氣相色譜法測(cè)定注射用雷替曲塞中有機(jī)溶劑殘留

【摘要】建立氣相色譜法分析雷替曲塞中有機(jī)溶劑殘留。雷替曲塞中有機(jī)溶劑主要有甲醇、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑殘留。方法采用B-1石英毛細(xì)管柱，采用程序升溫，氣化室：200℃，檢測(cè)器：250℃，恒溫載氣N2。七種有機(jī)溶劑的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r>0.999。七種溶劑殘留的加樣回收RS分別為94.25%，98.81%，110.24%，105.34%，101.57%，92.57%和94.55%。本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好。

【關(guān)鍵詞】氣相色譜法；有機(jī)溶劑殘留；雷替曲塞；抗腫瘤藥

雷替曲塞是一種新一代水溶性胸腺合成酶抑制劑，屬于一種喹唑啉葉酸鹽類似物。該藥通過細(xì)胞膜外還原型葉酸鹽載體系統(tǒng)將本品主動(dòng)攝入細(xì)胞內(nèi)，而后迅速代謝為多谷氨酸類化合物抑制胸苷酸合酶的活性，從而抑制細(xì)胞NA的合成，并能在細(xì)胞內(nèi)潴留，長(zhǎng)時(shí)間發(fā)揮作用。它對(duì)結(jié)腸直腸癌細(xì)胞系的抑制作用強(qiáng)于5-氟尿嘧啶，且雷替曲塞（圖1的副反應(yīng)發(fā)生率低，方法簡(jiǎn)便，患者易于接受。雷替曲塞特點(diǎn)：①作用機(jī)制獨(dú)特：本品特異性亦自胸腺嘧啶核苷的合成，而對(duì)RNA不起作用，避免了因?qū)NA有影響而產(chǎn)生的副作用。②耐受性好，副作用少：出現(xiàn)白細(xì)胞減少、黏膜炎、潰瘍等副作用的比例減小，大大提高了完成全部治療的病人比例。③給藥方式簡(jiǎn)便、節(jié)約總體費(fèi)用：本品的給藥方式為每三周一次，每次約15分鐘靜脈輸注；而以5-氟尿嘧啶為主的聯(lián)合化療需每4周給藥一次，每次連續(xù)5天給藥。因此本品從整體上大大減少住戶李、支持治療等多方面的費(fèi)用。④療效確切：對(duì)于進(jìn)展性結(jié)腸癌，本品的反應(yīng)率為14-26%，本品的合成工藝分為3部分，第1部分為噻吩-2-甲酸中羧基的酰氯化、N-?；⑾趸€原、N-甲基化，得到中間體Ⅰ；第2部分為5-甲基-2-氨基-苯甲酸與硫代乙酰胺的環(huán)合、芳環(huán)側(cè)鏈的鹵代反應(yīng)，得到中間體Ⅱ；第3部分Ⅰ+Ⅱ的N-烷基化反應(yīng)及酯的水解反應(yīng)，得到終產(chǎn)物。在該藥的制備過程中，使用了甲醇、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑，本文建立了氣相色譜法測(cè)定其溶劑殘留，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好。

1儀器與試劑

儀器：ShimadzuGC-14B，F(xiàn)I檢測(cè)器，N-2000色譜工作站（浙江大學(xué)信息工程研究所。

試劑：甲醇（色譜純，美國(guó)Fisher Scientific公司；乙醚（分析純，濟(jì)南元通化工有限公司；石油醚（60-90℃，分析純，濟(jì)南元通化工有限公司；乙酸乙酯（分析純，上海試劑-廠；氯仿（分析純，上海試劑-廠；二甲基甲酰胺（分析純，江蘇漢邦科技有限公司；二甲亞砜（分析純，上海久意化學(xué)試劑有限公司；水為雙重蒸餾水。

樣品：雷替曲塞對(duì)照品（河南天方藥業(yè)股份有限公司藥物研究所，批號(hào)為120752，含量100.0%和注射用雷替曲塞（江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為130319。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：B-1石英毛細(xì)管柱（30m×0.53mmI..×1.0m；柱溫：起始30℃，3min，再以20℃min-1升至80℃，隨后以30℃min-1降至20℃，最后以50℃min-1升至200℃并停留4min；氣化室：200℃；檢測(cè)器：250℃；恒溫載氣N2；進(jìn)樣量：2l（不分流進(jìn)樣。其理論塔板數(shù)不得低于4000，分離度應(yīng)大于1.0。

