驢糞中腸纖毛蟲(chóng)的初步分類鑒定

周 勇，劉利林

（1.新疆呼圖壁縣畜牧獸醫(yī)局，新疆 呼圖壁831200；2.塔里木大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 阿拉爾843300）

纖毛蟲(chóng)在動(dòng)物體內(nèi)分布非常廣泛，目前研究最多的是瘤胃纖毛蟲(chóng)［1］。Bonhomme等［2］認(rèn)為，纖毛蟲(chóng)存在可以使胃腸道保持適宜的發(fā)酵水平、高水平氨氮，使纖維、有機(jī)物消化率提高，穩(wěn)定p H等作用。盲腸纖毛蟲(chóng)作為驢盲腸微生物的重要組成，對(duì)維持盲腸內(nèi)環(huán)境和消化吸收起著重要作用。有關(guān)驢的腸道纖毛蟲(chóng)的研究非常少，并且關(guān)于驢的營(yíng)養(yǎng)消化的的研究報(bào)道也非常缺乏。目前馬屬動(dòng)物腸道纖毛蟲(chóng)的研究方法主要還是依靠形態(tài)學(xué)法，國(guó)外的學(xué)者對(duì)馬盲腸和結(jié)腸中的原蟲(chóng)進(jìn)行了研究。如Kornilova［3］在雅庫(kù)特馬腸道中發(fā)現(xiàn)了57種纖毛蟲(chóng)，Moore and Dehority［4］在馬的盲腸和結(jié)腸中發(fā)現(xiàn)了腸纖毛蟲(chóng)。Julliand［5］研究了15個(gè)土耳其馬糞樣中大腸纖毛蟲(chóng)的種群結(jié)構(gòu)和分布，鑒定了22個(gè)屬的36個(gè)種的纖毛蟲(chóng)。由于經(jīng)濟(jì)的發(fā)展變化，隨著農(nóng)村生產(chǎn)的機(jī)械化水平不斷提高，驢的養(yǎng)殖數(shù)量大幅度下滑，而且，驢的研究?jī)r(jià)值也逐漸被忽視，驢的營(yíng)養(yǎng)代謝相關(guān)的科研嚴(yán)重滯后甚至停滯，在驢的營(yíng)養(yǎng)方面的研究投入明顯少于其他家畜。近年來(lái)，由于人們的生活水平的提高，阿膠、驢肉、驢奶產(chǎn)業(yè)的興起，驢養(yǎng)殖業(yè)也迅速發(fā)展［6］，但是，有關(guān)驢的營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)和機(jī)理尚不健全，尤其對(duì)驢的盲腸微生物的研究更是缺乏。通過(guò)對(duì)驢腸道纖毛蟲(chóng)的研究可以全面揭示纖毛蟲(chóng)在驢營(yíng)養(yǎng)消化中的作用，為進(jìn)一步從腸道纖毛蟲(chóng)的角度研究驢的消化生理機(jī)能和進(jìn)行腸道纖毛蟲(chóng)調(diào)控奠定基礎(chǔ)。本文對(duì)驢糞中腸纖毛蟲(chóng)的進(jìn)行了初步的分類鑒定和計(jì)數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮驢糞，35%的甲醛，NaCL，甲基綠（上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司），蒸餾水，石蠟油。

1.2 儀 器

電子天平，XB-K-25型血球計(jì)數(shù)板，OLYPUS DP70型生物顯微系統(tǒng)（OLYPUS BX41），OLYPUS CX21型生物顯微鏡。蓋玻片，載玻片，量筒，燒杯，玻璃棒，吸管。

1.3 MFS溶液配制

將35%的甲醛100 m L、NaCL8.0 g、甲基綠0.6 g和蒸餾水900 m L混合既得 MFS溶液，常溫保存。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 染色固定 采集新鮮驢糞，立即用其體積兩倍的MFS溶液進(jìn)行固定和染色，靜置數(shù)分鐘后，用吸管吸取少許溶液滴在載玻片上，用蓋玻片蓋緊，再往蓋玻片上滴入一滴石蠟油，然后放置在1000倍顯微鏡下觀察纖毛的分布特點(diǎn)，蟲(chóng)體形狀，細(xì)胞核的形狀，胞口位置等［3］。

1.4.2 腸道纖毛蟲(chóng)計(jì)數(shù) 利用血球計(jì)數(shù)板在400倍生物顯微鏡下對(duì)驢糞中的纖毛蟲(chóng)進(jìn)行計(jì)數(shù)［7］。隨機(jī)抽取糞樣，計(jì)數(shù)10次，根據(jù)計(jì)算公式：纖毛蟲(chóng)數(shù)量／m L＝80小格內(nèi)的纖毛蟲(chóng)數(shù)／80×400×104×稀釋倍數(shù)。通過(guò)計(jì)算得出驢的糞中纖毛蟲(chóng)的平均密度為（0.9±0.77）×105個(gè)／m L。

2.4.3 蟲(chóng)體大小測(cè)量 同時(shí)利用顯微測(cè)量系統(tǒng)在1000倍下對(duì)蟲(chóng)體及細(xì)胞核進(jìn)行測(cè)量，細(xì)胞核與蟲(chóng)體的大小用長(zhǎng)軸表示，同種纖毛蟲(chóng)重復(fù)測(cè)量十個(gè)個(gè)體，計(jì)算平均值，單位為μm。

