卷柏抗腫瘤轉(zhuǎn)移的活性成分

齊 妍

(天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，天津300211)

卷柏為蕨類卷柏科Selaginellaceae 卷柏屬Selaginella 多年生草本植物卷柏Selaginella tamariscina(Beauv.)Spring 的全草，又名長生不死草、九死還魂草、石蓮花等，多分布于我國江南地區(qū)［1］?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，卷柏屬植物中的成分具有抗腫瘤［2-3］、抗病毒［4-5］、抗菌、增強(qiáng)免疫功能、舒張血管［6-7］等作用。本實驗運用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、制備HPLC 色譜等方法從卷柏浸膏中分離鑒定了7 個化合物，包括雙黃酮類化合物和生物堿類化合物，其中化合物5 ～7 為首次從該植物中分離得到。此外，本實驗對分離得到的生物堿類化合物進(jìn)行了抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性的篩選，結(jié)果顯示化合物6 和7 具有較強(qiáng)的抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性。

1 儀器與材料

Bruker AV 400 核磁共振儀 (TMS 內(nèi)標(biāo));Bruker esquire 3000 00142 質(zhì)譜儀;JASCO 半制備高效液相色譜儀(PU-2089，RI-2031，UV-2075，日本分光公司);YMC-Pack ODS-A SH-343-5 色譜柱(20 mm × 250 mm，5 μm);A sahipak GS-20G H200142，H200143 色譜柱(20 mm × 500 mm，5 μm);UV-3310 型紫外-可見分光光度計(日本Hitachi 公司);柱色譜和薄層色譜用硅膠(青島海洋化工廠);DFZ-3 型真空干燥器(上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠);37 ℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(Heal Force公司);超凈工作臺(蘇州凈化設(shè)備有限公司);全自動酶標(biāo)板分析儀(BIO-RAD 公司);倒置顯微鏡(Olympus 公司);96 孔酶標(biāo)板、6 孔酶標(biāo)板(Nest);所用試劑均為分析純;氘代試劑(Aldrich公司);含酚紅或不含酚紅RPMI1640 培養(yǎng)液(北京四環(huán)科技公司);胎牛血清(FBS)，PBS (Hy-Clone);LY294002 (上海榮盛生物藥業(yè)有限公司);四甲基偶氮唑鹽(MTT)(Sigma 公司);25%(含EDTA)胰蛋白酶(Bioind 公司);二甲基亞砜(Sigma 公司);乳腺癌MDA-MB-231 細(xì)胞購自中科院上海細(xì)胞庫。

卷柏Selaginella tamariscina (Beauv.)Spring 于2006 年7 月采自河南，由中南民族大學(xué)生命科學(xué)院萬定榮教授鑒定，標(biāo)本(D20060715)存放于天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥劑科中藥房。

2 實驗方法

2.1 提取分離 取自然干燥的卷柏全草9.5 kg，粉碎后用75%的乙醇加熱回流提取3 次，每次6 h，提取液減壓濃縮，得浸膏500 g，將浸膏以水混懸，依次用水飽和的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別得到石油醚部位(39.0 g)，乙酸乙酯部位(69 g)，正丁醇部位(70.1 g)。卷柏石油醚提取物及乙酸乙酯提取物分別以硅膠柱層析(500 g，200 ～300 目)分離，用石油醚-乙酸乙酯(9 ∶1，7 ∶1，5 ∶1，3 ∶1，2 ∶1，1 ∶1，1 ∶2，1 ∶3)，100%乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇(95 ∶5，90 ∶10，80 ∶20)和100%甲醇梯度洗脫，分離得到10 個組分(A ～J)。

組分B 經(jīng)過凝膠滲透柱層析Toyopeal HW-40分離，二氯甲烷-甲醇(2 ∶1)洗脫，得到Fr. B1、Fr.B2、Fr.B3、Fr.B4 和Fr.B5。Fr.B4 再經(jīng)制備高效液相色譜分離純化，分別得到化合物6 (7.4 mg)和化合物7 (5.4 mg);組分E 經(jīng)過凝膠滲透柱層析Toyopeal HW-40 分離，二氯甲烷-甲醇(2 ∶ 1)洗 脫，得 到 Fr. E1、Fr. E2、Fr. E3、Fr.E4。Fr.E2 再經(jīng)制備高效液相色譜及制備薄層色譜法分離純化，得到化合物5 (3.6 mg)。組分H 經(jīng)過凝膠滲透柱層析Toyopeal HW-40 分離，二氯甲烷-甲醇(1 ∶1)洗脫，得到Fr. H1、Fr. H2、Fr.H3。Fr.H2 再反復(fù)經(jīng)制備高效液相色譜法分離純化，分別得到化合物1 (11.1 mg)，化合物2(4.8 mg)，化合物3 (9.2 mg)，化合物4(10.3 mg)。

