Cripto—1在惡性卵巢上皮性腫瘤中的表達(dá)及意義

摘要：目的 分析惡性卵巢上皮性腫瘤 （Malignant ovarian epithelial tumors）組織中cripto-1的表達(dá)情況及其與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理特征之間的關(guān)系。方法 采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)50例的惡性卵巢上皮性腫瘤患者癌組織中的cripto-1表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征間的關(guān)系。結(jié)果 在50例標(biāo)本中， cripto-1在癌組織中的表達(dá)顯著高于正常卵巢組織（χ2=41.302，P<0.01）；cripto-1的高表達(dá)分別與分化程度、TNM分期顯著有關(guān)（P<0.01）。結(jié)論 cripto-1的高表達(dá)在惡性卵巢上皮性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

關(guān)鍵詞：cripto-1； 惡性卵巢上皮性腫瘤 ； 臨床病理特征

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，發(fā)病率是第三位，但死亡率卻是第一位 [1]，其轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特點(diǎn)，也是死亡的主要原因。近來(lái)，對(duì)卵巢惡性腫瘤早期診斷及治療的研究越來(lái)越多地注重在靶點(diǎn)問(wèn)題上，而靶向治療是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，尋找一個(gè)有效的靶點(diǎn)日益成為科研工作者的一個(gè)目標(biāo)，目前研究發(fā)現(xiàn)CR-1 在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)狀態(tài)，因此探討、研究其在惡性卵巢組織細(xì)胞中的表達(dá)及致癌機(jī)制，CR-1有望成為一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。CR-1的生物學(xué)作用很多，包括胚胎發(fā)育中原腸胚的形成和胚層發(fā)育，哺乳動(dòng)物乳腺發(fā)育和乳蛋白表達(dá)，血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成等[2]。此外，它還與腫瘤有極高的相關(guān)性，成體內(nèi)通常不表達(dá)，但卻過(guò)表達(dá)于75%～80%的乳腺癌[3]、結(jié)腸癌、肺癌以及50%～60%的卵巢癌、胃癌、胰腺癌及睪丸癌[4]。多項(xiàng)研究已表明從正常粘膜到癌前病變?cè)俚桨珻R-1基因的表達(dá)呈遞增趨勢(shì)，提示CR-1基因的存在可能代表著細(xì)胞生物學(xué)轉(zhuǎn)化的中間環(huán)節(jié)，CR-1陽(yáng)性提示組織學(xué)尚正常的組織細(xì)胞存在癌變的可能[5] 。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 病例資料 以 2006～2008年在江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院婦產(chǎn)科手術(shù)治療，術(shù)后病理切片證實(shí)為卵巢腫瘤的患者石蠟標(biāo)本為研究對(duì)象，分為三組①良性卵巢腫瘤20例（其中卵巢漿液性囊腺瘤12例，卵巢黏液性囊腺瘤8例）。②惡性卵巢上皮性腫瘤50例（其中卵巢漿液性囊腺癌36例，卵巢黏液性囊腺癌14例）。③對(duì)照組采用正常卵巢組織10例 （因子宮肌手術(shù)瘤切除的正常卵巢組織）。卵巢癌組織按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO2OOO年 ）臨床分期及病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：臨床分期分為早期 （I～I(xiàn)I期 ）22例，晚期（III～I(xiàn)V期）28例；組織學(xué)分級(jí)分為高分化20例，中、低分化30例；盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者23例，未轉(zhuǎn)移者27例。50例腫瘤患者年齡24～77歲，平均50.5歲。

1.2主要試劑 Cripto-1抗體，兔抗人單克隆抗體 ，濃縮液 ，親和純化抗體。

其它：粘片劑（多聚賴氨酸）、二甲苯、無(wú)水乙醇、蘇木精、雙氧水、蒸餾水、中性樹(shù)膠等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1.石蠟切片的制作 蠟塊修整后，用石蠟切片機(jī)連續(xù)切制成厚度為 4μm 石蠟切片 4 張。

