氯化汞誘導(dǎo)NRK細(xì)胞氧化損傷相關(guān)指標(biāo)改變的研究

【摘要】目的觀察氯化汞處理大鼠腎細(xì)胞系NRK細(xì)胞后氧化損傷相關(guān)指標(biāo)的改變。方法采用試劑盒方法檢測(cè)20-160μmolL氯化汞處理大鼠腎細(xì)胞系NRK細(xì)胞24h后超氧化物歧化酶（SO活性、丙二醛（A含量及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px活性。結(jié)果給予細(xì)胞20-160μmolL氯化汞作用24h，隨著給藥劑量增加，細(xì)胞的SO活性下降、A含量增加、GSH-Px活性下降。結(jié)論氯化汞可誘導(dǎo)大鼠腎細(xì)胞系NRK細(xì)胞氧化損傷相關(guān)指標(biāo)發(fā)生改變。

【關(guān)鍵詞】氯化汞；腎細(xì)胞；SO；A；GSH-Px

汞是重要的重金屬污染物。環(huán)境中汞以金屬汞、無機(jī)汞和有機(jī)汞三種形式存在，它們均對(duì)人體具有毒性作用。環(huán)境中的汞可被微生物攝入，并隨著食物鏈上升而富集在動(dòng)物和人體中，對(duì)人類健康造成嚴(yán)重威脅。有機(jī)汞能對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)造成破壞，尤其對(duì)發(fā)育早期的嬰幼兒影響更甚；金屬汞進(jìn)入人體后被迅速氧化為二價(jià)汞離子，其在人體內(nèi)的毒性機(jī)制與無機(jī)汞類似^[1]；無機(jī)汞，其中最具代表性的是氯化汞（HgCl2，主要對(duì)腎臟造成損傷^[2-3]，職業(yè)接觸或誤食含汞的食品藥物可導(dǎo)致中毒性腎病，甚至急性腎衰竭。但目前對(duì)氯化汞腎毒性的作用機(jī)制尚未完全了解。本研究以大鼠腎細(xì)胞株NRK細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察不同濃度氯化汞染毒后，細(xì)胞中氧化損傷相關(guān)的超氧化物歧化酶（SO活性、丙二醛（A含量和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px活性的改變情況，探討氯化汞對(duì)腎臟細(xì)胞的氧化損傷作用。

1資料與方法

1.1材料NRK細(xì)胞株（中科院上海細(xì)胞生物研究所；氯化汞（北京化工廠；RPI1640培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco公司；胎牛血清（杭州四季青生物研究所；丙二醛（A檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所、超氧化物歧化酶（SO檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所。

1.2細(xì)胞培養(yǎng)將NRK細(xì)胞置于含10%胎牛血清的RPI1640培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。

1.3氧化損傷相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用濃度為0.25%胰酶消化，制成單細(xì)胞懸液，每孔1×106個(gè)細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞完全貼壁后，每孔加入HgCl2終濃度為0、20、40、80和160μmolL的培養(yǎng)液，每個(gè)濃度4個(gè)平行樣，培養(yǎng)24h后，收集細(xì)胞，用冷磷酸緩沖液（PBS洗3次，4℃1500rmin離心5min。沉淀加600μl預(yù)冷的PBS，超聲裂解細(xì)胞。超氧化物歧化酶（SO活性、丙二醛（A含量和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px活性采用試劑盒方法檢測(cè)。

1.4統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，組間均數(shù)差異比較采用單因素方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2結(jié)果

2.1氯化汞對(duì)NRK細(xì)胞超氧化物歧化酶（SO活性的影響采用超氧化物歧化酶（SO測(cè)定試劑盒檢測(cè)，結(jié)果顯示：不同濃度（20、40、80及160μmolL氯化汞作用24h后，隨著劑量的2.3氯化汞對(duì)NRK細(xì)胞谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px活性的影響采用谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px測(cè)定試劑盒檢測(cè)，結(jié)果顯示：不同濃度（20、40、80及160μmolL氯化汞作用3討論

自由基是生物體內(nèi)細(xì)胞正常的代謝產(chǎn)物，正常情況下，機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)，可消除多余的自由基，但是在一些物理和化學(xué)因素作用下，或者病理狀態(tài)下，可導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激，產(chǎn)生氧化損傷。SO和GSH-Px是重要的抗氧化酶，可抑制氧自由基的氧化損傷作用^[4]。A是自由基作用于產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物，是衡量質(zhì)膜結(jié)構(gòu)氧化損傷程度的一個(gè)重要指標(biāo)。氧自由基和A含量明顯升高可逐漸耗竭細(xì)胞內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)，使細(xì)胞質(zhì)膜發(fā)生損傷，最終可導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生凋亡^[5]。

氯化汞是重要的環(huán)境污染物，氯化汞進(jìn)入人體可對(duì)多個(gè)器官產(chǎn)生毒性作用，其中作為氯化汞的主要蓄積器官，腎臟的毒性作用最為明顯。以往研究發(fā)現(xiàn)，氯化汞的腎毒性作用存在多種機(jī)制，如可引起腎臟中的酶活性發(fā)生改變^[6]，以及通過破壞細(xì)胞內(nèi)外的Na+、K+和Ca2+離子穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞功能發(fā)生障礙等方式產(chǎn)生腎毒性作用。而除以上原因外，自由基和氧化損傷通常也是有害物質(zhì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用的重要機(jī)制之一，因此為觀察氯化汞是否也能通過氧化損傷作用引起腎細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激從而產(chǎn)生相應(yīng)的毒性，本研究以大鼠腎細(xì)胞株NRK為研究對(duì)象，研究不同濃度氯化汞作用于腎細(xì)胞后氧化損傷相關(guān)指標(biāo)的改變情況。結(jié)果顯示，隨著劑量的增加，SO的活性逐漸下降，其中80μmolL組和160μmolL組與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.05；隨著劑量的升高A的含量有增多的趨勢(shì)，其中80μmolL組和160μmolL組與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.01；隨著劑量的增加，GSH-Px的活性逐漸下降，其中160μmolL組與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0.01。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氯化汞可能通過引起腎細(xì)胞發(fā)生氧化損傷從而產(chǎn)生毒性作用。

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