng)激條件下所誘導(dǎo)產(chǎn)生的熱激蛋白數(shù)量是不同的，如糞腸球菌中34個、乳酸乳桿菌17個、變異鏈球菌40個，而在此40個中，只有6個是上調(diào)的。Whitake和Auffary等利用2D-PAGE法對熱激環(huán)境中的乳酸乳球菌進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在該脅迫環(huán)境下，乳酸乳球菌誘導(dǎo)產(chǎn)生了熱激蛋白 (DnaK、GroEL和GroES)[22-23]。同樣，利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)在熱激環(huán)境下，副干酪乳桿菌NFBC 338中會誘導(dǎo)產(chǎn)生GroEL。HSP的表達(dá)的動力學(xué)會隨著熱激反應(yīng)發(fā)生變化，例如菌體剛進(jìn)入高溫環(huán)境就會產(chǎn)生熱激蛋白DnaK和GroEL，而其他的HSP是在進(jìn)入高溫環(huán)境一段時間后才會產(chǎn)生。

在高溫環(huán)境下，乳酸乳桿菌和副干酪乳桿菌中編碼GroESL的基因過表達(dá)，但仍不能夠消除高溫環(huán)境對菌體的影響，這是因為菌體內(nèi)其它蛋白質(zhì)沒有對此環(huán)境做出適應(yīng)性反應(yīng)。德氏乳桿菌保加利亞亞種在65℃熱激10 min后，通過HSP的合成會使得菌株的死亡率降低，但如果早期的HSP合成受阻，則菌體的死亡率會大大增加[24]。

在嗜酸乳桿菌中，通過轉(zhuǎn)錄和翻譯誘導(dǎo)某些HSP產(chǎn)生。其中，對mRNA的分析主要集中在ftsH基因和CIRCE調(diào)控基因(DnaJ，GroESL和HrcA-GrpE-DnaK)上。研究發(fā)現(xiàn)，熱激10～15 min后，CIRCE基因的表達(dá)會提高10-100倍，而熱激20 min時，該基因的表達(dá)受到了抑制[25]。與此同時，乳酸乳桿菌還會誘導(dǎo)產(chǎn)生一個ClpP基因和四個Clp-ATPase基因(ClpB,ClpC，ClpE和ClpX)，在高溫環(huán)境中，這些基因均會做出相應(yīng)的調(diào)控，從而保護(hù)菌體免受高溫?fù)p傷。

2.5 氧脅迫

乳酸菌大部分為兼性厭氧菌，盡管氧氣對菌體細(xì)胞本身沒有損傷作用，但是在其代謝過程中所產(chǎn)生的活性氧 (Reactive Oxygen Species，ROS)(過氧化氫(H2O2)、超氧陰離子(O2-)以及過氧化自由基(O.))能引起脂類、蛋白質(zhì)及DNA等的損傷，進(jìn)而使菌體細(xì)胞受損[26]。氧脅迫由特定的轉(zhuǎn)錄因子控制，當(dāng)ROS的濃度超過正常水平產(chǎn)生氧脅迫時，便可激活菌體的抵御機(jī)制，從而使菌體免受損傷。Mostertz等利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)對枯草芽孢桿菌的氧脅迫進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示經(jīng)過氧化氫處理后，55種蛋白的合成上調(diào)，150種蛋白的合成下降。而經(jīng)過超氧陰離子處理后，有60多種蛋白質(zhì)被過量的表達(dá)，而200多種的表達(dá)受到了限制。這說明氧脅迫對于菌體蛋白質(zhì)合成代謝具有很大的影響[27]。

Arena等對嗜熱鏈球菌在氧脅迫環(huán)境中的適應(yīng)性進(jìn)行研究，利用蛋白質(zhì)組學(xué)與雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳(2D-PAGE)相結(jié)合的方法，對各種條件下所產(chǎn)生的氧脅迫的蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)H2O2會促使大量應(yīng)激蛋白的產(chǎn)生，其中包括可補(bǔ)償由于氧化應(yīng)激而引起缺失的特定蛋白質(zhì)，例如，NADH氧化酶、Mn超氧化物歧化酶、谷胱甘肽還原酶以及Fe-S組件蛋白Suf B和Suf C，而與能量代謝相關(guān)的蛋白質(zhì)卻下調(diào)[28]。

