PCR熒光定量檢測(cè)HBV—DNA與其血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)的對(duì)比分析

乙型肝炎病毒HBV-DNA定量檢測(cè)已越來(lái)越受到臨床的重視，我們采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）雜交定量檢測(cè)試劑測(cè)定乙型肝炎（乙肝）患者血清HBV-DNA定量，并且對(duì)檢測(cè)試劑作初步評(píng)價(jià)和臨床應(yīng)用觀察。

1 資料與方法

1.1血清 受檢血清來(lái)自于門診和病房患者的216份血清樣品。

1.2儀器 DNA擴(kuò)增儀為Bio-Red擴(kuò)增儀；熒光檢測(cè)用FX990型熒光檢測(cè)儀；酶標(biāo)儀型號(hào)為Elx800。

1.3試劑 PCR熒光定量檢測(cè)HBV-DNA試劑盒購(gòu)自上?？迫A生物工程股份有限公司；HBV血清標(biāo)志物ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海榮生生物技術(shù)有限公司。

1.4檢測(cè)方法 所有操作均按試劑盒使用說(shuō)明書進(jìn)行，由專業(yè)技術(shù)人員操作，每次檢測(cè)均有購(gòu)自衛(wèi)生部臨檢中心的質(zhì)控血清。

2 結(jié)果（見表1）

3 討論

在HBV-PCR雜交酶聯(lián)定量檢測(cè)中，采用dUTP-UNG防污染措施和探針雜交技術(shù)，保證了檢測(cè)的特異性。從檢測(cè)結(jié)果可以看出\"大三陽(yáng)\"HBV-DNA陽(yáng)性率為98.3%，DNA含量也很高（3.66×106），與傳統(tǒng)認(rèn)為此種血清的傳染性較高是相符的。在HBsAg（+）、HBeAg（+）、抗HBe（-）血清中，其DNA陽(yáng)性率為100%，DNA含量最高（1.46×107）。在\"小三陽(yáng)\"中HBV-DNA陽(yáng)性率為25%，病毒含量為5.92×104，表明抗HBe出現(xiàn)后病毒已基本停止復(fù)制。在3個(gè)抗體陽(yáng)性血清和全陰性血清標(biāo)本中也檢測(cè)出DNA病毒呈陽(yáng)性，從其DNA含量較低來(lái)看，可能是低水平的HBV感染或感染的最早期，說(shuō)明PCR熒光定量檢測(cè)技術(shù)的高度敏感性和在HBV檢測(cè)中的必要性。

目前，不少臨床大夫及患者反映，定量PCR檢測(cè)結(jié)果與患者血清學(xué)標(biāo)志物結(jié)果存在不相符合的問(wèn)題，其中一個(gè)原因是對(duì)檢測(cè)指標(biāo)如何分析的問(wèn)題，因?yàn)镻CR檢測(cè)的是病毒核酸水平，而血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)的是病毒蛋白，二者不在一個(gè)水平上，也就是說(shuō)二者測(cè)定的不是同一個(gè)物體，理論上允許有差別。如大三陽(yáng)患者可能出現(xiàn)PCR陰性，如何對(duì)待抗病毒治療，必須綜合分析，動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果，不能只依靠一個(gè)指標(biāo)來(lái)診斷。

當(dāng)然對(duì)試驗(yàn)本身必須做到準(zhǔn)確無(wú)誤，必要時(shí)重復(fù)多次或?qū)Σ煌瑥S家的試劑進(jìn)行對(duì)比，盡量避免假陽(yáng)性或假陰性。編輯/劉小燕