HPLC法測(cè)定十維鐵咀嚼片中維生素A的含量

【摘要】目的建立以高效液相色譜法測(cè)定十維鐵咀嚼片中維生素A的含量的方法。方法iamonsilC18色譜柱，（150mm×4.6mm，5μm；流動(dòng)相為乙腈：甲醇：水（70：18：12；柱溫：30℃；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；進(jìn)樣量：20μl；并用維生素A醋酸酯對(duì)照品進(jìn)行定量對(duì)照。結(jié)果維生素A檢測(cè)濃度的線(xiàn)性范圍為300-700μg·mL-1（r=0.9998；平均回收率為99.10%（RS=0.74%。結(jié)論本方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；維生素A；含量測(cè)定

doi：10.3969j.issn.1004-7484（x.2013.10.756文章編號(hào)：1004-7484（2013-10-6193-01

十維鐵咀嚼片是用于4歲以上兒童、成人及老年人鐵元素及維生素的補(bǔ)充。制劑中含有多種水溶性維生素和脂溶性維生素。國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)^[1]收載了該品種。把維生素A和維生素E在同一個(gè)色譜條件下進(jìn)行了含量測(cè)定，基于本制劑成分復(fù)雜，不能完全有效的分離，本文采用HPLC法對(duì)十維鐵咀嚼片中維生素A進(jìn)行了單一研究，達(dá)到了與其他組成有效分離，提供了快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的測(cè)定方法。

1儀器與試藥

1.1儀器島津LC-10A高效液相色譜儀，島津LC-10A泵，SP-10A紫外檢測(cè)器；YL Clarity數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。

1.2試藥維生素A醋酸酯對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：1716002；十維鐵咀嚼片（每片含維生素A醋酸酯5mg，實(shí)驗(yàn)室自制；蛋白酶Alcalase（sigma公司批號(hào)：Lot#1001533V；甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：iamonsilC18（150mm×4.6mm，5μm；流動(dòng)相：乙腈：甲醇：水=70：18：12；柱溫：30℃；流速：1.0ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；進(jìn)樣量：20μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備避光操作。精密稱(chēng)取維生素A醋酸酯對(duì)照品約125mg，至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制備成5mg·min-1的一級(jí)儲(chǔ)備液。取1ml一級(jí)儲(chǔ)備液至10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。過(guò)膜。

2.2.2供試品溶液的制備避光操作。取樣品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約含維生素A醋酸酯5mg，至10ml量瓶中，加蛋白酶Alcalase3滴，加少量水使粉末剛潤(rùn)濕，放置5min，加5ml甲醇超聲溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過(guò)膜。色譜詳見(jiàn)圖1。

2.3線(xiàn)性關(guān)系考察分別精密量取稱(chēng)取“2.2.1”項(xiàng)下一級(jí)儲(chǔ)備溶液0.6、0.8、1、1.2、1.4mL，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（A為縱坐標(biāo)，濃度（C為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為A=9035C-177816（r=0.9998。結(jié)果表明，維生素A檢測(cè)濃度的線(xiàn)性范圍為300-700μg·ml-1。

2.4精密度試驗(yàn)取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積。結(jié)果，RS為0.68%。

2.5溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液分別于0、2、4、6、8、10h時(shí)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.12%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6回收率試驗(yàn)稱(chēng)取本品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法以供試品溶液濃度的80%、100%、120%分別配制3份溶液，共9份樣品液，按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算維生素A回收率，見(jiàn)表1。

99.100.743討論

本法在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，加入乙腈，增強(qiáng)洗脫能力，改善分離效果及峰形。經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，乙腈、甲醇和水的比例為70：18：12時(shí)，分離效果最佳。

由于該制劑選用微囊化的維生素A醋酸酯原料藥，直接用甲醇難以將其中的維生素A全部溶解出來(lái)，回收率及重現(xiàn)性均難以達(dá)到要求，因此在進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，需在配制過(guò)程中加入蛋白酶，破壞囊殼，再用甲醇將維生素A醋酸酯溶解出來(lái)，該方法符合含量測(cè)定的要求，能夠滿(mǎn)足制劑質(zhì)量控制的要求。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn).十維鐵咀嚼片WS1-（X-022-2006Z.