卵巢上皮癌患者血漿溶血磷脂酸和組織HER2/neu 檢測分析

楊浩昭

卵巢癌發(fā)病率位居婦科惡性腫瘤的第三位，由于其位居盆腔，缺乏明顯的早期癥狀和體征，導(dǎo)致確診較晚，患者死亡率位居婦科惡性腫瘤之首。研究發(fā)現(xiàn)，溶血磷脂酸(Lysop hosphatidic，LPA)可刺激卵巢癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移，檢測血漿LPA 水平在卵巢癌的診斷和預(yù)后判斷中有重要的意義［1］。人表皮生長因子受體2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2，HER2/neu)與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移也有密切關(guān)系，且能影響卵巢癌對化療藥物、激素治療藥物的敏感性，其表達被認為是卵巢癌預(yù)后不良的重要指標(biāo)［2］。LPA 和HER2/neu 均為細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的重要分子，兩者可能通過共同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮作用，LPA 可能是HER2/neu信號通路的上游分子，也可能影響HER2/neu 的表達［3］。本組總結(jié)近年來我科接診的卵巢上皮癌患者資料，并與同期就診的卵巢良性腫瘤患者相關(guān)資料做比較，分析LPA 和HER2/neu 在卵巢上皮癌中的表達特點，初步探討兩者之間可能的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2008 年1 月～2010 年1 月期間在我院合作醫(yī)院手術(shù)治療并經(jīng)術(shù)后病理確認的卵巢上皮癌患者50 例，患者年齡39～73 歲，平均52.4 歲?；颊卟±眍愋腿缦?漿液性囊腺癌34 例，黏液性囊腺癌10 例，內(nèi)膜樣癌4 例，其他2 例。FIGO分期如下:Ⅰ期6 例，Ⅱ期12 例，Ⅲ期22 例，Ⅳ期10 例?；颊咝g(shù)后殘留癌灶最大直徑均≤2 cm，術(shù)后接受2 ～6 周期的以鉑類藥物為主的聯(lián)合化療治療，同時在我院接受中醫(yī)藥輔助治療。

1.2 研究方法

1.2.1 血漿LPA 的測定 患者術(shù)后抽取空腹外周血3 ml，以LPA 檢測試劑盒抗凝劑抗凝，根據(jù)產(chǎn)品操作說明處理樣本并加入顯色劑后，采用AVE-853 半自動生化分析儀在波長636 nm 處比色。當(dāng)血漿LPA 濃度＞3.2 umol/L 時定為檢測結(jié)果陽性，≤3.2 umol/L 時為陰性。

1.2.2 組織HER2/neu 的檢測 以免疫組化SP 法檢測卵巢上皮癌組織的HER2/neu 蛋白。SP 試劑和HER2 單克隆抗體購自北京中山生物工程公司。制取組織切片后按照試劑說明操作，染色后封片，在光鏡下觀察。按照PIZER［4］報道的評分標(biāo)準(zhǔn)，分別對染色強度和染色范圍判分，將兩者相加，總分≥4 分者定為表達陽性，＜4 分者定位表達陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察血漿LPA 與病理分期的相關(guān)性、組織HER2/neu 與病理分期的相關(guān)性、LPA 和HER2/neu 兩者的相關(guān)性。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 17.0 統(tǒng)計學(xué)軟件。率的比較采用χ2檢驗。p ＜0.05 定為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 血漿LPA 與病理分期的相關(guān)性分析

50 例患者檢出LPA 陽性45 例(90.0%)，其余5 例(10.0%)為陰性，分別為I 期3 例，Ⅱ期2 例。經(jīng)χ2檢驗，不同病理分期患者的LPA 陽性率存在統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=14.815，p ＜0.05)，病理分期越低，LPA 陰性的可能性越高，Ⅲ期、Ⅳ期患者LPA 陽性率可達100%。

2.2 組織HER2/neu 與病理分期的相關(guān)性分析

50 例患者組織HER2/neu 檢查結(jié)果表明，陽性者15 例(30.0%)，陰性者35 例(70.0%)。各病理分期患者HER2/neu 檢出情況見表1。χ2檢驗表明，不同病理分期患者的組織HER2/neu 陽性率無統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=0.606，p ＞0.05)。

表1 組織HER2/neu 與病理分期的相關(guān)性分析 (n)

2.3 LPA 和HER2/neu 兩者的相關(guān)性分析

在45 例血漿LPA 陽性患者中，檢出HER2/neu(+)13例(28.9%)，陰性32 例(71.1%);在5 例血漿LPA 陰性患者中，檢出 HER2/neu (+ )2 例(40.0%)，陰性3 例(60.0%)。χ2檢驗表明，不同血漿LPA 患者間組織HER2/neu 陽性率無統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=0.265，p ＞0.05)。

