miR—185在卵巢癌組織中的表達及其臨床意義

摘要：目的 探討miR-185（Homo sapiens miR-185，miR-185）在卵巢癌組織中的表達及其臨床意義。方法 運用qRT-PCR檢測miR-185在卵巢癌及癌旁組織中的表達情況，分析其表達與卵巢癌臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間的關(guān)系。結(jié)果 qRT-PCR檢測顯示，在37例卵巢癌組織中miR-185的表達值為（0.57±0.06），與癌旁對照組（1.02±0.11）相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；miR-185在卵巢癌臨床Ⅲ/Ⅳ期、Ⅰ/Ⅱ期表達值分別為（0.22±0.02）、（0.74±0.09），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移miR-185表達值分別為（0.38±0.05）、（0.64±0.08），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的miR-185表達水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。miR-185的表達隨著卵巢癌臨床分期演進而降低。結(jié)論 miR-185與卵巢癌的發(fā)生、臨床進展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其可能成為卵巢癌治療、預(yù)后判斷的潛在生物學(xué)指標。

關(guān)鍵詞：miR-185；卵巢癌；生長與侵襲

miRNAs是一組長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA，其作為基因表達的一個重要調(diào)控因子，通過對靶基因的翻譯抑制和mRNA降解從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達。miRNA參與多種細胞生物學(xué)過程，包括細胞的分化、增殖、遷移、代謝、以及調(diào)亡。以前的研究已經(jīng)證實miRNA在腫瘤中的潛在作用，并指出miRNA的表達異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相明顯相關(guān)。miRNA通過調(diào)控腫瘤相關(guān)基因以及不同的通路在癌癥的發(fā)病機理中起重要作用[1-2]。

miR-185位于染色體22q11.21，是一個具有抑癌特性的miRNAs。研究報道m(xù)iR-185在很多癌癥中表達下調(diào)，包括前列腺癌、膠質(zhì)瘤、卵巢癌以及肺癌等[3-5]。這說明miR-185表達下調(diào)可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。本研究通過采用qRT-PCR研究檢測miR-185在卵巢癌組織中的表達，分析其表達與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間的關(guān)系，探討卵巢癌發(fā)病的分子機制和尋找更有效的治療方法提供實驗依據(jù)。

1資料與方法

1.1標本收集 標本均取自于本院2009年7月～2012年10月卵巢癌和癌旁正常組織標本46例，組織立即放于液氮保存。所有組織標本活檢后均經(jīng)病理學(xué)診斷確認。

1.2逆轉(zhuǎn)錄 常規(guī)Trizol試劑（Invitrogen公司）抽提組織總RNA。紫外分光光度計測定RNA純度和濃度。逆轉(zhuǎn)錄按轉(zhuǎn)錄miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（吉瑪生物公司）說明書進行。反應(yīng)體系：5×RT緩沖液4 μL、10 mmol/L dNTP 0.75 μL、25 mmol/L鎂離子3 μL、1 μmol/L miRNA特異性RT引物1.2 μL、40 U/μl RNA酶抑制劑 0.25 μL、200 U/μL MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶0.2 μL、RNA 1 μg，無酶水補至20 μL。反應(yīng)條件：16℃ 30 min，42℃ 30 min，再以85℃ 10 min。產(chǎn)物-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 qPCR檢測 采用Biorad公司的定量PCR儀 IQ5進行定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系（20 μL）：2×PCR緩沖液10 μL、RT產(chǎn)物1μl、5 μmol/L miRNA特異性PCR引物0.4 μL、5 U/μL Taq酶 0.2 μl、無酶水加至20 μL。反應(yīng)條件： 先95℃ 3 min，然后95℃ 12 s、62℃ 35 s，共40個循環(huán)。miR-185的相對表達量通過公式2-△Ct計算，其中， Ct=miR-185平均Ct值-U6平均Ct值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果以（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗。當(dāng)分析miR-185的表達水平與患者預(yù)后關(guān)系，采用Kaplan-Meier生存曲線分析。P<0.05被認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 miR-185在卵巢癌組織中的表達情況 提取37例卵巢癌組織以及相應(yīng)對照正常組織總RNA，運用qRT-PCR檢測miR-185正常正常組織和卵巢癌組織中的表達情況，在目的基因與內(nèi)參照基因擴增效率相同的情況下，測定循環(huán)閾值（Ct值），2-△Ct表示miR-185的相對表達量。結(jié)果顯示，與對照正常上皮組織相比，miR-185在卵巢癌組織表達普遍下調(diào)。卵巢癌組織中miR-185平均表達量明顯低于對照正常組織，分別為（0.22±0.02）、（0.74±0.09），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。

