輸卵管阻塞動物實驗研究進(jìn)展

摘要：輸卵管阻塞的動物實驗主要研究動物模型的造模方法。輸卵管阻塞的病因病機(jī)做了簡單的介紹。除研究造模方法外， 對動物模型開展了評價。輸卵管阻塞動物實驗的研究現(xiàn)狀及方向做了概述。

關(guān)鍵詞：輸卵管阻塞；動物實驗；綜述

輸卵管阻塞（Fallopian Tube Obstruction）是由于輸卵管或盆腔腹膜炎癥所致。當(dāng)輸卵管由于淋球菌、結(jié)核菌、衣原體、支原體感染或其它細(xì)菌感染，使輸卵管發(fā)炎時，可破壞輸卵管內(nèi)膜上皮組織，使輸卵管閉塞，炎癥可以使輸卵管粘膜破壞而形成瘢痕，引起管腔狹窄或阻塞。精子與卵子無法在通道相遇，引起不孕。輸卵管阻塞性不孕癥是臨床常見病，據(jù)統(tǒng)計，因輸卵管阻塞所致的不孕癥約占整個不孕癥人群的 30%～40% 。對于輸卵管性阻塞性不孕癥， 古代醫(yī)籍中尚無明確的闡述，其癥狀可散見于\"無子\"、\"斷緒\"，\"帶下\"、\"癥瘕\"、\"小腹痛\"、\"月經(jīng)不調(diào)\"等篇章中。

1 病因病理

1.1西醫(yī)病因病理

1.1.1病因 淋球菌主要侵犯粘膜，且以泌尿生殖系統(tǒng)粘膜為主，有研究指出，輸卵管粘膜為淋球菌的高度特異性受體[2]。一旦感染，將會對輸卵管粘膜造成嚴(yán)重?fù)p傷。國內(nèi)學(xué)者對大白兔感染解脈支原體后的輸卵管進(jìn)行病理分析，發(fā)現(xiàn)輸卵管粘膜層上皮細(xì)胞出現(xiàn)輕度腫脹，粘膜下層炎性細(xì)胞浸潤電鏡下可見支原體粘附于輸卵管粘膜上皮細(xì)胞上，同時，輸卵管表面的纖毛出現(xiàn)粘連、倒?fàn)?，微絨毛稀少、甚至脫落，纖毛細(xì)胞核膜欠完整，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量大小不等的空泡。提示支原體到達(dá)輸卵管后可致輸卵管粘膜上皮的損傷[3] 。沙眼衣原體感染可導(dǎo)致輸卵管纖毛上皮損傷，且沙眼衣原體熱休克蛋白誘導(dǎo)人體產(chǎn)生抗體，引起遲法變態(tài)反應(yīng)纖毛上皮損傷，引起輸卵管粘連、阻塞和積水，發(fā)生不可逆性損害[4]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，輸卵管通液術(shù)、輸卵管通氣術(shù)、腹腔鏡探查術(shù)、宮腹腔鏡聯(lián)合術(shù)、選擇性子宮輸卵管造影術(shù)、輸卵管介入再通術(shù)及輔助生育術(shù)等多種現(xiàn)代技術(shù)運用于輸卵管阻塞性不孕癥的治療領(lǐng)域，針對輸卵管腔內(nèi)粘連梗阻的局部治療有了豐富的發(fā)展。

1.1.2病理改變 其病理變化以慢性間質(zhì)部輸卵管炎為主，此外，還有峽部結(jié)節(jié)性輸卵管炎、輸卵管積水、慢性輸卵管積膿等病理改變。感染后的輸卵管內(nèi)膜腫脹、間質(zhì)充血、水腫大量中性粒細(xì)胞滲出、彌漫性浸潤、粘膜上皮壞死脫落等病理變化，造成管腔粘連閉塞；因輸卵管傘端粘連，管腔滲出物排出障礙，儲留于內(nèi)而形成輸卵管積水或積膿；或因結(jié)核導(dǎo)致輸卵管粘膜潰瘍、干酪樣壞死癱、痕組織。