2.2 MTT 法篩選化合物低細(xì)胞毒劑量 將細(xì)胞用0.25%的胰酶消化，吸出胰酶后，用含10% FBS的培養(yǎng)液終止消化，混勻細(xì)胞懸液，計數(shù)，調(diào)節(jié)細(xì)胞密度為1 ×104個/mL。將調(diào)好的細(xì)胞懸液加于96孔板，每孔180 μL，置于37 ℃，5% CO2的孵箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，24 h 后加藥，每個濃度5 個復(fù)孔，繼續(xù)置于37 ℃，5% CO2的孵箱內(nèi)培養(yǎng)48 h。之后每孔加5 mg/mL 的MTT 15 μL，37 ℃，5% CO2的孵箱內(nèi)培養(yǎng)4 h，4 h 后取出96 板，將上清吸出，每孔加100 μL 的DMSO，用酶標(biāo)儀在490 nm 波長下測量吸光度。抑制率(%) = ［1 - (加藥組OD 值/ 空白組OD 值)］×100%。

2.3 傷口愈合實驗 收集對數(shù)生長期的細(xì)胞，均勻接種于六孔板中;待細(xì)胞長至完全融合后，用10 μL 無菌槍頭在每孔單層細(xì)胞中央輕輕地劃一道傷痕，沿劃痕邊緣等距離間隔做上標(biāo)記，以便檢測;PBS 沖洗，換液后分別用不同濃度的化合物處理24 h;然后用倒置顯微鏡觀察劃痕愈合程度并拍照，利用IPPWIN60 統(tǒng)計細(xì)胞遷移距離，然后進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

3 結(jié)果

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:淡黃色粉末，易溶于甲醇、丙酮。硅膠GF254板顯棕黃色暗斑，試劑FeCl3- K3［Fe(CN)6］顯藍(lán)色，茴香醛-濃硫酸噴霧后加熱顯黃色。1H-NMR［400 MHz，(CD3)2CO］δ:6.63 (1H，s，H-3)，6.19 (1H，d，J =1.9 Hz，H-6)，6.36(1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，7.79 (1H，dd，J=8.6，2.2 Hz，H-2')，7.10 (1H，d，J =8.6 Hz，H-3')，8.03 (1H，d，J=2.2 Hz，H-6')，6.56 (1H，s，H-3″)，6.21 (1H，s，H-6″)，7.69 (2H，d，J =8.8 Hz，H-2?，6?)，6.68 (2H，d，J =8.8 Hz，H-3?，5?)。13C-NMR［75 MHz，(CD3)2CO］δ:166.3 (C-2)，103.7 (C-3)，183.8 (C-4)，163.5 (C-5)，100.3 (C-6)，163.5 (C-7)，95.1 (C-8)，158.6(C-9)，107.1 (C-10)，122.8 (C-1')，128.5 (C-2')，117.1 (C-3')，159.7 (C-4')，119.2 (C-5')，132.4 (C-6')，163.9 (C-2″)，103.4 (C-3″)，184.3(C-4″)，162.1 (C-5″)，98.3 (C-6″)，162.7 (C-7″)，104.6 (C-8″)，155.9 (C-9″)，106.0 (C-10″)，122.8 (C-1?)，128.9 (C-2?，6?)，116.5 (C-3?，5?)，161.8 (C-4?)。與文獻(xiàn)［8］對照，確定化合物1 為阿曼托雙黃酮(amentoflavone)。