2 結(jié) 果

2.1 驢糞中腸纖毛蟲(chóng)的分類鑒定結(jié)果

圖1 驢糞中腸纖毛蟲(chóng)的分類鑒定結(jié)果A、B、C、D、E為不能確定的纖毛蟲(chóng)種類Fig.1 Classification and identification of intestinal ciliate in faecalis of donkey

在1000倍顯微鏡下觀察到的纖毛蟲(chóng)如圖1所示。通過(guò)形態(tài)學(xué)方法比較鑒定，可以確定的腸纖毛蟲(chóng)種類有七種，分別為Bundleia elongata、Bundleia triangularis、Bundleia postciliata、Cycloposthium Edentatum m.edentatum、Cycloposthium Edentatum m.scutigerum、Ditoxum funinucleum以及Blepharocorys microcorys。其中：Bundleia elongata、Bundleia triangularis和Bundleia postciliata屬于Buetschliidae纖毛蟲(chóng)屬；Cycloposthium Edentatum m.edentatum 和Cycloposthium Edentatum m.scutigerum屬于Cycloposthiidae纖毛蟲(chóng)屬；Ditoxum funinucleum 屬于Spirodiniidae纖毛蟲(chóng)屬；Blepharocorys microcorys Blepharocorythidae纖毛蟲(chóng)屬。另外，纖毛蟲(chóng)A、B、C、D、E在已有的文獻(xiàn)中未見(jiàn)報(bào)道，暫不能確定其分類。

2.2 腸道纖毛蟲(chóng)計(jì)數(shù)

通過(guò)計(jì)算得出驢的糞中纖毛蟲(chóng)的平均密度為（0.9±0.77）×105個(gè)／m L。

2.3 腸道纖毛蟲(chóng)測(cè)量結(jié)果

對(duì)驢糞中10個(gè)纖毛蟲(chóng)蟲(chóng)體進(jìn)行測(cè)量，測(cè)得其平均體長(zhǎng)為（8.50±6.26）μm，平均體寬為（5.45±3.40）μm，纖毛蟲(chóng)核的平均大小為（1.70±1.33）μm。

3 討 論

驢糞中所觀察到的纖毛蟲(chóng)與Gurelli和Gocmen［8］在土耳其馬糞中所觀察到的纖毛蟲(chóng)有部分相同。本研究中，纖毛蟲(chóng)平均數(shù)量與Gurelli和Gocmen［8］在土耳其馬的糞中檢測(cè)到的數(shù)量有一定的差異，分析其原因可能是生理狀況、季節(jié)、地域、日糧等的差異造成的。瘤胃纖毛的平均大小為20μm～30μm，驢腸道纖毛蟲(chóng)與瘤胃纖毛蟲(chóng)的大小存在較大差異，這與宿主物種的差異緊密相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)驢糞中腸道纖毛蟲(chóng)的種類有12種，其中7種纖毛蟲(chóng)已有文獻(xiàn)報(bào)道，另外5種在已有文獻(xiàn)沒(méi)有報(bào)道過(guò)，有待進(jìn)一步鑒定。與有人報(bào)道的土耳其馬糞中的腸道纖毛蟲(chóng)36種存在較大的差別［8］，而試驗(yàn)中鑒別纖毛蟲(chóng)的種類是以文獻(xiàn)中纖毛蟲(chóng)圖片為依據(jù)，應(yīng)用形態(tài)學(xué)分類法，進(jìn)行分類鑒定，所以具有一定的局限性和差異性，很多纖毛蟲(chóng)的種類不能做出明確的鑒定，并且文獻(xiàn)中所使用的15匹馬來(lái)自土耳其伊茲密爾附近，存在一定的地域差異，還有飼料的因素，所以纖毛蟲(chóng)的種類較多，而試驗(yàn)中所使用的驢來(lái)自同一個(gè)地區(qū)，沒(méi)有地域差異，飼喂的飼料都相同，所以體內(nèi)產(chǎn)生的纖毛蟲(chóng)的種類比較少。

［1］ 馮仰廉.反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)［M］.北京：科學(xué)出版社，2004：16-19.

［2］ Bonhomme A.Rumen ciliates：their metabolism and relationships with bacteria and their hosts［J］.Animal Feed Science and Technology，1990.

［3］ Kornilova O A.Ciliates from the intestine of Yakut horse（Equus caballus）［J］.Parazitologiia，2006，40（5）：472-478.

［4］ Moore B E，Dehority B A.Effects of diet and hindgut defaunation on diet digestibility and microbial concentrations in the cecum and colon of the horse［J］.J Anim Sci，1993，71（12）：3 350-3 358.

［5］ Julliand V，de Vaux A，Millet L，et al.Identification of Ruminococcus flavefaciens as the predominant cellulolytic bacterial species of the equine cecum［J］.Appl Environ Microbiol，1999，65（8）：3 738-3 7341.

［6］ 楊社珠.驢資源開(kāi)發(fā)利用方向的探討［J］.畜牧獸醫(yī)雜志，2011（4）：39-40，42.

［7］ 郭向榮，孫寶璉.瘤胃纖毛蟲(chóng)的計(jì)數(shù)方法及其臨床應(yīng)用［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，1980（4）：31-33.

［8］ Gurelli G，Gocmen B.Intestinal ciliate composition found in the feces of the Turk rahvan horse Equus caballus，Linnaeus 1758［J］.Eur J Protistol，2011，47（4）：245-55.