藏藥四臣方急毒性實(shí)驗(yàn)研究

格桑次仁 余日躍

(1.西藏藏醫(yī)學(xué)院，西藏 拉薩 850000； 2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004)

藏藥四臣是藏醫(yī)名著中的經(jīng)典處方，是由甘草、露爾木(又名螃蟹甲)、巖白菜等4 味藏藥組成，具有非常顯著的清熱解毒、止咳平喘、潤(rùn)喉祛痰作用。長(zhǎng)期的臨床證實(shí)藏藥四臣具有很好的止咳作用，對(duì)于多種咳嗽有很好的治療作用，現(xiàn)擬開(kāi)發(fā)其為治咳新藥。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 動(dòng)物分組: 取健康正常昆明種小白鼠，體重18 ～22g，雌雄各半，按體重隨機(jī)分組。

1.2 藥液配制: 水提液的制備: 將甘草、螃蟹甲、巖白菜、豬毛蒿制成飲片，恒溫箱內(nèi)(45℃)干燥4h，按1.0: 1.3: 1.2: 1.0 比例依次稱(chēng)取上述4 種生藥(本試驗(yàn)取總生藥量500g，依次為109.65g、145.85g、134.85g、109.65g)，加入10 倍生藥量蒸餾水浸泡2h，回流提取2h，過(guò)濾，濾渣，加入8 倍生藥量蒸餾水，繼續(xù)回流2h，過(guò)濾;混合兩次提取液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)(60℃)蒸發(fā)濃縮至1g 生藥/mL(本試驗(yàn)濃縮至500mL)。存冰箱備用。(醇提液提取工藝同上，提取溶劑為60%乙醇)。

1.3 正式實(shí)驗(yàn)—改良寇氏法［1-2］

醇提液: 按改良寇氏法設(shè)計(jì)，各劑量組隨機(jī)分配小鼠10 只，雌雄各半，共6 組，以Dmax 為最高劑量組，組間劑量比值確定為1: 0.8。分組完畢和算出各組每只小鼠給藥劑量后，按“低比稀釋法”配藥。分別按40mL/kg 灌胃給藥1次(注: ①由于備用供試藥液為1g/mL，將其至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸發(fā)濃縮至大于4g 生藥/mL 時(shí)，藥液已成糊狀，不便灌胃給藥，故高劑量組(前兩組)均分2 次給藥，每次給藥濃度為原濃度的一半，2h 后第二次給藥;②由于預(yù)先估計(jì)在給藥劑量為320.0g 生藥/kg(Dmax)和256.0g 生藥/kg 可能同時(shí)出現(xiàn)100%死亡效應(yīng)，故此試驗(yàn)中不對(duì)給藥劑量為320.0g 生藥/kg 進(jìn)行試驗(yàn))。

水提液: 水提液在預(yù)試驗(yàn)中顯示毒性較醇提液低，預(yù)計(jì)不能測(cè)定LD50，此試驗(yàn)中嘗試性設(shè)5 個(gè)劑量組，各劑量組隨機(jī)分配小鼠10 只，雌雄各半。以280.0g 生藥/kg 為最高劑量，組間劑量比值確定為1: 0.8。分組完畢和算出各組每只小鼠給藥劑量后，按“低比稀釋法”配藥。分別按40mL/kg 灌胃給藥1 次(注: 由于備用供試藥液為1g/mL，將其至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸發(fā)濃縮至大于3.5g/mL 時(shí)，藥液已成糊狀，不便灌胃給藥，故高劑量組(前兩組)均分2 次給藥，每次給藥濃度為原濃度的一半，2h 后第二次給藥)。

給藥后逐日觀察14d，并記錄毒性反應(yīng)，死亡數(shù)和死亡情況。試驗(yàn)完畢后統(tǒng)計(jì)各組死亡率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算。

2結(jié) 果

2.1 供試動(dòng)物的主要表現(xiàn): 醇提液和水提液，在給藥后較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)，小鼠均表現(xiàn)嗜睡、活動(dòng)減少、呼吸加快的癥狀，少數(shù)小鼠有腹瀉癥狀，且雄性多于雌性。所測(cè)小鼠均在給藥4h 后開(kāi)始死亡，在48h 后死亡數(shù)基本固定。小鼠死亡前翻正反射消失，前后肢伸直，稍有抽搐。對(duì)瀕臨死亡或死亡不久的小鼠進(jìn)行解剖，可見(jiàn)胃內(nèi)有大量棕黑色藥液，肝臟臟面光滑，暗紅色。有少量死亡小鼠出現(xiàn)輕度肺部紅腫。

2.2 藏藥四臣60% 乙醇提取液對(duì)小白鼠灌胃給藥的LD50: 四臣60%乙醇提取液對(duì)小鼠灌胃給藥的LD50 為203.00g0.0064 生藥/kg，95%可信限為197.24 ～208.93g生藥/kg。

2.3 藏藥四臣水提取液對(duì)小白鼠灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)結(jié)果: 水提液在最大給藥劑量280.0g 生藥/kg 時(shí)，對(duì)小鼠的死亡率僅為70%，224.0g 生藥/kg 時(shí)僅為10%，從第3組小鼠，給藥劑量為179.2g/kg 開(kāi)始，即不出現(xiàn)小鼠死亡效應(yīng)。故不能測(cè)定水提液對(duì)小白鼠的LD50，可對(duì)其做最大給藥量試驗(yàn)進(jìn)行安全性研究。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)測(cè)定不同工藝的藏藥四臣(60%乙醇提取液及水提液)的急性毒性反應(yīng)，從而判定其毒性和安全性，為深入研究藏藥四臣工藝選擇、藥效研究、以及開(kāi)發(fā)為新藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］周立國(guó).藥物毒理學(xué)［M］. 北京： 中國(guó)醫(yī)藥科技出版服社，2003.146 ～161.

［2］陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］. 北京： 人民衛(wèi)生出版社，1993.112 ～115.