化合物2:黃色粉末，難溶于三氯甲烷、甲醇，易溶于二甲基亞砜;mp ＞300 ℃;HCl-Mg 粉反應(yīng)為陽性，F(xiàn)eCl3試液顯色為藍(lán)色，氨氣熏后黃色熒光顏色加深。1H-NMR［300 MHz:DMSO-d6，TMS］δ:13.22 (1H，s，HO-5△)，13.09 (1H，s，HO-5″△)(△表示2 個歸屬可以互換);在9 ～11 之間有3H，應(yīng)為3 個活潑氫，即為3 個羥基取代，由于溶劑中混有水而被交換掉。1H-NMR ［400 MHz:DMSO-d6，TMS］ δ:6.87 (1H，s，H-3)，6.21(1H，d，J =1.4 Hz，H-6)，6.49 (1H，d，J =1.4 Hz，H-8)，8.03 (2H，d，J =8.7 Hz，H-2')，7.05(2H，d，J=8.7 Hz，H-3')，7.05 (2H，d，J =8.7 Hz，H-5')，8.03 (2H，d，J = 8.7 Hz，H-6')，13.22 (5-OH)，10.79 (7-OH)，6.87 (1H，s，H-3″)，6.73 (1H，s，H-8″)，7.96 (2H，d，J =8.7 Hz，H-2?)，6.94 (2H，d，J=8.7 Hz，H-3?)，6.94(2H，d，J=8.7 Hz，H-5?)，7.96 (2H，d，J =8.7 Hz，H-6?)，12.90 (5''-OH)，10.80 (7″-OH)，10.38 (4?-OH)。13C-NMR［75 MHz，DMSO-d6］δ:164.3 (C-2)，103.8 (C-3)，181.8 (C-4)，160.5(C-5)，99.2 (C-6)，163.3 (C-7)，94.3 (C-8)，157.5 (C-9)，104.1 (C-10)，124.4 (C-1')，128.7(C-2')，115.4 (C-3')，160.8 (C-4')，115.4 (C-5')，128.7 (C-6')，163.1 (C-2″)，103.1 (C-3″)，182.3 (C-4″)，151.9 (C-5″)，124.8 (C-6″)，158.2(C-7″)，92.3 (C-8″)，154.4 (C-9″)，104.3 (C-10″)，121.1 (C-1?)，128.7 (C-2?)，116.3 (C-3?)，161.6 (C-4?)，115.9 (C-5?)，128.7 (C-6?)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報道的扁柏雙黃酮數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物2 為扁柏雙黃酮(hinokiflavone)。

化合物3:黃色粉末，難溶于甲醇、三氯甲烷，易溶于二甲基亞砜;mp ＞300 ℃;HCl-Mg粉反應(yīng)為陽性，F(xiàn)eCl3 試液顯色為藍(lán)色，氨氣熏后黃色熒光顏色加深。1H-NMR ［400 MHz，DMSO-d6］δ:13.24 (1H，s，HO-5″)，13.0 (1H，s，HO-5)，7.89 (2H，d，J =7.8 Hz，H-2″，H-6?)，7.91 (1H，d，J =8.4 Hz，H-6')，7.82 (1H，s，H-2')，7.01 (1H，d，J = 8.4 Hz，H-5')，6.95(2H，d，J =8.4 Hz，H-3?，H-5?)，6.83 (1H，s，H-3)，6.78 (1H，s，H-3″)，6.62 (1H，s，H-8″)，6.48 (1H，d，J = 3.0 Hz，H-8)，6.19(1H，d，J = 3.0 Hz，H-6)。13C-NMR ［75 MHz，DMSO-d6］ δ:182.3 (C-4″)，182.0 (C-4)，167.6 (C-2，C-2″)，165.3 (C-7)，164.8 (C-7″)，163.4 (C-5)，162.1 (C-4?)，161.6 (C-5″)，159.8 (C-4')，158.0 (C-9)，157.3 (C-9″)，131.9 (C-6')，129.3 (C-2?，6?)，128.9 (C-2')，123.5 (C-1?)，122.2 (C-1')，119.4 (C-3')，117.7 (C-5')，116.7 (C-3?，5?)，104.3(C-10，10″)，103.1 (C-6″)，102.8 (C-3)，102.4 (C-3″)，99.5 (C-6)，95.9 (C-8)，94.6(C-8″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報道的羅波斯塔黃酮數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物3 為羅波斯塔黃酮(robustaflavone)。