表2 LPA 和HER2/neu 兩者相關(guān)性分析

3 討論

LPA 屬脂類小分子，是多功能的“磷脂信使”，可通過G蛋白介導(dǎo)的多種信號途徑發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，在卵巢癌患者的腹水、血漿中?？蓹z測到其高水平表達，其增加的程度與病理分期呈正相關(guān)。分析表明，LPA 可能的來源有兩方面:一是腫瘤細胞中磷脂酶A2 活力增高，LPA 分泌增加，升高的LPA 濃度作用于卵巢組織，可進一步刺激卵巢組織產(chǎn)生LPA，形成自分泌環(huán);二是來自于活化的血小板，血小板活化后產(chǎn)生多種溶血磷脂如溶血磷脂酰膽堿(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰絲胺酸(LPS)等，最后均可轉(zhuǎn)變?yōu)長PA［3］。高水平LPA 可促進卵巢組織的生長、浸潤和轉(zhuǎn)化，是卵巢癌不良預(yù)后之一。在本研究中，LPA 的陽性率高達90.0%，5 例LPA 陰性的患者均為分期較低的(I 期3 例，Ⅱ期2 例)，Ⅲ期、Ⅳ期患者LPA 陽性率達100%。結(jié)果驗證了LPA 表達水平與病理分期密切相關(guān)的觀點。

HER2/neu 屬于酪氨酸激酶表皮生長因子受體家族，正常情況下，只在胎兒期表達，成年后只有少數(shù)組織中可見到低水平表達。HER2/neu 具有多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其中以絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase，MAPK)途徑為主。HER2/neu 通過與家族中其他成員形成異源二聚體，從而與配體結(jié)合，在發(fā)生自身磷酸化后激活下游靶點。在15% ～34%的乳腺癌患者中可見到其高水平表達［5］。在卵巢癌患者中，其檢出率各報道不一。MAYR 等［6］報道，在91%的卵巢癌患者中可見HER2/neu 高表達，且其表達水平與卵巢癌大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等正相關(guān)。FELIP 等［7］檢測了106 例卵巢癌患者，檢出了23 例HER2/neu 高表達患者，檢出率為21.7%。卵巢癌組織中HER2/neu 檢出率的差異巨大，可能與不同作者的檢測方法、患者種族等因素有關(guān)。本研究共計檢出15 例HER2/neu 陽性者，陽性率為30.0%，分別為I 期2 例，Ⅱ期4 例，Ⅲ期7 例，Ⅳ期2 例，各分期患者HER2/neu 的陽性率無統(tǒng)計學(xué)差異。本研究結(jié)果與FELIP等［7］的研究結(jié)論更為相近。

鑒于LPA 和HER2/neu 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相似性，有作者［3］猜測，LPA 可能與HER2/neu 存在相同的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，LPA 可能作為HER2/neu 的上游分子，具有激活HER2/neu 的作用。LPA 也可能影響HER2/neu 的表達。體外細胞培養(yǎng)-免疫沉淀反應(yīng)證實，LPA 可誘導(dǎo)卵巢癌細胞中HER2/neu 分子的快速磷酸化，但并不能對HER2/neu 的表達產(chǎn)生影響。在本研究中，45 例LPA 陽性組患者檢出HER2/neu 陽性13 例(28.9%)，陰性32 例(71.1%);5 例LPA 陰性組患者檢出HER2/neu 陽性2 例(40.0%)，陰性3例(60.0%)，兩組之間陽性率無統(tǒng)計學(xué)差異，說明LPA 不能影響HER2/neu 的表達，與上述外細胞培養(yǎng)-免疫沉淀反應(yīng)中LPA 不刺激HER2/neu 表達的結(jié)論一致。但LPA 能誘導(dǎo)HER2/neu 分子的快速磷酸化，可能加速腫瘤的生長，惡化卵巢上皮癌患者的生存預(yù)期。本研究受病例數(shù)量較少、隨訪不嚴(yán)密等因素限制，無法驗證此結(jié)論。

［1］ 韋德英，湯春生. 溶血磷脂酸與卵巢癌［J］. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展，2004，13(4):297 -299.

［2］ 吳 冬，王 猛，惠 寧. 卵巢上皮性癌患者血清中HER2/neu 自身抗體的表達及診斷價值［J］. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2010，31(10):1076 -1080.

［3］ 葉 璐，劉 斌，李書華，等. 溶血磷脂酸在卵巢癌細胞內(nèi)HER2/neuHER2/neu 的激活作用［J］. 臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，12(8):570 -571.

［4］ PIZER E S，THUPARI J，HAN W F，et al. Malonyl-coenzyme-A is a potential mediator of cytotoxicity induced by fatty-acid synthase inhibition in human breast cells and xenografts［J］. Cancer Res，2000，60(2):213 -218.

［5］ 唐迪紅，施小六，陳主初，等. HER-2/neu 基因表達與卵巢上皮性癌的預(yù)后［J］. 醫(yī)學(xué)臨床研究，2004，21(6):600 -602.

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