1.2 中醫(yī)病因病機(jī) 中醫(yī)認(rèn)為\"任主胞胎\"，\"任脈通，太沖脈盛，月事以時下，故有子\"。陳修園在《女科要旨·種子篇》指出：\"婦人無子，皆經(jīng)水不調(diào)，經(jīng)水所以不調(diào)者，皆由內(nèi)有七情之傷，外有六淫之感，或氣血偏勝，陰陽相乘所致。\"腎氣不足，痰濕內(nèi)生，濕熱邪毒內(nèi)侵，情志失調(diào)，均可致沖任失調(diào)，氣機(jī)不利，而致癖血內(nèi)停，癖濕互結(jié)，痹阻胞宮，兩精相隔而無子。中醫(yī)認(rèn)為，瘀積是導(dǎo)致本病的主要原因。輸卵管阻塞不孕癥的病因病機(jī)為外邪內(nèi)傷導(dǎo)致痰濁、瘀血等病理產(chǎn)物出現(xiàn)，并做為新的致病因素，互相膠結(jié)，相兼為病，癖阻胞脈胞絡(luò)導(dǎo)致不孕。清代陳士鐸在《石室秘錄》中提到：\"任督之間，倘有疝瘕之證， 則精不能施， 因外有所障也\"?！陡登嘀髋啤しN子》也說：\"窟痕礙胞胎而外障，則胞胎必縮于廟癮之內(nèi)，往往經(jīng)施而不能受。\"而輸卵管炎性不孕患者多有輸卵管的扭曲或與其它組織粘連形成炎性包塊，癥狀與中醫(yī)所指癥瘕相符。而癥瘕的形成，多因氣滯、血瘀、痰濕所致，各種內(nèi)外因素導(dǎo)致氣血運行不暢，氣滯血癖，積于胞中，或令胞脈阻滯，則難以攝精成孕，故以活血化瘀、疏通胞脈為治療大法。說明中醫(yī)理論已經(jīng)認(rèn)識到生殖系統(tǒng)管道發(fā)生病理性阻塞， 可致受精障礙。

2 動物模型及評價

以苯酚膠漿劑[5]為代表，衛(wèi)昊等[6]認(rèn)為，苯酚膠漿造模的病理變化更貼近中醫(yī)\"血瘀\"證的診斷標(biāo)準(zhǔn)，其模型復(fù)制方法更符合在中醫(yī)理論指導(dǎo)下研究中藥復(fù)方的思路。造模方法是向大鼠卵巢方向注入20%苯酚0.04ml剔除子宮有炎癥和注藥有阻力的大鼠，分層關(guān)閉腹腔。吳高媛[7]用0.2mol/L 鹽酸宮腔注射制作大鼠子宮內(nèi)膜炎模型及慢性輸卵管炎模型。溶血性鏈球菌。李祥云等[8]用β溶血性鏈球菌制作兔輸卵管阻塞模型。趙廣興等[9]采用\"混合菌接種法\"（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌，按 2：1：1用無菌水稀釋，濃度為30×108/ml混合菌），造模組大鼠因急性感染死亡5只，而正常組術(shù)后無1只死亡。

綜上所述， 輸卵管阻塞動物模型的制備：應(yīng)根據(jù)不同的研究目的選擇合適的動物模型， 目前還沒有發(fā)現(xiàn)結(jié)合中醫(yī)的病因和辨證分型來制作輸卵管阻塞的動物模型，有待進(jìn)一步努力制作此種動物模型，以實現(xiàn)辨病與辨證相結(jié)合。

3 動物實驗研究現(xiàn)狀及方向

3.1 細(xì)胞因子

3.1.1腫瘤壞死因子（TNF-a）參與輸卵管炎癥反應(yīng) Manimtim等[10]發(fā)現(xiàn)，人TNF-a以劑量依賴方式損傷輸卵管粘膜細(xì)胞，阻斷TNF-a的產(chǎn)生可減輕輸卵管粘膜細(xì)胞的損傷程度，因而提出輸卵管炎中的輸卵管損傷部分由TNF-a介導(dǎo)。其作用機(jī)制可能為TNF-a的細(xì)胞毒性作用及誘導(dǎo)炎性細(xì)胞釋放毒性物質(zhì)的作用，從而刺激成纖維細(xì)胞增生，促進(jìn)膠原酶釋放等作用參與組織損傷、炎癥纖維增生過程，造成輸卵管狹窄、阻塞等。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)TNF-a與Ct、Uu感染所致的輸卵管傷有關(guān)。Uu感染可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞產(chǎn)生TNF-a， TNF-a升高與輸卵管組織損傷有關(guān)。而Ct感染時輸卵管上皮細(xì)胞首先釋放TNF-a，再激活局部單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生更多的TNF-a。Jendro MC等[11]研究表明被衣原體感染的巨噬細(xì)胞可以通過細(xì)胞間接觸或者體液因子來誘導(dǎo)T細(xì)胞的凋亡，從而逃逸T細(xì)胞的殺傷作用，有利于沙眼衣原體在細(xì)胞內(nèi)生存，建立持續(xù)性感染，TNF-a產(chǎn)生增多，對輸卵管造成損傷更嚴(yán)重。

3.1.2白細(xì)胞介素-2（IL-2） IL-2是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)及炎癥調(diào)控的重要細(xì)胞因子，IL-2亦稱T細(xì)胞生長因子（T cell growth factor）是促使T細(xì)胞從G1期轉(zhuǎn)至S期的關(guān)鍵性因子，主要由CD4及Th細(xì)胞產(chǎn)生，CD8 T細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞亦可產(chǎn)生IL-2。靜止的Th細(xì)胞在識別APC提高的抗原后，成為誘導(dǎo)性T細(xì)胞，繼之活化，成為效應(yīng)性Th細(xì)胞，并分泌一系列細(xì)胞因子，包括IL-2。IL-2是T細(xì)胞最重要的生長因子，可促使已激活的T細(xì)胞進(jìn)一步增殖分化，促使T細(xì)胞分泌B細(xì)胞生長因子和分化因子。作為T淋巴細(xì)胞生長因子的白細(xì)胞介素2（IL-2）與細(xì)胞表面的高親和力受體IL-2Ra（Kd=10-1lmol/L）結(jié)合，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的增殖與分化[12]，提高T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞及淋巴因子激活殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒活性，促進(jìn)干擾素的分泌，還可誘導(dǎo)B細(xì)胞的增殖與分化[13]，從而提高機(jī)體的免疫功能[14]。因此，IL-2在免疫調(diào)節(jié)方面具有重要意義。