化合物4:淺黃色粉末，UV365 nm 下呈黃色熒光，254 nm 下呈暗斑，10%硫酸乙醇溶液顯色呈淺黃色，碘熏顯黃色，難溶于三氯甲烷、甲醇，熱溶于丙酮，易溶于DMSO。1H-NMR ［400MHz，DMSO-d6］δ:6.95 (1H，s，H-3)，6.33 (1H，d，J=1.7 Hz，H-6)，6.89 (1H，d，J=1.7 Hz，H-8)，8.01 (2H，d，J=8.4 Hz，H-2')，6.94 (2H，d，J=8.4 Hz，H-3')，6.96 (2H，d，J=8.4 Hz，H-5')，8.01 (2H，d，J =8.4 Hz，H-6')，13.14 (5-OH)，10.81 (7-OH)，7.13 (1H，s，H-3″)，6.45(1H，s，H-8″)，8.05 (2H，d，J =8.4 Hz，H-2?)，7.03 (2H，d，J=8.4 Hz，H-3?)，7.03 (2H，d，J=8.4 Hz，H-5?)，8.02 (2H，d，J =8.4 Hz，H-6?)，12.89 (5″-OH)，3.89 (7″-OCH3)，10.45 (4?-OH)。13C-NMR［75 MHz，(CD3)2SO］δ:164.6 (C-2)，103.8 (C-3)，181.8 (C-4)，161.5 (C-5)，99.2 (C-6)，164.3 (C-7)，94.3 (C-8)，157.5 (C-9)，104.1 (C-10)，124.4 (C-1')，128.7 (C-2')，115.4 (C-3')，160.8 (C-4')，115.4 (C-5')，128.7 (C-6')，163.1 (C-2″)，103.1 (C-3″)，182.3 (C-4″)，151.9 (C-5″)，124.8 (C-6″)，158.2 (C-7″)，92.3 (C-8″)，154.4 (C-9″)，104.3 (C-10″)，121.1 (C-1?)，128.7 (C-2?)，116.3 (C-3?)，161.6 (C-4?)，115.9 (C-5?)，128.7 (C-6?)，56.8 (7″-OCH3)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］中異柳杉雙黃酮(isocryptomerin)數(shù)據(jù)對照基本一致，故鑒定化合物4 為異柳杉雙黃酮(isocryptomerin )。

化合物5:無色粉末，難溶于甲醇、三氯甲烷。1H-NMR ［400 MHz，CD3OD］ δ:3.57 (1H，ddd，J=9.0，9.0，4.0 Hz，H-2)，3.41 (1H，ddd，J=9.0，9.0，9.0 Hz，H-2')，2.41 (1H，ddd，J =13.5，9.0，4.0 Hz，H-3)，2.16 (1H，ddd，J =13.5 Hz，J = 9.0 Hz，J = 9.0 Hz，H-3')，7.56(1H，m，H-4)，7.60 (1H，m，H-5)，7.57 (1H，m，H-6)，7.68 (1H，d，J =7.5 Hz，H-7)，5.75(1H，s，H-8)，2.89 (2H，m，H-9，H-9')，6.33(1H，brt，J =7.5 Hz，H-10)，1.90 (3H，brs，H-11，H-12，H-13)，3.09 (3H，s，N1-CH3)，3.34(3H，s，N8-CH3)，2.99 (3H，s，N8-CH3)。13CNMR［75 MHz，CD3SOCD3］δ:56.0 (C-2)，38.9(C-3)，57.6 (C-3a)，126.4 (C-4)，140.2 (C-4a)，132.3 (C-5)，131.2 (C-6)，120.6 (C-7)，146.3 (C-7a)，123.9 (C-8a)，36.3 (C-9)，131.8(C-10)，138.5 (C-11)，13.9 (C-12)，174.8 (C-13)，39.3 (N1-CH3)，53.1 (N8-CH3)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報道的卷柏酸數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物5 為卷柏酸(selaginellic acid)。

