姜黃素自微乳在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究

【摘要】目的測定姜黃素在大鼠體內(nèi)的血藥濃度經(jīng)時過程，評價姜黃素自微乳的藥代動力學(xué)及相對生物得度。方法分別單劑量給予大鼠姜黃素自微乳和姜黃素混懸液，以HPLC法分析血漿中姜黃素的質(zhì)量濃度，用AS2.1.1程序擬合藥物濃度-時間曲線，計算藥代動力學(xué)參數(shù)及生物利用度。結(jié)果姜黃素自微乳和混懸液的藥代動力學(xué)參數(shù)分別是Tmax為1.01h和0.74h，Cmax為2204.7mg·L-1和973.1mg·L-1，AUC0-24h為4538.7mg·h·L-1和1971.4mg·h·L-1，姜黃素自微乳相對于混懸液的生物利用度為230.23%。結(jié)論姜黃素自微乳相對于其混懸液，能夠顯著提高姜黃素在大鼠體內(nèi)的生物利用度。

【關(guān)鍵詞】姜黃素；自微乳；藥代動力學(xué)；生物利用度

姜黃素不溶于水，在體內(nèi)吸收不穩(wěn)定，一般口服制劑生物利用度低^[1]。為提高其生物利用度，研究設(shè)計出新的給藥系統(tǒng)——自微乳化給藥系統(tǒng)^[2-3]。

本研究以HPLC法測定姜黃素自微乳及其混懸液在大鼠體內(nèi)的血藥濃度從而分析藥代動力學(xué)參數(shù)^[4]，并進行了生物利用度比較，考察劑型對該藥物生物利用度的提高情況，從而為姜黃素自微乳口服制劑的開發(fā)提供依據(jù)。

1材料

1.1受試動物健康的S大鼠（雌雄各半，體重為（200±20g，動物合格證號：SCXK（粵2012-1203，由南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。

1.2儀器與試藥Agilent1200型高效液相色譜儀，A檢測器，Agilent ChemStations數(shù)據(jù)處理軟件（安捷倫科技有限公司；XB120A分析天平（瑞士普利塞斯；KQ3200B型數(shù)控超聲儀（廣州予華儀器有限公司；GL-20G-C高速臺式冷凍離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠；SK-1漩渦混合器（金壇市梅香儀器有限公司；姜黃素混懸液（含姜黃素50mgml，批號：20121120；姜黃素對照品（批號：1223-80，中國藥品生物制品檢定所；姜黃素自微乳（含姜黃素50mgg，批號：20121120；超純水（實驗室制備；其它溶劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的配制稱取1.12mg姜黃素對照品，精密稱定，加無水色譜甲醇溶解、定容至100ml容量瓶中，搖勻，得到質(zhì)量濃度為11.20μg·mL-1的姜黃素對照品貯備液，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2血漿樣品的制備精密吸取血清0.2ml，加入0.2ml色譜甲醇，漩渦混合器上混合3min，然后于冷凍離心機上10000r·min-1離心10min，取出上清液，0.22μm濾膜過濾，備用。

2.3色譜條件色譜柱：Phenomenex（250mm×4.6mm，5m，流速：1.0mL·min-1，柱溫：不控溫，流動相：甲醇（A-水（B，檢測波長為425，為最佳檢測色譜條件

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密取對照品溶液3.0、5.0、7.0、10.0、12.0、15.0μl，按“2.3”項下條件進樣測定，記錄峰面積。以進樣量為橫坐標(biāo)X，單位μg，峰面積為縱坐標(biāo)Y，作回歸曲線，回歸方程為：Y=0.0929X-39.586（R2=0.999。結(jié)果表明：姜黃素進樣量在33.6ng-168.0ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度實驗精密吸取對照品溶液（11.20μg·mL-1按“2.3”項下色譜條件重復(fù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果：姜黃素的RS值為0.87%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6重復(fù)性實驗取同一批樣品按“2.2”項下制得樣品溶液6份，以“2.3”項下色譜條件測定姜黃素的峰面積，計算得RS值為1.11%，表明分析方法重復(fù)性良好。