2.2 HE 染色

2.3 免疫組化染色 采用免疫組化（二步法），按試劑盒提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。本實(shí)驗(yàn)采用己知陽(yáng)性的卵巢癌切片（試劑公司提供）作為陽(yáng)性對(duì)照；陰性對(duì)照組選用 0.01M PBS 緩沖液代替一抗，其余步驟不變，以除外假陽(yáng)性結(jié)果。

3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

用低倍鏡和高倍鏡觀察切片，判斷標(biāo)準(zhǔn)：采用半定量積分法，按著色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì)分：著色細(xì)胞﹤10%為 0 分；≥10%但≤40%為 1 分；﹥40%但﹤70%為 2 分；≥70%為 3 分。按著色強(qiáng)度計(jì)分：無(wú)著色為 0 分；淡黃色為 1 分；棕黃色為 2 分。將著色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì)分與著色強(qiáng)度計(jì)分相乘作為總計(jì)分。總計(jì)分為 0 分為陰性（-）；1～3 分為弱陽(yáng)性 （+）； 4 分以上為強(qiáng)陽(yáng)性 （++）。最后統(tǒng)計(jì)時(shí)以 （-）判定為陰性，（+）和（++）判定為陽(yáng)性。

4 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用 SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)行 χ2檢驗(yàn)和相關(guān)性分析用，以 P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01 為差異具有顯著性。

5 結(jié)果

5.1不同類型卵巢組織中 Cr-1的表達(dá)（見(jiàn)表1） Cr-1的表達(dá)：Cr-1陽(yáng)性表達(dá)均位于細(xì)胞漿，染色深度不等，為淡黃至棕黃色（見(jiàn)圖1～4）。在10例正常卵巢組織Cr-1不表達(dá)，在20例卵巢良性腫瘤中Cr-1的表達(dá)數(shù)為0例；在50例卵巢癌中Cr-1陽(yáng)性表達(dá)數(shù)為37例（74.0%）。Cr-1在卵巢癌組的表達(dá)率均高于正常組、良性腫瘤組，差異具有顯著性（P<0.01 ）。

5.2 卵巢癌中 Cr-1表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 （見(jiàn)表2） 在22例早期卵巢癌組織中，Cr-1陽(yáng)性表達(dá)數(shù)分別為12例（54.55%）；28例晚期卵巢癌組織中， Cr-1陽(yáng)性表達(dá)數(shù)分別為 25例（ 89.29%）。隨著臨床分期的增高，Cr-1陽(yáng)性表達(dá)率升高，Cr-1的表達(dá)與臨床分期差異具有顯著性 （P<0.01）。在30例中低分化卵巢癌中，Cr-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)數(shù)為26 例 （86.67%） ； 20例高分化卵巢癌 中 ，Cr-1 蛋白陽(yáng)性表達(dá)數(shù)為11例（ 55.00% ），提示分化越差， Cr-1的陽(yáng)性表達(dá)率增加，陽(yáng)性表達(dá)率差別具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05） 。在14例黏液性癌中Cr-1陽(yáng)性表達(dá)數(shù)為8例（57.14%）；36例漿液性癌陽(yáng)性表達(dá)數(shù)為25例（80.56%），Cr-1的表達(dá)與組織分型差異無(wú)顯著性（P>0.05）。在23例已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中，Cr-1的陽(yáng)性表達(dá)數(shù)為21例（91.30%）；27例未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中，Cr-1陽(yáng)性表達(dá)數(shù)為16例（59.26%）。隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，Cr-1的陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高，兩組間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