3.1.3 白細(xì)胞介素-6（IL-6） Schols等[15]發(fā)現(xiàn)IL-6參與全身性炎癥反應(yīng)，Ulich等[16]研究認(rèn)為IL-6可發(fā)揮一定的抗炎作用。為抑制炎癥的發(fā)展，局部免疫系統(tǒng)可能使單核巨噬細(xì)胞合成細(xì)胞因子能力加強(qiáng)，同樣有可能使活化的單核巨噬細(xì)胞增加，刺激肉芽纖維組織的生長。在正常情況下，它可導(dǎo)致多克隆B細(xì)胞的增殖活化產(chǎn)生免疫球蛋白，誘導(dǎo)T細(xì)胞的合成及表達(dá)IL-2和IL-2R，以維持穩(wěn)定的免疫功能。而高濃度的IL-6則可明顯抑制T淋巴細(xì)胞IL-2和IL-2R的合成[17]。在創(chuàng)傷及感染時，IL-6的水平明顯升高，可與其它炎性細(xì)胞因子如TNF-a一起誘發(fā)全身性炎癥反應(yīng)性綜合征（SIRS），與患者的病死率有明顯關(guān)系[17，18]。Kassem等[19]也認(rèn)為，IL-6與其受體系統(tǒng)結(jié)合可促使分化成熟的B細(xì)胞分泌抗體，促進(jìn)TC、TD細(xì)胞增殖分化等生物學(xué)效應(yīng)，過量IL-6的產(chǎn)生，會導(dǎo)致過于劇烈的免疫反應(yīng)，對機(jī)體造成傷害。有研究提示[17]，IL-6可能參與慢性炎癥自身發(fā)展的病理生理，最終形成輸卵管等局部組織粘連、促進(jìn)肉芽纖維組織的生長。

3.2細(xì)胞凋亡 Bcl-2是調(diào)節(jié)凋亡基因家族的基本成員，這一家族成員還包括bcl-x、bax、bad、bak、bag-1、mcl-l和AT等等。Bcl-2基因產(chǎn)物在人體細(xì)胞中的表達(dá)量與細(xì)胞壽命長短有關(guān)。Bcl-2對正常細(xì)胞的生理作用尚不十分清楚，可能在保護(hù)各種細(xì)胞免遭凋亡方面具有調(diào)節(jié)作用，故被稱為\"凋亡抑制基因\"。近年來對成人和胎兒非造血組織Bcl-2表達(dá)的研究提示：它可能與細(xì)胞發(fā)育、成熟、分化及形態(tài)發(fā)生有關(guān)。Bcl-2保護(hù)效應(yīng)主要體現(xiàn)在線粒體攝入鈣的增加和減少線粒體內(nèi)鈣對呼吸鏈的損害，推測可能阻斷了線粒體膜轉(zhuǎn)運孔道。盡管bcl-2有抗凋亡的作用，但這個凋亡調(diào)節(jié)蛋白的具體作用是復(fù)雜的。有許多學(xué)者對Bcl-2基因編碼的蛋白調(diào)節(jié)凋亡的機(jī)制進(jìn)行了探討。Bcl-2是一個完整的膜蛋白，主要位于線粒體外膜上。細(xì)胞色素C正常存在于線粒體內(nèi)膜上，對于凋亡程序的誘發(fā)啟動是必不可少的。細(xì)胞色素C從線粒體釋放到胞質(zhì)內(nèi)影響半膚氨酸蛋白酶家族，半膚氨酸蛋白酶家族對于凋亡啟動有著重要的作用。凋亡細(xì)胞的線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C減少而胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C水平則升高。Bcl-2的過分表達(dá)可以阻止細(xì)胞色素C從線粒體內(nèi)外流，提示Bcl-2阻止凋亡的機(jī)制可能為阻止細(xì)胞色素C從線粒體釋放所啟動的凋亡過程。目前認(rèn)為Bcl-2蛋白能夠直接抗自由基氧化，維持鈣穩(wěn)態(tài)、阻止線粒體釋放細(xì)胞色素C，抑制凋亡蛋白酶的激活。

綜上所述，對輸卵管阻塞需作系統(tǒng)研究， 應(yīng)從微循環(huán)、血液流變學(xué)、微生物學(xué)等多方面研究而不單單是免疫系統(tǒng)。將輸卵管阻塞的實驗研究與臨床研究并舉， 應(yīng)當(dāng)是現(xiàn)代中醫(yī)對輸卵管阻塞研究的主要內(nèi)容之一。

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編輯/許言