2.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液制備分別精密稱取甲醇0.1491g、乙醚0.1503g、石油醚0.1519g、乙酸乙酯0.1488g、二氯甲烷0.1528g、氯仿0.1533g和二甲基甲酰胺0.1478g、置同一25ml量瓶中，加二甲亞砜溶解定容至刻度，搖勻，精密吸取此溶液5.0ml置50ml量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3線性范圍精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.3、0.6、1.0、2.5、4.0ml，分別置10ml量瓶中，用二甲亞砜稀釋，充分搖勻，分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0l進(jìn)樣，記錄色譜圖，得到各待結(jié)果表明，在所測(cè)定的濃度范圍內(nèi)，待測(cè)溶劑的濃度和峰面積比值間有良好的線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)>0.999。

2.4最低檢測(cè)限試驗(yàn)取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下1號(hào)溶液，用二甲亞砜稀釋1000倍，當(dāng)信噪比SN=3時(shí)，得到本法對(duì)各待測(cè)溶劑的最低檢測(cè)限：甲醇9.35ng、乙醚10.12ng、石油醚9.57ng、乙酸乙酯9.29ng、二氯甲烷10.28ng、氯仿10.86ng和二甲基甲酰胺10.17ng。

2.5精密度試驗(yàn)取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的第3號(hào)溶液，精密吸取2l，進(jìn)樣6次，計(jì)算得甲醇、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺峰面積的RS%值分別為：，2.38，2.26，7.69，6.94，5.88，6.27，5.46。

2.6加樣回收率試驗(yàn)精密測(cè)定雷替曲塞樣品約30mg，精密加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml，混勻，進(jìn)樣2l，計(jì)算得甲醇、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺的平均回收率（n=3分別為：94.25%，98.81%，110.24%，105.34%，101.57%，92.57%和94.55%。

2.7樣品測(cè)定精密稱取雷替曲塞對(duì)照品及樣品各約30mg，置10ml量瓶中加二甲亞砜溶解，精密吸取2l進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果表明樣品中有極少量殘留，均在標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)以下，說明樣品符合要求。

3討論

人用藥品注冊(cè)技術(shù)規(guī)范國(guó)際協(xié)調(diào)（ICH在關(guān)于有機(jī)溶劑殘留量的指導(dǎo)原則中將二氯甲烷列為第二類必須控制的毒性試劑，將乙醚列為第三類低毒性的溶劑^[1]。甲醇、乙醚、石油醚、氯仿易對(duì)黏膜產(chǎn)生刺激，使鼻黏膜出血，喉頭發(fā)炎，嗅覺喪失，或因皮膚敏感產(chǎn)生紅腫、發(fā)癢、紅斑、壞疽病等。本品合成所用的七種有機(jī)溶劑在測(cè)定時(shí)，由于柱長(zhǎng)有限，互相之間易產(chǎn)生干擾，因而需考慮結(jié)合極性與沸點(diǎn)的差異將其分離。根據(jù)《化學(xué)藥物殘留溶劑研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》^[2]本品及殘留的有機(jī)溶劑能在二甲亞砜中溶解，并且溶解性好、沸點(diǎn)高、出峰晚的二甲亞砜為溶劑。考慮到乙酸乙酯與甲醇機(jī)型相似，故測(cè)定樣品時(shí)采用降溫（30℃min-1降至20℃改善其分離^[3]，以保證分離度大于1。有機(jī)溶劑基本上按照極性的順序出峰，測(cè)定時(shí)色譜體系采用程序升溫的方法，加快出峰和改善峰形。測(cè)定的結(jié)果表明樣品中乙酸乙酯和二甲基甲酰胺有少量殘留（遠(yuǎn)低于限量。故該法用于有機(jī)溶劑的含量測(cè)定準(zhǔn)確，可信。

參考文獻(xiàn)

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