2.6 營養(yǎng)脅迫

細(xì)菌在繁殖的過程中，如果不能及時補(bǔ)給營養(yǎng)物質(zhì)，便會導(dǎo)致菌體進(jìn)入饑餓狀態(tài)，引發(fā)營養(yǎng)脅迫現(xiàn)象。值得關(guān)注的是，有時由于其它脅迫也會間接的使菌體出現(xiàn)營養(yǎng)缺乏的情況。例如，在酸脅迫時，一些轉(zhuǎn)運子的活性降低，致使物質(zhì)的利用率降低，這對菌體本身會產(chǎn)生不利影響。導(dǎo)致乳酸菌產(chǎn)生營養(yǎng)脅迫現(xiàn)象的主要原因有以下3種：(1)碳源脅迫，會使能量耗盡；(2)磷酸鹽脅迫，會使能量以及RNA和DNA的合成受阻；(3)氮源脅迫，主要影響蛋白質(zhì)的合成。

乳酸菌需要在穩(wěn)定期維持較高的代謝能力。Kunji等指出在碳源脅迫時，乳球菌的存活能力與其糖酵解的能力相關(guān)。同樣，也有研究發(fā)現(xiàn)氨基酸代謝在乳酸乳球菌應(yīng)答碳源脅迫時起著很重要的作用，這說明該脅迫環(huán)境下代謝的調(diào)節(jié)極為重要。利用雙向凝膠電泳對碳源脅迫下的乳酸乳桿菌進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)該脅迫環(huán)境誘導(dǎo)產(chǎn)生14個蛋白質(zhì)。并且這些蛋白質(zhì)多數(shù)是與碳水化合物及氨基酸的代謝有關(guān)[29-31]在乳酸乳桿菌中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)菌株處于氨基酸缺乏時，由鳥嘌呤合成(RelA)所調(diào)節(jié)的核苷酸代謝會做出反應(yīng)，經(jīng)研究，RelA是調(diào)節(jié)了控制蛋白水解通路的CodY基因[32]。

目前發(fā)現(xiàn)，乳酸乳桿菌中碳源缺乏會引起其它條件的脅迫，包括熱脅迫、氧脅迫、酸脅迫、滲透壓脅迫等。在對保加利亞乳桿菌研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)乳糖缺乏時，菌株對于熱脅迫、酸脅迫和膽鹽脅迫的抵抗能力增強(qiáng)。

大多數(shù)的乳酸菌處于脅迫環(huán)境還會產(chǎn)生協(xié)同保護(hù)作用現(xiàn)象，Wall等指出，羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus reuteri)在高膽鹽環(huán)境中會誘導(dǎo)產(chǎn)生某些蛋白質(zhì)，這些物質(zhì)對菌體具有一定的保護(hù)作用[33]。De Anqelis M在對舊金山乳桿菌(Lactobacillus sanfranciscensis)CB1的研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)菌體處于較低pH環(huán)境時，與高溫脅迫相關(guān)的分子伴侶 (DnaJ,DnaK,GroES和GrpE)也會被誘導(dǎo)，但只有GrpE水平上調(diào)[34]，而這些酶均參與復(fù)雜碳水化合物的代謝，這說明在酸脅迫條件下，菌體的代謝會發(fā)生改變。