2.2 miR-185表達水平與卵巢癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系 miR-185在卵巢癌臨床Ⅲ/Ⅳ期、Ⅰ/Ⅱ期表達值分別為（0.22±0.02）、（0.74±0.09），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移miR-185表達值分別為（0.38±0.05）、（0.64±0.08），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的miR-185表達水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。miR-185的表達隨著卵巢癌臨床分期演進而降低。

3討論

卵巢癌在女性生殖腫瘤中的發(fā)病率居第6位，每年大約有230 000例新發(fā)病例[6]。卵巢癌的早期生存率很高，但是由于大多數(shù)患者就診時已是晚期，而且大部分患者對目前的化療案產(chǎn)生耐藥，所以化療藥物對卵巢癌患者的治療成功率很低[7]。每年約有140 000位患者死于卵巢癌，嚴重威脅著人民的生命健康[6]。

近來miRNAs成為分子生物學(xué)研究的焦點，研究表明很多miRNAs在腫瘤中表達異常并且特異性miRNA表達的改變在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。研究表明，在前列腺癌中，miR-185通過直接靶向AR抑制癌細胞的增殖，遷移，侵襲以及致瘤活性[3]。在膠質(zhì)瘤中，高表達miR-185可抑制癌細胞的侵襲，抑癌基因LRRC4表達的改變是導(dǎo)致miR-185表達失調(diào)的重要原因，且LRRC4和 miR-185低表達與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后差相關(guān)[4]。本文運用qRT-PCR首次檢測miR-185在卵巢癌組織中的表達情況，并分析其臨床意義。結(jié)果顯示與對照正常上皮組織相比，miR-185在卵巢癌組織表達明顯下調(diào)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；此外，miR-185隨著卵巢癌的臨床分期進展而表達降低，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌表達明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。

我們的結(jié)果顯示miR-185在卵巢癌與對照正常組織存在表達差異，具其表達水平與患者臨床進展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，這表明miR-185可能作為癌基因參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，并且可能成為卵巢癌診斷和預(yù)后判斷新一代腫瘤分子標志物及卵巢癌治療靶點。當(dāng)然日后仍需大量實驗進行驗證。

參考文獻：

[1]Tang H， Deng M， Tang Y， et al. miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression.Clin Cancer Res. 2013； 19（20）：5602-5612.

[2]Tang H， Kong Y， Guo J， et al. Diallyl disulfide suppresses proliferation and induces apoptosis in human gastric cancer through Wnt-1 signaling pathway by up-regulation of miR-200b and miR-22. Cancer Lett. 2013； 340（1）：72-81.

[3]Qu F， Cui X， Hong Y， et al. MicroRNA-185 suppresses proliferation， invasion， migration， and tumorigenicity of human prostate cancer cells through targeting androgen receptor. Mol Cell Biochem. 2013；377（1-2）：121-130.

[4]Tang H， Wang Z， Liu X， et al. LRRC4 inhibits glioma cell growth and invasion through a miR-185-dependent pathway. Curr Cancer Drug Targets. 2012；12（8）：1032-1042.

[5]Ak？akaya P， Ekelund S， Kolosenko I， et al. miR-185 and miR-133b deregulation is associated with overall survival and metastasis in colorectal cancer. Int J Oncol. 2011；39（2）：311-318.

[6]Wright JD， Shah M， Mathew L， et al. Fertility preservation in young women with epithelial ovarian cancer. Cancer. 2009；115（18）：4118-4126.

編輯/肖慧