直接免疫熒光法同時(shí)檢測兒童多種呼吸道病毒抗原的臨床應(yīng)用

摘要：目的 分析兒童多種呼吸道病毒抗原采用直接免疫熒光法同時(shí)檢測的臨床應(yīng)用效果。方法 針對我所2011年2月～2013年接待的1000例呼吸道感染患兒作為研究對象，將他們呼吸道分泌物中的病毒抗原采用直接免疫熒光法同時(shí)檢測，主要包括七種病毒抗原，即RSV（呼吸道合胞病毒）、FB（流感病毒B型）、FA（流感病毒A型）、PIV1（副流感病毒1型）、PIV2（副流感病毒2型）、PIV3（副流感病毒3型）、ADV（腺病毒），統(tǒng)計(jì)分析相關(guān)情況。結(jié)果 1000例呼吸道感染患兒中，檢出101例病毒感染患兒，占10.10%。其中，最多的病毒抗原為RSV共計(jì)58例占57.43%，其次為混合型，共15例占14.85%，再次為ADV，共8例占7.92%；此外，隨著年齡增長，呼吸道病毒感染率呈現(xiàn)下降趨勢，而兒童呼吸道感染在冬春兩季發(fā)生率較高，在本次研究中顯示明顯多于夏秋兩季。結(jié)論 兒童多種呼吸道病毒抗原采用直接免疫熒光法同時(shí)檢測效果比較明顯，該檢測方法有著高效、快速、經(jīng)濟(jì)、簡便及經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢，值得臨床借鑒。

關(guān)鍵詞：兒童；呼吸道感染；病毒抗原；直接免疫熒光法；同時(shí)檢測；臨床應(yīng)用

就這幾年我國兒科臨床研究發(fā)現(xiàn)，呼吸道感染屬于兒童感染性疾病中最為常見的一種，并且已經(jīng)表明大約有95%左右的急性上呼吸道感染與大部分下呼吸道感染的發(fā)生是因?yàn)榧?xì)菌以外的病原體所致，其中最為多見的當(dāng)屬病毒感染[1]?？偟膩碚f，病毒所致的兒童呼吸道感染會(huì)因?yàn)槟挲g、季節(jié)及病原類型的不同而存在差異，雖然這些年抗生素廣泛應(yīng)用，呼吸道細(xì)菌感染呈現(xiàn)下降趨勢，但是呼吸道病毒感染卻與日俱增[2]。雖然當(dāng)前檢測這方面的方式很多，不過要么存在不足，要么比較復(fù)雜且昂貴，為了進(jìn)一步分析該檢測方法同時(shí)檢測兒童多種呼吸道病毒抗原的臨床效果，我所展開了相關(guān)研究，現(xiàn)將結(jié)果作如下報(bào)告。

1資料與方法

1.1一般資料 我所2011年2月～2013年接診的1000例呼吸道感染患兒，全部經(jīng)臨床確診，其中男患兒573例、女患兒427例；年齡5個(gè)月～11歲，平均為（5.6±2.9）歲。分別采集患兒的鼻咽部分泌物進(jìn)行檢測，其中量為1～2ml，檢測在2h完成。

1.2方法 本次研究采用的儀器為BX51型熒光顯微鏡，而試劑則為呼吸道病毒診斷試劑盒，全部患兒的分泌物皆采用直接免疫熒光法檢測，具體操作如下：①標(biāo)本采集與運(yùn)送：從鼻腔處將采樣導(dǎo)管插入7～8cm，以便其達(dá)到咽部下，然后采用誘導(dǎo)吸取的方式，收集患兒分泌物1～2ml，并放置在無菌瓶中，應(yīng)注意減少大量唾液的混入而影響檢出率；送檢的人員必須迅速與謹(jǐn)慎，快速達(dá)到檢測地點(diǎn)并及時(shí)檢測可以減少細(xì)胞的破裂與死亡，進(jìn)而影響檢測結(jié)果（造成假陰性）。②細(xì)胞涂片制備：打勻樣本（鼻咽處的分泌物）后，將其移到尖底離心管中，并以1500r/min進(jìn)行離心處理，時(shí)間為5min，然后將其上清液去除后留下沉淀，利用PBS進(jìn)行沉淀洗滌，次數(shù)以洗滌徹底為宜，盡量減少黏絲或黏液造成非特異性熒光而影響正常檢測[3]；在0.5～1ml的PBS溶液中將沉淀溶解，并吹打成細(xì)胞懸液，然后在玻片上點(diǎn)七個(gè)樣（每孔為25μl），經(jīng)室溫風(fēng)干后采用冷丙酮加以固定。③直接免疫熒光法檢測：將前述制備好的細(xì)胞涂片和病原體對照玻片一起，同時(shí)采用直接免疫熒光法進(jìn)行檢測。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本次研究相關(guān)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS18.0處理，計(jì)數(shù)資料用%表示，行χ2檢驗(yàn)，以P<0.05差異為統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義的標(biāo)準(zhǔn)。