化合物6:無色粉末，1H-NMR ［400 MHz，CD3SOCD3，TMS］δ:7.19 (2H，d，J=9 Hz，H-3，H-5)，6.98 (2H，d，J =9 Hz，H-2，H-6)，5.39(1H，d，J = l Hz，H-l')，5.04 (1H，D2Oexch.，OH-2')，4.88 (1H， D2Oexch.， OH-4')，4.75(1H，D2Oexch.，OH-3')，3.74 (1H，dd，J =1.5 Hz，J=l Hz，H-2')，3.69 (1H，dd，J =9 Hz，J =1.5 Hz，H-3')，3.52 (1H，dq，J=9 Hz，J=6 Hz，H-5')，3.24 (1H，t，J =9 Hz，H-4')，2.68 (2H，t，J=8 Hz，CH2-7)，2.45 (2H，t，J =8 Hz，CH2-8)，2.22 (6H，s，NMe2，)，1.14 (3H，d，J=6 Hz，CH3-6')。13C-NMR［75 MHz，CD3SOCD3］δ:154.2(C-1)，116.2 (C-2)，129.3 (C-3)，133.6 (C-4)，129.3 (C-5)，116.2 (C-6)，32.2 (C-7)，60.7 (C-8)，44.8 (N-CH3)2，98.7 (C-1')，69.8 (C-2')，70.2 (C-3')，71.3 (C-4')，69.2 (C-5')，17.7 (C-6')，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報道的麥芽堿-O-α-L-吡喃鼠李糖苷數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物6 為麥芽堿-O-α-L 吡喃鼠李糖苷 (horde-nine-O-α-L-rhamnopyranoside)。

化合物7:無色粉末，1H-NMR ［400 MHz，CD3SOCD3，TMS］δ:7.68 (1H，d，J =16Hz，H-7?)，7.60 (2H，m，H-2?，H-6?)，7.39 (3H，m，H-3″，H-4?，H-5″)，7.00 (2H，d，J =9 Hz，H-3，H-5)，6.88 (2H，d，J =9 Hz，H-2，H-6)，6.65(1H，d，J=16 Hz，H-8″)，5.25 (1H，d，J=1 Hz，H-1')，5.16，5.05，4.87 (3H，D2Oexch.，3OH)，4.54 (1H，d，J=7 Hz，H-l″)，4.45 (1H，dd，J=12，2 Hz，H-6″a)，4.24 (1H，dd，J=12，7 Hz，H-6″b)，4.02 (1H，dd，J =1.5，1 Hz，H-2')，3.76(1H，dd，J=9，1.5 Hz，H-3')，3.54 (3H，m，H-4'，H-5'，H-3″)，3.36 (2H，D2Oexch.，2OH)，3.21 (3H，m，H-2"，H-4"，H-5")，2.62 (4H，m，CH2-7，CH2-8)，2.36 (6H，s，N-CH3)，1.11(3H，d，J = 6 Hz，CH3-6')。13C-NMR ［75 MHz，(CD3)2CO］δ:154.3 (C-1)，116.2 (C-2)，129.3(C-3)，133.6 (C-4)，129.3 (C-5)，116.2 (C-6)，32.2 (C-7)，60.8 (C-8)，44.8 (N-CH3)2，98.7(C-1')，69.8 (C-2')，70.2 (C-3')，71.4 (C-4')，69.2 (C-5')，17.6 (C-6')，104.6 (C-1″)，72.9(C-2″)，76.1 (C-3″)，70.3 (C-4″)，73.5 (C-5″)，63.9 (C-6″)，133.7 (C-1?)，128.1 (C-2?)，128.7(C-3?)，130.2 (C-4?)，128.7 (C-5?)，128.0 (C-6?)，144.3 (C-7?)，117.8 (C-8?)，165.8 (C-9?)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報道數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物7 為麥芽堿-O- ［(6″-O-反式肉桂?；?-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖基-α-L-吡喃鼠李糖苷］ (hordenine-O- ［(6″-O-trans-cinnamoyl)-4'-O-β-D-glucopyranosyl-α-L-rhamnopyranoside)。

3.2 MTT 實驗結(jié)果 本實驗測定了各個化合物對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 的細(xì)胞毒性，結(jié)果如表1 所示，化合物1 ～4 在25 μmol/L 和50 μmol/L 均能抑制MDA-MB-231 細(xì)胞的增殖，顯示出一定的細(xì)胞毒性，而化合物5 ～7 在25 μmol/L 和50 μmol/L的濃度作用下沒有顯示出任何細(xì)胞毒作用。

表1 各個化合物對MDA-MB-231 的細(xì)胞毒性Tab.1 Cytotoxicity of compounds 1 ～7 on MDA-MB-231 cells