3 結(jié)束語

對乳酸菌在各種脅迫環(huán)境下的分子機(jī)理進(jìn)行研究，不僅可以了解其應(yīng)答機(jī)制，而且更重要的是可以挖掘出優(yōu)良的益生菌菌株，開發(fā)新的益生菌產(chǎn)品。盡管人們對乳酸菌脅迫環(huán)境中的抵御機(jī)制的研究取得了進(jìn)展，但是仍然有些問題未得到解決，包括各種脅迫環(huán)境的交叉保護(hù)現(xiàn)象等，這些內(nèi)在的聯(lián)系必須采用其它手段(如：代謝工程技術(shù)等)進(jìn)行深入細(xì)致的研究。相信隨著基因測序技術(shù)的成熟以及基因組數(shù)據(jù)的大量積累，結(jié)合分子生物學(xué)的基礎(chǔ)知識對乳酸菌的信息表達(dá)進(jìn)行再挖掘，定會為其更為充分的利用提供寶貴資料。

[1]PARVEZ S,MALIK K A,KANG S A,et al.Probiotics and Their Fermented Food Products are Beneficial for Health[J].J Appl Microbiol,2006,100:1171-1185.

[2]DE A M,GOBBETTI M.Environmental Stress Responses in Lactobacillus:A Review[J].Proteomics,2004,4:106-122.

[3]BURGESS C,O'CONNELL-MOTHERWAY M,SYBESMA W,et al.Riboflavin Production in Lactococcus lactis:Potential for in Situ Production of Vitamin-Enriched Foods[J].Appl Environ Microbiol,2004,70:5769-5777.

[4]STORTZ G,HENGGE-ARONIS R.Bacterial Stress Response[M].ASM Press,Washington,D C.2000:285.

[5]薛峰,張娟,堵國成，等.交互保護(hù)對干酪乳桿菌 ATCC393TM存活的影響[J].微生物學(xué)報,2010,50:478-484.

[6]DIERICK J F,DIEU M,REMACLE J,et al.Proteomics in Experimental Gerontology[J].Exp Gerontol,2002,37:721-734.

[7]烏日娜,張和平,孟和等.干酪乳桿菌蛋白質(zhì)雙向電泳條件優(yōu)化及圖譜建立[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報,2009,28(5):598-602.

[8]CORCORAN B M,STANTON C,FITZGERALD G,et al.Life Under Stress:The Probiotic Stress Response and How It May be Manipulated[J].Curr Pharm Des,2008,14:1382-1399.

[9]CAESCU C,VIDAL O,KRZEWINSKI F,et al.Bifidobacterium Longum Requires a Fructokinase for Fructose Catabolism[J].J Bacteriol,2004,186:6515-6525.

[10]FRENANDEZ A,OGAWA J,PENAUD S,et al.Rerouting of Pyruvate Metabolism During Acid Adaption in Lactobacillus bulgaricus[J].Proteomics,8:3154-3163.

[11]WU C,ZHANG J,CHEN W,et al.A Combined Physiological and Proteomic Approach to Reveal Lactic-acid-induced Alterations in Lactobacillus casei Zhang and Its Mutant with Enhanced Lactic acid Tolerance[J].Appl Microbiol Biotechnol,2012,93(2):707-722.

[12]YOKOTA A,VEENSTRA M,KURDI P.Cholate Resistance in Lactococcus lactis is Mediated by an ATP-dependent Multispecific Organic Anion Transporter[J].J Bacteriol,2000,182:5196-5201.

[13]SANCHEZ B,CHAMPOMIER-VERGES M C,ANGLADE P,et al.Proteomic Analysis of Global Changes in Protein Expression during Bile Salt Exposure of Bifidobacterium longum NCIMB 8809[J].J Bacteriol,2005,(187):5799-5808.

[14]烏日娜.益生菌 Lactobacillus casei Zhang蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D].呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

[15]RINCE A,FLAHAUT S,AUFFRAY Y.Identification of General Stress Genes in Enterococcus faecalis[J].Int.J.Food Microbiol,2000,55:87-91.

[16]KOSKENNIEMI K,LAAKSO K,KOPONEN J,et al.Proteomics and Transcriptomics Characterization of Bile Stress Response in Probiotic Lactobacillus rhamnosus GG[J].Mol Cell Proteomics,2011,10(2):M110 002741.