6 討論

Cripto-1基因有兩種表現(xiàn)形式，一種是由2kb mRNA編碼的原癌基因，包含6個(gè)外顯子。另一種是由2kb mRNA編碼的原癌基因，與其相比缺乏2個(gè)外顯子[6]。大量研究證實(shí)，CR-1 與腫瘤有極高的相關(guān)性，成體內(nèi)通常不表達(dá)，但卻過(guò)表達(dá)于75%～80%的乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌以及50%～60%的卵巢癌、胃癌、胰腺癌及睪丸癌。此外在在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變及乳腺導(dǎo)管原位癌等癌前病變中的表達(dá)水平亦顯著提高[8]。CR-1 蛋白內(nèi)部具有標(biāo)志性的 EGF-CFC 功能結(jié)構(gòu)域，可與細(xì)胞表面多種受體結(jié)合行使功能。它既可以作為一種分泌因子，也可作為細(xì)胞表面組分調(diào)節(jié)Nodal、Vg1、GDF1 與 Activin 受體的結(jié)合，也可作為輔助因子參與TGF-β家族成員的多個(gè)細(xì)胞信號(hào)通路的傳遞過(guò)程，還參與活化多條控制細(xì)胞增殖與凋亡能力的信號(hào)通路。此外，Cripto-1在結(jié)腸腺瘤、胃腸上皮化生及乳腺導(dǎo)管原位癌等癌前病變中的表達(dá)也高于正常組織。多項(xiàng)研究已表明，從正常組織到癌前病變?cè)俚桨?，Cripto-1的表達(dá)呈遞增趨勢(shì)，提示Cripto-1的存在可能是細(xì)胞生物學(xué)轉(zhuǎn)化的中間環(huán)節(jié)，Cripto-1陽(yáng)性提示組織學(xué)尚正常的組織細(xì)胞存在有癌變的可能性。越來(lái)越多的研究證據(jù)表明，Cripto-1是一個(gè)潛在的靶抗原，其相關(guān)基因的檢測(cè)有助于惡性腫瘤的早期診斷、評(píng)估預(yù)后和療效預(yù)測(cè)，靶向干預(yù)Cripto-1活性在惡性腫瘤生物治療中具有良好應(yīng)用前景。

本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)分析惡性卵巢上皮性腫瘤 （Malignant ovarian epithelial tumors）組織中cripto-1的表達(dá)情況及其與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理特征之間的關(guān)系[7]，發(fā)現(xiàn)了在惡性卵巢上皮性腫瘤中cripto-1的高表達(dá)情況與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)，顯示的cripto-1表達(dá)量與惡性卵巢上皮性腫瘤病理特征具有重要的關(guān)系，為卵巢癌的治療尋找新的靶點(diǎn)。

綜上所述，本研究結(jié)果提示，cripto-1的異常高表達(dá)可能參與了惡性卵巢上皮性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，這為進(jìn)一步的功能學(xué)研究和擴(kuò)大實(shí)驗(yàn)提供了線索。也為尋找到新的惡性卵巢上皮性腫瘤治療靶點(diǎn)提供了一種新的思路。

參考文獻(xiàn)：

[1]Jemal A. Cancer statistics，2010[J].CA Cancer J Clin，2010，60（5）：277-300.

[2]Park JE. Annexin A. Is a Potential Angiogenic Mediator[J].Biochem Biophys Res Commun，2005，337（4）：1283-1287.

[3]Beddington RS. Axis development and early asymmetry in mammals Cell[J].1999，22，96（2）：195-209.

[4]Strizzi L. Prognostic Factors Affecting the Outcome of Nasopharyngeal Carcinoma[J].Jpn J Clin Oncol，2003，33（10）：501-508.

[5]Liu Q. Role of micro RNA let-7 and effect to HMGA2 in esophageal.

[6]Bosch FX. E-cadherin is a selective and strongly dominant prognostic factor in squamous cell carcinoma：a comparison of E-cadherin with desmosomal components [J].Int J Cancer，2005，146（5）：779-790.

[7]徐嶸嶸.Cripto-1在子宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2010，08.

編輯/王敏