2.7穩(wěn)定性實驗精密取樣品1.0mL，按“2.2”項下進行操作，按“2.3”項下色譜條件，分別于0、4、8、16、24、60h測定姜黃素峰面積，計算其RS值為0.96%，結(jié)果表明該自微乳溶液在60h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8回收率試驗精取含姜黃素11.20μg·mL-1的對照品溶液80，100，120μl，各3份，置磨口錐形瓶中，揮去甲醇。取樣品1.0mL，精密稱定，加入上述錐形瓶中，按“2.2”項下方法制備樣品溶液，以“2.3”項下色譜條件測定姜黃素峰面積，計算回收率。結(jié)果高、中、低3種加入量的回收率分別為（99.43±0.38%，（100.24±0.32%，（100.33±0.43%。平均回收率為100.00%（n=9，RS=0.97%。結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確度良好。

2.9試驗方案與樣品采集取健康S大鼠40只，隨機分為姜黃素自微乳給藥組和姜黃素混懸液給藥組兩組，每組20只，雌雄各半，每組又隨機分為20、30、40、60、90、120、180、240min取血，給藥前禁食12h，不禁水。給藥劑量按200mg·kg-1，兩組分別灌胃給予姜黃素自微乳和姜黃素混懸液，給藥后于相應(yīng)時間點采血1ml（大鼠眼球采血，5000r·min-1離心10min，取血清于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

3數(shù)據(jù)處理

通過HPLC測定分析得到的血藥濃度數(shù)據(jù)，計算出血藥濃度的均值，血藥濃度均值與時間采用AS2.1.1版程序計算藥代動力學(xué)參數(shù)及生物利用度。

3.1結(jié)果

3.1.1平均血藥濃度-時間曲線通過HPLC測得的各血樣中姜黃素的峰面積，分別計算出各時間點大鼠口服姜黃素自微乳和混懸液的血藥濃度均值。作出大鼠單劑量口服姜黃素自微乳和口服姜黃素混懸液后血清中姜黃素濃度均值的藥-時曲線，見圖1。

3.1.2藥代動力學(xué)參數(shù)利用AS2.1.1版程序進行數(shù)據(jù)處理，根據(jù)AIC結(jié)合Re值等判定姜黃素自微乳為一級雙室開放模型，權(quán)重因子為1CC，混懸液為一級單室開放模型，權(quán)重因子為1C。其主要藥動學(xué)參數(shù)，見表1。

結(jié)果表明，大鼠口服姜黃素自微乳后達峰濃度Cmax為口服姜黃素混懸液Cmax的2.3倍，相對生物利用度為230.23%，達峰時間為1.0h。

4討論

本實驗血漿樣品處理采用甲醇處理，操作簡單快速，血漿中雜質(zhì)無干擾，方法可行，有效。本研究采用HPLC法測定大鼠血藥濃度^[4]，經(jīng)方法學(xué)證實可行，操作簡單，結(jié)果表明，兩組藥物給藥后體內(nèi)血藥濃度在0.5-1.0h血藥濃度吸收最高，而后下降，但姜黃素自微乳組給藥后的峰濃度為混懸液組達峰濃度的2.3倍，且各時間點的姜黃素自微乳血藥濃度均高于相同時間點的混懸液組血藥濃度。

因此本實驗通過大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)研究表明，姜黃素自微乳能夠顯著提高姜黃素口服生物利用度。

參考文獻

[1]aheshwari R K，Singh A K，Gaddipati J，et al.ultiple biological activities of curcumin：a short review[J].Life Sci，2006，78（18：2081-2087.

[2]林巧平，郭仁平，許向陽，等.注射用姜黃素脂質(zhì)體的制備及其質(zhì)量評價[J].中國天然藥物，2007，5（3：207-210.

[3]崔晶，翟光喜，婁紅祥.姜黃素微乳的研制及其性質(zhì)研究[J].中國藥學(xué)雜志，2005，40（24：1877-1880.

[4]陳小新，賴小平，李耿，等.葛根素自微乳在小鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究[J].中成藥，2011，33（7：1220-1222.