3.3 傷口愈合實驗結(jié)果 劃痕實驗(又稱傷口愈合實驗)是檢測細(xì)胞遷移的一種方法。在沒有化誘因子濃度梯度的情況下，細(xì)胞可以感受到“傷口”，并通過重組微管組織中心沿垂直于傷口劃痕的方向運動。本實驗選用乳腺癌MDA-MB-231 腫瘤細(xì)胞系，采用以傷口愈合實驗為評價手段，測定生物堿類化合物6 和7 在非細(xì)胞毒劑量下對乳腺癌MDA-MB-231 細(xì)胞遷移的影響，如圖1 所示，化合物6、7 及陽性對照藥LY294002 的IC50分別為0.746 μmol/L、0.466 μmol/L 和1.215 μmol/L，結(jié)果顯示化合物6 和7 相比陽性對照藥LY294002能夠更強(qiáng)地抑制MDA-MB-231 細(xì)胞的遷移。

圖1 化合物6 和7 抑制MDA-MB-231 的遷移Fig.1 Compounds 6 and 7 inhibit the migration of MDA-MB-231 cells

4 討論

本實驗從卷柏石油醚和乙酸乙酯極性部位提取分離得到7 個化合物，其中化合物5 ～7 為首次從該植物中分離得到。本實驗利用乳腺癌MDA-MB-231 細(xì)胞為體外模型，測定7 個化合物對MDA-MB-231 細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果顯示化合物1 ～4 能夠劑量依存性地抑制MDA-MB-231 細(xì)胞的增殖。進(jìn)一步采用劃痕實驗，測定化合物6 和7 在非細(xì)胞毒劑量下對乳腺癌MDA-MB-231 細(xì)胞遷移的影響，結(jié)果顯示化合物6 和7 與陽性對照藥LY294002 相比能夠更強(qiáng)地抑制MDA-MB-231 細(xì)胞的遷移，顯示了明確的體外抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用。以上研究為中藥卷柏的現(xiàn)代應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。

［1］ 鄭曉珂，畢躍峰，馮衛(wèi)生，等. 卷柏化學(xué)成分研究［J］. 藥學(xué)學(xué)報，2004，39(4):266-268.

［2］ Ahn S H，Mun Y J，Lee S W，et al. Selaginella tamariscina induces apoptosis via a caspase-3-mediated mechanism in human promyelocytic leukemia cells［J］. J Med Food，2006，9(2):138-144.

［3］ Yang F S，Chu S C，Liu S J，et al. Antimetastatic activities of Selaginella tamariscina (Beauv.)on lung cancer cells in vitro and in vivo［J］. J Ethnopharmacol，2007，110(3):483-489.

［4］ 雷 湘，陳科力，黎 莉，等. 卷柏屬藥用植物提取物體外抗柯薩奇病毒作用研究［J］. 中藥藥理與臨床，2007，23(5):110-113.

［5］ Lee J Y，Choi Y J，Woo E R，et al. Isocryptomerin，a novel membrane-active antifungal compound from Selaginella tamariscina［J］. Biochem Bioph Res Co，2009，379(3):676-680.

［6］ Kang D G，Yin M H，Oh H，et al. Vasorelaxation by amentoflavone isolated from Selaginella tamariscina ［J］. Planta Med，2004，70(8):718-722.

［7］ Yin M H，Kang D G，Choi D H，et al. Screening of vasorelaxant activity of some medicinal plants used in Oriental medicines［J］. J Ethnopharmacol，2005，99(1):113-117.

［8］ 趙 軍，閆 明，黃 毅，等. 新疆圓柏黃酮類成分的研究［J］. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2008，28(2):33-37.

［9］ 顧世海，張 丹，徐麗珍，等. 雞毛松化學(xué)成分的研究(Ⅱ)［J］. 中國中藥雜志，1997，22(3):169-170.

［10］ Lin Y M，Chen F C. Robustaflavone from the seed-kernels of Rhus succedanea ［J］. Phytochemistry， 1974， 13 (8 ):1617-1619.

［11］ Silva G L，Chai H，Guptam P，et al. Cytotoxic biflavonoids from Selaginella willdenowii［J］. Phytochemistry，1995，40(1):129-134.

［12］ Wang Y H，Long C L，Yang F M，et al. Pyrrolidinoindoline alkaloids from Selaginella moellendorfii［J］. J Nat Prod，2009，72(6):1151-1154.

［13］ Lin R C，Seguin E，Tillequin F，et al. New alkaloid glycosides from Selaginella doederleinii［J］. J Nat Prod，1987，50(3):422-426.