[17]WOUTERS J A,JEYNOV B,ROMBOUTS F M,et al.Analysis of the Role of 7 kDa Cold-shock Proteins of Lactococcus Lactis MG1363 in Cryoprotection[J].Microbiology,1999,145:3185-3194.

[18]DERZELLE S,HALLET B,FRANCIS K P,et al.Changes in CspL,CspP and CspC mRNA Abundance as a Function of Cold Shock and Growth Phase in Lactobacillus plantarum [J].J Bacteriol,2000,182:5105-5113.

[19]KIM W S,PERL L,PARK J H,et al.Assessment of Stress Response of the Probiotic Lacto-bacillus Acidophilus[J].Curr Microbiol,2001,43:346-350.

[20]WANG Y,DELETTRE J,GUILLOT A,et al.Infiuence of Cooling Temperature and Duration on Cold Adaptation of Lactobacillus acidophilus RD758[J].Cryobiology,2005,50:294-307.

[21]STREIT F,CORRIEU G,BEAL C.Acidification of Fermented Broth Improves Crytolerance of Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus CFL1[J].J Biotechnol,2007,128:659-667.

[22]WHITAKE R D,BATT C A.Characterization of the Heat Shock Response in Lactococcus lactis subsp.lactis[J].Appl Environ Microbiol,1991,57:1408-1412.

[23]AUFFARY Y,GANSEL X,THAMMAVONGS B,et al.Heat Shock-induced Protein Synthesis in Lactococcus lactis subsp.lactis[J].Curr Microbiol,1992,24:281-284.

[24]GOUESBET G,JAN G,BOYAVAL P.Two-dimensional Electrophoresis Study of Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus Thermotolerance[J].Appl Environ Microbiol,2002,68:1055-1063.

[25]KILSTRUP M,JACOBSEN S,HAMMER K,et al.Induction of Heat Shock Proteins DnaK,GroEL,and GroES by Salt Stress in Lactococcus lactis[J].Appl Environ Microbiol,1997,62:1826-1837.

[26]MIYOSHI A,ROCHAT T,GRATADOUX J J,et al.Oxidative Stress in Lactococcus lactis.Review[J].Genet Mol Res,2003,2:348-359.

[27]MOSTERTZ J,SCHARF C,HECKER M,et al.Transcriptome and Proteome Analysis of Bacillus subtilis Gene Expression in Response to Superoxide and Peroxide Stress[J].Microbiology,2004,150:497-512.

[28]ARENA S,DMBROSIO C,RENZONE G R,et al.A Study of Streptococcus thermophilus Proteome by Integrated Analytical Procedures and Differential Expression Investigations[J].Proteomics,2006,6:181-192.

[29]KUNJI E R,UBBINK T,MATINV A,et al.Physiological Responses of Lacotococcus lactis ML3 to Alternating Conditions of Growth and Starvation[J].Arch Microbiol,1993,159:372-379

[30]HARTKE A,GIARD J C,LAPLACE J M,et al.Survival of Enterococcus faecalis in an Oligotrophic Microcosm:Changes in Morphology,development of General Stress Resistance,and Analysis of Protein Synthesis[J].Appl Environ Microbiol,1998,64:4238-4245.

[31]SVENSATER G,SJOGREEN B,HAMILTON I R.Multiple Stress Responses in Streptococcus Mutans and the Induction of General and Stress-specific Protein[J].Microbiology,2000,146:107-117.

[32]GUEDON E,SERROR P,EHRLICH S D,et al.Pleiotropic Transcriptional Repressor CodY Senses the Intracellular Pool ofBranchedchain Amino Acids in Lactococcus lactis[J].Mol Microbiol,2001,40:1227-1239.

[33]WALL T,BATH K,BRITTEN A,et al.The Early Response to Acid Shock in Lcatobacillus reuteri involves the ClpL Chaperone and a Putative Cell Wall Altering Esterase[J].Appl Environ Microbiol,2007,73:3924-3935.

[34]DE ANQULIS M,BINI L,PALLINI V,et al.The Acid-sterss Response in Lactobacillus sanfranciscensis CB1[J].Microbiology.147(7):1863-1873.