紅花注射液生物活性測定方法的篩選

【摘要】目的篩選紅花注射液生物活性測定的方法。方法選擇小鼠體內(nèi)血栓實驗、家兔體外抗血小板聚集實驗作為測定紅花注射液生物活性的方法，用4個不同廠家生產(chǎn)的紅花注射液進行試驗。結(jié)果小鼠體內(nèi)血栓實驗、家兔體外抗血小板聚集實驗測定紅花注射液生物活性時試驗設(shè)計較為合理、試驗操作簡便、試驗指標(biāo)明確、試驗靈敏度較高、試驗的可重復(fù)性較好。結(jié)論可以通過小鼠體內(nèi)血栓實驗、家兔體外抗血小板聚集實驗來測定紅花注射液生物活性。

【關(guān)鍵詞】紅花注射液；生物活性測定

doi：10.3969j.issn.1004-7484（x.2013.10.658文章編號：1004-7484（2013-10-6108-02

紅花注射液具有廣泛的藥材來源，制作工藝較為復(fù)雜，對其的質(zhì)量控制較為困難，紅花注射液具有較多的活性成分、廣泛的藥理作用，若想完全掌握紅花注射液的質(zhì)量和臨床療效，應(yīng)在測定其含量的基礎(chǔ)上再測定紅花注射液的生物活性^[1]。紅花注射液具有抗凝血、抑制血栓形成、明顯改善血液流變學(xué)等作用，主要用于冠心病、閉塞性腦血管疾病、心肌梗塞等疾病的臨床治療^[2]。本研究現(xiàn)選擇小鼠體內(nèi)血栓實驗、家兔體外抗血小板聚集實驗作為測定紅花注射液生物活性的方法，用4個不同廠家生產(chǎn)的紅花注射液進行試驗?，F(xiàn)具體報道如下。

1資料與方法

1.1儀器、試劑與實驗器材低速冷凍離心機；全自動生化儀；血小板聚集儀；垂體后葉素；丹參注射液；尼莫地平注射液；鹽酸川穹嗪注射液；膠原蛋白；鹽酸腎上腺素；二磷酸腺苷；枸櫞酸鈉；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒；乳酸脫氫酶試劑盒；肌酸激酶試劑盒；肌酸激酶同工酶試劑盒；4個廠家紅花注射液；SPF級昆明種小鼠，雄性，18-20g；SPF級大耳白兔，雄性，2.2kg。

1.2統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS18.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料比較用χ±s表示，計數(shù)資料采用X2檢驗，P<0.05，表示兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2試驗方法與結(jié)果

2.1小鼠體內(nèi)血栓實驗^[3]取成年健康SPF級昆明種小鼠，雄性，體重18-20g，共60只，按照隨機的方法將其隨機分為模型組、陽性藥組、4個廠家的紅花注射液組（A、B、C、四組，共6組，每組10只。其中模型組小鼠腹腔注射生理鹽水作為陰性對照，陽性藥組給予每只小鼠腹腔注射0.1334mgkg劑量的鹽酸川芎嗪，4個廠家的紅花注射液組給予每只小鼠腹腔注射6.67mLkg劑量的紅花注射液，所有小鼠連續(xù)給藥3天，最后一次給藥30min后，將血栓誘導(dǎo)劑經(jīng)尾靜脈注射，構(gòu)造小鼠血栓模型，造模后觀察并記錄小鼠未偏癱的個數(shù)以及偏癱在15min內(nèi)恢復(fù)的個數(shù)。造模后小鼠的保護率=（小鼠未偏癱個數(shù)+偏癱在15min內(nèi)恢復(fù)的個數(shù)小鼠總個數(shù)×100%。研究結(jié)果顯示：腹腔注射鹽酸川芎嗪的陽性藥組小鼠未偏癱個數(shù)和偏癱在15min內(nèi)恢復(fù)的個數(shù)比模型組多，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義；4個廠家的紅花注射液組（A、B、C、四組小鼠未偏癱個數(shù)和偏癱在15min內(nèi)恢復(fù)的個數(shù)比模型組多，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義，由此可見，紅花注射液對急性血栓具有保護作用，具體分析，見表1。

2.2家兔體外抗血小板聚集試驗^[4]SPF級大耳白兔，雄性，2.2kg。腹腔注射5mLkg20%烏拉坦進行麻醉，頸總動脈插管取血后加入3.8%枸櫞酸鈉抗凝、以1000rmin轉(zhuǎn)速，離心10min后取上層清液，余下部分再以3000rmin轉(zhuǎn)速，再次離心10min。實驗分為模型組、陽性藥組、4個廠家的紅花注射液組（A、B、C、四組進行測定，其中模型組給予生理鹽水，陽性藥組給予鹽酸川芎嗪，4個廠家的紅花注射液組給予6.67mLkg劑量的紅花注射液。采用血小板聚集儀，將200μLPRP及20μL待測溶液（將生理鹽水、鹽酸川芎嗪、紅花注射液依次加入測試管中，加入25μL二磷酸腺苷誘導(dǎo)劑，構(gòu)造家兔體外抗血小板聚集試驗?zāi)Ｐ?，記錄血小板聚集曲線以及血小板最大聚集率。結(jié)果顯示：鹽酸川芎嗪的陽性藥組血小板最大聚集率較模型組明顯減少，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義；4個廠家的紅花注射液組（A、B、C、四組血小板最大聚集率較模型組明顯減少，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

3討論

膠原蛋白和腎上腺素可以誘導(dǎo)血小板發(fā)生聚集，通過小鼠尾靜脈注射膠原蛋白可誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)形成血栓，導(dǎo)致偏癱甚至死亡^[5]，本研究4個廠家的紅花注射液對膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)血栓的小鼠未偏癱個數(shù)和偏癱在15min內(nèi)恢復(fù)的個數(shù)均比模型組多，說明紅花注射液對形成血栓的小鼠具有保護作用。凝血因子和血細(xì)胞參與離體血液的凝聚過程，通過抑制血小板異常聚集，可有效地防治血栓栓塞導(dǎo)致的心腦血管疾病^[6]。本研究4個廠家的紅花注射液血小板最大聚集率較模型組明顯減少，說明紅花注射液對血小板聚集有明顯的抑制作用。

本研究選用小鼠體內(nèi)血栓形成實驗?zāi)Ｐ鸵约凹彝皿w外抗血小板凝聚實驗?zāi)Ｐ蛢煞N活血化瘀類藥物的藥效學(xué)實驗方法，測定4個不同廠家生產(chǎn)的紅花注射液的生物活性。試驗設(shè)計較為合理、試驗操作簡便、試驗指標(biāo)明確、試驗靈敏度較高、試驗的可重復(fù)性較好。因此我們可以通過小鼠體內(nèi)血栓實驗、家兔體外抗血小板聚集實驗來測定紅花注射液生物活性。

參考文獻

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