復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索血藥濃度測(cè)定及藥代動(dòng)力學(xué)研究

【摘要】目的建立測(cè)定血漿中復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索的HPLC法。方法色譜柱為Inertsil OS-2柱（150mm×4.6mm，5um；流動(dòng)相為甲醇-0.01molL醋酸銨溶液（用醋酸溶液將其pH調(diào)至4（8：92，VV；檢測(cè)波長(zhǎng)為244nm；檢測(cè)溫度為25℃；流速為1.0mlmin，進(jìn)樣體積為20μl。結(jié)果阿莫西林的質(zhì)量濃度在12.5-200μgmL、鹽酸氨溴索的質(zhì)量濃度在0.75-12μgmL的范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好；日內(nèi)、日間精密度均符合要求；阿莫西林的平均回收率為100.3%，RS為1.06%；鹽酸氨溴索的平均回收率為100.5%，RS為0.75%。結(jié)論該種可作為復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索在人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究提供參考。

【關(guān)鍵詞】復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索；藥代動(dòng)力學(xué)；高效液相色譜法

doi：10.3969j.issn.1004-7484（x.2013.10.567文章編號(hào)：1004-7484（2013-10-6036-02

1資料與方法

1.1藥品與試劑復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索膠囊（廣州市藥谷生物醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：20120209，規(guī)格：阿莫西林500mg鹽酸氨溴索30mg；阿莫西林和鹽酸氨溴索對(duì)照品均來(lái)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；鹽酸氨溴索原料由珠海聯(lián)邦制藥股份有限公司提供，含量為100.1%；阿莫西林原料由北京太洋藥業(yè)有限公司提供，含量為99.43%；色譜純?yōu)榧状?；分析純?yōu)榇姿?、醋酸銨。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器Agilent 1100型高效液相色譜儀。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)量25mg阿莫西林對(duì)照品，放到100ml的量瓶中；精密稱(chēng)量15mg經(jīng)105℃干燥至恒重的鹽酸氨溴索對(duì)照品，并放置50ml的量瓶中，加甲醇稀釋至50ml，精密稱(chēng)量5ml的鹽酸氨溴索對(duì)照品溶液至上述100ml的量瓶中，并加甲醇溶解并精確稀釋到100ml，此為對(duì)照品母液，臨用前用甲醇進(jìn)行稀釋。

1.3.2樣品溶液的制備稱(chēng)取適量本品（相當(dāng)于阿莫西林25mg，鹽酸氨溴索1.5mg，置于100ml的量瓶中，加流動(dòng)項(xiàng)溶解并精確稀釋到100ml，此為供試品溶液。

1.3.3血液處理精密吸取0.40ml血漿樣品，置于2ml肝素化離心管中，加入0.20ml的甲醇沉淀蛋白，震蕩均勻，12000rmin離心15min，并用0.45μm微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，隨后取20μl濾液上樣。

1.3.4色譜條件色譜柱為Inertsil OS-2柱（150mm×4.6mm，5um；流動(dòng)相為甲醇-0.01molL醋酸銨溶液（用醋酸溶液將其pH調(diào)至4（8：92，VV；檢測(cè)波長(zhǎng)為244nm；檢測(cè)溫度為25℃；流速為1.0mlmin，進(jìn)樣體積為20μl；通過(guò)外標(biāo)法對(duì)峰面積進(jìn)行計(jì)算。

2結(jié)果

2.1色譜行為經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，按照上述的色譜條件進(jìn)行操作，能夠?qū)Ⅺ}酸氨溴索和阿莫西林進(jìn)行很好的分離，鹽酸氨溴索的保留時(shí)間大約在11.0min，阿莫西林的保留時(shí)間約為4.1min。

2.2標(biāo)線(xiàn)性關(guān)系考察經(jīng)測(cè)量阿莫西林的回歸方程為A=3.601C-2.513，r=0.9998（n=8；鹽酸氨溴索的回歸方程為A=2.934+1.978，r=0.9999（n=8。結(jié)果顯示阿莫西林的質(zhì)量濃度在12.5-200μgmL、鹽酸氨溴索的質(zhì)量濃度在0.75-12μgmL的范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.3精密度試驗(yàn)分別依法配置高、中、低（阿莫西林藥品的質(zhì)量濃度分別為200，75，12.5μgmL3種質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，連續(xù)測(cè)定5d，計(jì)算日間精密度；并且在日內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行測(cè)量，共測(cè)量5次，計(jì)算日內(nèi)精密度。試驗(yàn)結(jié)果表明，日間精密度的RS分別為11.3%，9.4%，7.3%（n=5；日內(nèi)的精密度的RS分別為10.4%，6.3%，5.8%，日內(nèi)、日間精密度符合要求，測(cè)定方法可靠。

2.4回收率試驗(yàn)分別在空白血漿中加入對(duì)照品溶液，使得藥物的質(zhì)量濃度分別處于高、中、低（阿莫西林藥品的質(zhì)量濃度分別為200，75，12.5μgmL3種情況，每一個(gè)濃度平行做3次，依法進(jìn)行測(cè)定，依據(jù)線(xiàn)性回歸方程計(jì)算出各自的質(zhì)量濃度，回收率=測(cè)定的質(zhì)量濃度真實(shí)的質(zhì)量濃度。經(jīng)過(guò)計(jì)算，阿莫西林的平均回收率為100.3%，RS為1.06%；鹽酸氨溴索的平均回收率為100.5%，RS為0.75%。結(jié)果表明此測(cè)定方法可靠。

2.5藥代動(dòng)力學(xué)的研究記錄30名受試者測(cè)得的血藥濃度，并用AS3.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)算出復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，經(jīng)分析計(jì)算峰濃度（Cmax為（110.23±21.37μgml，達(dá)峰時(shí)間（tmax為（2.93±0.8h，血漿半衰期（t12為（8.36±3.19h，0-t藥時(shí)曲線(xiàn)下面積（AUC0-t為（916±81.34μg.hL，0-∞藥時(shí)曲線(xiàn)下面積（AUC0-∞為（953±84.19μg.hL。

3討論

結(jié)合相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道^[1-2]，筆者嘗試了不同流動(dòng)相的系統(tǒng)，當(dāng)流動(dòng)相為甲醇-水（10：90時(shí)，阿莫西林的出峰時(shí)間大約在5.6min，但是峰形較差。當(dāng)流動(dòng)相為乙腈-磷酸鹽系統(tǒng)和甲醇磷酸鹽系統(tǒng)時(shí)，如果調(diào)高有機(jī)相的比例，則阿莫西林出峰時(shí)間過(guò)早，無(wú)法與內(nèi)源性物質(zhì)分離開(kāi)來(lái)；如果降低有機(jī)相的比例，則出峰時(shí)間又會(huì)推遲10分鐘。經(jīng)過(guò)探索研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動(dòng)相為文章中甲醇-0.01molL醋酸銨溶液（8：92時(shí)，一方面出峰時(shí)間較短（約為5分鐘，另一方面峰形也較好，與內(nèi)源性物質(zhì)分離效果也好。本次研究所建立的測(cè)定血漿中復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索的HPLC法是一種具有較高的準(zhǔn)確度、靈敏度高、專(zhuān)一性好、線(xiàn)性范圍寬、操作簡(jiǎn)便的方法，可作為復(fù)方阿莫西林鹽酸氨溴索在人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究提供參考。

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