三種不同檢測方法對診斷結(jié)核病的比較

【摘要】目的將診斷結(jié)核病的蛋白芯片法與金標(biāo)法及抗酸染色法三種檢測方法進(jìn)行比較，以評價三種方法在臨床中的應(yīng)用價值。方法用蛋白芯片法、金標(biāo)法及抗酸染色法檢測125例確診結(jié)核病人、50例肺部其它疾病患者的血清標(biāo)本，并進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計分析。結(jié)果蛋白芯片法、金標(biāo)法及抗酸染色法檢出結(jié)核分枝桿菌的靈敏度為64%，72%及22.7%，前兩者比較無顯著性差異（P>0.05，但均高于抗酸染色法（P<0.05。三者的特異性分別為90%，76.7%及96.7%。結(jié)論蛋白芯片法檢測結(jié)核分枝桿菌，與金標(biāo)法及抗酸染色法比較，具有簡便、快速、敏感性較高和特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是臨床輔助診斷結(jié)核病的有效方法。

【關(guān)鍵詞】蛋白芯片；結(jié)核分枝桿菌；比較；診斷

doi：10.3969j.issn.1004-7484（x.2013.10.765文章編號：1004-7484（2013-10-6202-01

1資料與方法

1.1材料①標(biāo)本來源：125例確診結(jié)核病人血清由我院內(nèi)科肺結(jié)核確診病人提供，50例肺部其它疾病患者的血清來源于我院胸外科、內(nèi)科。②主要儀器和試劑：蛋白芯片閱讀儀、結(jié)核分枝桿菌蛋白芯片試劑盒均為（南京大淵生物技術(shù)公司提供；結(jié)核分枝桿菌免疫膠體金診斷試劑盒為（上海奧普生物醫(yī)藥有限公司提供；抗酸染色相關(guān)試劑，根據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第3版由實驗室自行配置。

1.2方法

1.2.2蛋白芯片法（PC按試劑說明書操作。

1.2.2金標(biāo)法（IGFA按試劑說明書操作。

1.2.3抗酸染色法（AFS參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析概率的比較采用X2檢驗。

2結(jié)果

2.1175例標(biāo)本三種檢測結(jié)果與臨床診斷的關(guān)系見表1。

3討論

為了便于結(jié)核病的臨床的檢測我們需要結(jié)核菌的特異性細(xì)胞壁進(jìn)行多糖抗原LAN和經(jīng)基因工程的NA進(jìn)行技術(shù)處理達(dá)到純化的目的，將38Ka及16Ka特異性抗原放在同一膜片上，在固相模上可以觀察到抗原抗體的快速的反應(yīng)，并且為了更好的進(jìn)行檢測需要在膜上把免疫金作為標(biāo)記。

LAN具有特異性抗原，由于LAN在分支桿菌細(xì)胞壁中的重要組成部分，具有較強(qiáng)的免疫力，具有檢測的靈敏度會增高，不只是結(jié)核桿菌才有，在其他的分支桿菌中也有LAN成分，但是其他分支桿菌的成分特異性很低。結(jié)核分枝桿菌38K抗原與16K抗原是結(jié)核分枝桿菌所特有的抗原，出現(xiàn)的診斷的特異性很高，也不與其他的非核分支桿菌出現(xiàn)交叉反應(yīng)。在診斷的125例患者中，由于一些結(jié)核病人血液中有抗原并且和相應(yīng)的抗體復(fù)合，導(dǎo)致游離的抗體降低，使檢測的靈敏度下降，所以50例患者會出現(xiàn)蛋白芯為陰性的檢測結(jié)果。如果之前設(shè)定好了疾病的檢測值時，那么就會出現(xiàn)陰性的反應(yīng)。此外還有4例患者出現(xiàn)陽性結(jié)果，導(dǎo)致出現(xiàn)陽性的原因可能是結(jié)合在進(jìn)行治療之后個別的抗體依然存在或者是有潛伏的結(jié)核受到了分枝桿菌的污染。

從上述的結(jié)果來看，結(jié)核分枝菌蛋白特異性可到90%，與國內(nèi)的報道相一致。

金標(biāo)法顯示的靈敏度和特異性分別為72%，76.7%，從上述的結(jié)果中我們發(fā)現(xiàn)，膠體金結(jié)核抗體假陰性和假陽性的問題。如果患者是出現(xiàn)了假陽性，那么很多人群也會感染上結(jié)核，則是由于體內(nèi)對結(jié)核反應(yīng)所強(qiáng)所致，出現(xiàn)假陰性與每個人的機(jī)體的反應(yīng)有關(guān)，由于臨床上每個患者所處的情況是不同的，因此免疫抑制因子和抗原抗體的復(fù)合物使得血清中的結(jié)核抗體有所不同，最終造成假陽性，此外金標(biāo)法采用的是結(jié)核分枝桿菌抗原外膜，有可能和其他的非結(jié)核分枝桿菌交叉反應(yīng)，針對這一情況，我們要結(jié)合患者的具體的癥狀，并且在對患者進(jìn)行膠體金結(jié)核抗體的檢查時還要迅速的做出臨床的診斷。

根據(jù)多年的結(jié)核病的檢查經(jīng)驗，我們通過對結(jié)核菌進(jìn)行抗菌染色簡單、快速。這種方法由于具備特異性高的特點(diǎn)，因此也是目前結(jié)核診斷最主要的方法，但是針對陽性率比較低和大部分的涂片陰性的問題還是不能高效的檢測出來。

在30例陽性標(biāo)本中我們發(fā)現(xiàn)2例檢測蛋白芯為陰性，這就證實了蛋白芯是很特異的，抗酸菌檢查方法檢查和蛋白芯檢查方法相比，蛋白芯檢查出現(xiàn)陽性的概率為50%顯然要高于抗酸菌，這就說明了這種檢測方法的高度的靈敏，因此在診斷不容易區(qū)別是結(jié)核病病上有很重要的臨床意義。

從表2可見，由于每個人體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌的種類、數(shù)量有所不同，這就導(dǎo)致了結(jié)核分枝桿菌在對不同的病人時檢測出來的結(jié)果也是不同的。

從而表現(xiàn)出不同的抗原譜所致。其中單一抗體陽性率是17.6%（22125，兩種抗體陽性率是35.2%（44125，三種抗體陽性率是11.2%（14、125，所有抗體陽性檢出率是64%（80、125。因此，針對結(jié)核多種抗原的蛋白芯片法在保證特異性的基礎(chǔ)上提高了檢測的靈敏度。

綜上所述，結(jié)合分枝桿菌在蛋白芯的檢查上值得臨床推廣，可以對結(jié)核病進(jìn)行輔助的治療，并且快速有效。金標(biāo)的檢測方法在對結(jié)合血清的臨界水平做了調(diào)整的基礎(chǔ)上，符合結(jié)核病體液檢查的規(guī)律，并且對特異性的蛋白有很高的免疫性對肺結(jié)核的有一定的檢查作用，雖然目前金標(biāo)法靈敏度不是很高，但是可以有效的將既往的感染和現(xiàn)癥感染區(qū)別出來值得一用。

抗酸染色法檢測結(jié)核桿菌的特異性高，但靈敏度很低，故一般用于臨床以確診病人的排菌監(jiān)測。

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