液相色譜法測定葡萄酒中的色素分析

【摘要】目的建立葡萄酒中日落黃與胭脂紅兩種色素的液相色譜測定新方法。方法將樣品中的乙醇除去，并通過水提與過濾后，采用島津公司的C18色譜柱將其分離。流動相為甲酸-乙酸銨，洗脫方式為梯度洗脫，流速設(shè)定為1.0mlmin，檢測器為紫外檢測器，柱溫為32℃，檢測波長為500nm。結(jié)果日落黃與胭脂紅在1.0-50.0ugml范圍內(nèi)其線性良好，線性相關(guān)系數(shù)均為0.9999，線性方程為日落黃：y=59.032x-8.6513，胭脂紅：y=44.733x-6.452。以SN=3作為信噪比可得，日落黃的檢出限為0.20mgkg，胭脂紅的檢出限為0.25mgkg。本文兩種色素的檢測RS分別為日落黃2.2%，胭脂紅1.5%，回收率為92.0%-98.8%，符合相關(guān)要求。結(jié)論采用該方法對葡萄酒中的色素進(jìn)行測定，具有靈敏度高、操作簡便、準(zhǔn)確性高、分離能力好等優(yōu)點，值得進(jìn)行推廣與應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】液相色譜法；葡萄酒；日落黃；胭脂紅

doi：10.3969j.issn.1004-7484（x.2013.10.758文章編號：1004-7484（2013-10-6195-01

日落黃與胭脂紅是人工合成的可食用色素，常被添加至各類飲品中以提高其色澤的鮮艷度與觀賞性。由于人工合成色素多用煤焦油作為原料制備而成，且制備工藝與水平參差不齊，導(dǎo)致其安全性普遍較差^[1]。人工合成色素中的苯環(huán)、蒽環(huán)等對于人體具有毒害作用，長期使用會嚴(yán)重影響消費者的健康，因此我國對于人工合成色素的用量有嚴(yán)格的限制。葡萄酒中日落黃與胭脂紅的使用較為常見，對于含乙醇的飲品中日落黃與胭脂紅的含量測定主要采用液相色譜法^[2]。本文通過液相色譜法對葡萄酒中的這兩種色素進(jìn)行測定，具備準(zhǔn)確、高效、靈敏、簡便等優(yōu)點，最終取得了滿意的結(jié)果。

1資料與方法

1.1儀器與試劑本文所用高效液相色譜儀為島津公司生產(chǎn)的LC-20AT系列高效液相色譜儀，BT224s電子天平（德國賽多利斯公司，NeXpower1000超純水儀（韓國公司，日落黃（中科院：GBW（E100003a，胭脂紅（中科院：GBW（E100004a，甲醇（中國天津市康科德公司為色譜純，乙酸銨（中國天津市科密歐公司為分析純，水為超純水。

1.2色譜條件與標(biāo)液的配制本文色譜柱為島津公司生產(chǎn)的C18柱（5um，150×4.6mm，流動相為甲醇-乙酸銨（0.02molL，流速為1.0mlmin，柱溫為32℃，檢測波長為509nm，洗脫方式如下：

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法為：準(zhǔn)確稱取日落黃與胭脂紅各0.1000g，采用超純水溶解，定容至100ml，獲得1.0mgml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。工作溶液為取上述標(biāo)液進(jìn)行稀釋，獲得1ugml、5ugml、10ugml、20ugml以及50ugml的工作液。

1.3樣品的前處理與測定準(zhǔn)確稱取樣品5.00g，置于50ml燒杯中加熱以除去乙醇，將其轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中定容，過0.45um水系濾膜后，常規(guī)注入進(jìn)樣瓶中準(zhǔn)備進(jìn)樣。根據(jù)保留時間定性，峰面積定量，定量方法采用外標(biāo)法。

2結(jié)果

2.1線性與檢出限通過對混標(biāo)工作液進(jìn)行測試可得，在1.00-50.0uml范圍內(nèi)，日落黃與胭脂紅的線性關(guān)系良好，日落黃回歸方程為y=59.032x-8.6513，線性相關(guān)系數(shù)為0.9999，胭脂紅的回歸方程為y=44.733x-6.452，線性相關(guān)系數(shù)為0.9999。以信噪比為SN=3計算檢出限可得，日落黃的檢出限為0.20mgkg，胭脂紅的檢出限為0.25mgkg。

2.2精密度與回收率取6份葡萄酒樣品，加入st1進(jìn)行上機檢測可得，6次進(jìn)樣結(jié)果的精密度分別為日落黃2.2%，胭脂紅1.5%，符合相關(guān)要求。選取高（st5、中（st3、低（st1三種濃度進(jìn)行加樣回收可得，回收率為92.0%-98.8%，見表2。

3討論

3.1前處理方法的選擇本文選用水作為提取溶劑，其原因在于日落黃與胭脂紅均為水溶性色素，因此采用水提取即可獲得較高回收率。有研究顯示采取聚酰胺吸附法進(jìn)行提取能夠獲得更好的回收率，且基質(zhì)干擾較小^[3]，但本文認(rèn)為葡萄酒中所含基質(zhì)較少，對于色譜柱的影響較小，因此采用一步提取法即可達(dá)到滿意的結(jié)果。

3.2色譜條件的優(yōu)化本文檢測的兩種色素：日落黃與胭脂紅均屬于水溶性色素，具有較強的極性，因此在選擇色譜柱時采用反相色譜柱，以達(dá)到較好的分離效果^[4]。在選擇流動相時，本文最初選擇了3對流動相：甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙酸銨，通過平行操作后，最終獲得甲醇-乙酸銨作為流動相的分離效果最佳。檢測波長最初設(shè)定為483nm，因為日落黃在481、483、486nm處均有最大吸收，但由于胭脂紅在509nm處的吸收較大，因此選擇509nm能夠完全滿足日落黃與胭脂紅均具有較大吸收。

3.3光譜優(yōu)化本文所采用的紫外檢測器理論上可以采集波長為190-700nm的光譜圖，對于色譜峰的定性具有可靠性，且能夠有效避免單純憑借保留時間對待測物質(zhì)進(jìn)行定性的不準(zhǔn)確性。本文選擇509nm的目的在于避開254nm以下波長，降低雜質(zhì)的干擾，使得待測物質(zhì)在低濃度的情況下仍能夠獲得良好匹配度。

4小結(jié)

本文認(rèn)為該方法采用一步提取法對樣品進(jìn)行前處理，能夠達(dá)到操作簡便、處理快速的優(yōu)點。利用梯度洗脫的方式能夠使得檢測方法靈敏度更高，受雜質(zhì)干擾更小。采用本法對葡萄酒中的色素進(jìn)行分析，能夠使色譜峰良好分離，結(jié)果準(zhǔn)確性高、可靠性佳、分析速度快。因此對于葡萄酒中的色素分析可以采用該方法，對于其他液體食品中人工合成色素的測定，該方法也具有一定的指導(dǎo)意義

參考文獻(xiàn)

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