2結(jié)果

2.1病毒感染情況 1000例呼吸道感染患兒中，檢出101例病毒感染患兒，百分比為10.10%。其中，最多的病毒抗原為RSV，總計(jì)58例，百分比為57.43%，其次為混合型，總計(jì)15例，百分比為14.85%，再次為ADV，總計(jì)8例，百分比為7.92%。見表1。

2.2不同年齡病毒感染檢出情況 隨著年齡增長，呼吸道病毒感染率呈現(xiàn)下降趨勢，其中0～1歲檢出率要明顯高于1～6歲與6～11歲，見表2。

2.3不同季節(jié)感染情況 兒童感染呼吸道病毒在不同季節(jié)情況有所不同，其中冬春兩季發(fā)生率要明顯高于夏秋兩季，差異性顯著（P<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

3討論

這些年相關(guān)臨床研究顯示大部分兒童呼吸道感染發(fā)病是由于多種病毒所致，而兒童急性呼吸道感染引發(fā)的病毒主要是呼吸道合胞病毒、流感病毒B型、流感病毒A型、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型、腺病毒等。臨床做好早期診斷，能為臨床治療提供依據(jù)與參考，有著很高的臨床價(jià)值。

雖然檢測病毒感染的臨床方法很多，不過都有一定的局限性，比如說病毒分離培養(yǎng)，其是傳統(tǒng)檢測的\"金標(biāo)準(zhǔn)\"[4]，但是其費(fèi)時(shí)與耗力，并且結(jié)果很難為臨床提供指導(dǎo)；再比如病毒特異性抗體檢測，這是檢測病毒感染的一個(gè)重要指標(biāo)，但是特異性IgG陽性一般僅能表明存有相應(yīng)病毒感染，而不能用在早期感染的判斷與療效檢測中，同時(shí)IgM類抗體也是感染早期病毒活化產(chǎn)生，不過嬰幼兒可能因?yàn)槊庖咻^弱等因素出現(xiàn)假陰性，從而干擾檢測結(jié)果[5]。在眾多檢測方法中，在20多年前興起的免疫熒光法卻有著獨(dú)特的優(yōu)勢，逐漸被廣泛使用。由于病毒性肺炎診斷最好從肺活檢組織中檢測出病毒的標(biāo)志，但是這類樣本的采集十分困難，故而免疫熒光法直接以呼吸道分泌物脫落細(xì)胞為樣本進(jìn)行病毒感染檢測，其在本次研究中針對七種病毒同時(shí)檢測，取得了比較良好的效果。

本次研究采用直接免疫熒光法同時(shí)檢測兒童多種呼吸道病毒抗原，其結(jié)果顯示1000例呼吸道感染患兒中，檢出101例病毒感染患兒，占10.10%。其中，最多的病毒抗原為RSV共計(jì)58例占57.43%，其次為混合型，共15例占14.85%，再次為ADV，共8例占7.92%；兒童呼吸道感染在冬春兩季發(fā)生率較高，在本次研究中顯示明顯多于夏秋兩季?？偟膩碚f，早期做好病毒感染檢測與診斷，及時(shí)對癥處理，可以縮短病程及提高患兒生存質(zhì)量，而采用直接免疫熒光法檢測不失為一種高效、簡便、經(jīng)濟(jì)、快速及直觀的方式，值得臨床借鑒。

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