HPLC法測定卡巴拉丁貼劑藥物含量及其體外釋放量

【摘要】目的通過HPLC法測定卡巴拉丁貼劑中藥物的含量及其體外釋放量。方法采用改進(jìn)的Franz擴(kuò)散池，用離體豚鼠皮膚為透皮屏障，采用高效液相色譜（HPLC測定法，測定卡巴拉丁貼劑中的藥物含量及其體外釋放量。結(jié)果卡巴拉丁表現(xiàn)為線性關(guān)系良好的濃度范圍為：9.69-116.32μgmL；精密度RS為：0.12%-0.47%；檢測限為：0.17μgmL；高、中、低時(shí)的平均回收率分別為99.88%、98.59%、98.79%。巴拉丁貼際的體外釋放量曲線符合零級(jí)方程：Q=kt，Q=59.91t+6.02，r=0.9987。結(jié)論通過HPLC法可以準(zhǔn)確的測定卡巴拉丁貼劑藥物含量及其體外釋放量，此方法方便靈敏、操作簡單、測定結(jié)果準(zhǔn)確，值得推廣和應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】卡巴拉丁貼劑；HPLC法；藥物含量；體外釋放量

1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)儀器和原料日本島津公司生產(chǎn)的UV-2401紫外-可見分光光度計(jì)。美國Waters公司生產(chǎn)的Waters 2690高效液相色譜儀、illennium32色譜數(shù)據(jù)工作站、Waters雙波長2487紫外檢測器。上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司生產(chǎn)的TK-60B型Franz擴(kuò)散池^[2]。

北京康倍得醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)的卡巴拉汀貼片（批號(hào)：130316，130413，130602，每片面積為2.5cm2，每片含卡巴拉丁4.5mg；同公司同批號(hào)的卡巴拉汀空白貼片，每片面積為2.5cm2。北京聚德陽光醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)的卡巴拉汀。北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物中心提供的體重250±30g的雄性豚鼠。illipore超純水器制備提供的純水。美國Fisher公司生產(chǎn)的甲醇、色譜純^[3]。

1.2HPLC條件采用Waters XTerra RP18柱（150mm×3.9mm，5.0μm色譜柱；柱溫為32℃；流動(dòng)相：采用體積比為42∶28∶30的甲醇-碳酸氫銨溶液（濃度為10molL，磷酸調(diào)節(jié)pH=8.5-水，流速為1.0mL.min-1，檢測波長為286nm。

1.3制備溶液供試品溶液：將卡巴拉丁貼片除去防粘層，將其浸于25ml的甲醇中，放置于常溫狀態(tài)下24h，采用過濾膜將其溶液過濾，取出2ml濾出液，使用甲醇稀釋液將其稀釋至10ml，得到卡巴拉汀供試品溶液。對(duì)照液：準(zhǔn)確稱量19.387mg卡巴拉丁，將其放置于50ml容量瓶中，使用甲醇將其溶解和定容，然后搖勻得到卡巴拉丁對(duì)照液，其濃度為387.74μgmL?？瞻滓海喝〕隹ò屠】瞻踪N片，按供試品溶液的方法制備出空白溶液。

1.4體外頭皮實(shí)驗(yàn)將健康成年豚鼠的背腹部毛除盡，使用溫水將其皮膚洗凈，并使用敲顱法將其處死，然后立即除去皮膚和皮下脂肪，將其浸于生理鹽水中，放置于4℃冰箱中保存。經(jīng)皮滲透屏障為豚鼠腹部皮膚，將其處理后固定于容量為18ml的Franz單室擴(kuò)散池上部，并且固定時(shí)使皮膚的角質(zhì)層向外，將除去防粘層的卡巴拉丁透皮貼劑貼于其上。透皮釋放接收介質(zhì)為pH=6.8的磷酸鹽緩沖溶液，磁力攪拌轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為320rmin，介質(zhì)溫度為32±0.5℃。然后進(jìn)行取樣，時(shí)間為實(shí)驗(yàn)開始的2h、4h、6h、12h、24h，分別取樣2ml，每一次取樣完畢，全部倒掉其接受液，使用等溫的空白液進(jìn)行補(bǔ)加。將過濾后的樣品進(jìn)行HPLC檢測，其進(jìn)樣為10μL，然后在210nm檢測波長下，測定其峰面積。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)所有的數(shù)據(jù)都采用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。

2結(jié)果

HPLC測定選擇210nm為檢測波長，當(dāng)pH值=8.5時(shí)，分離效果較好，分析時(shí)間較短?？ò屠”憩F(xiàn)為線性關(guān)系良好的濃度范圍為：9.69-116.32μgmL；精密度RS為：0.12%-0.47%；檢測限為：0.17μgmL；高、中、低時(shí)的平均回收率分別為99.88%、98.59%、98.79%，見表1。

體外透皮性能：巴拉丁貼劑的體外釋放量曲線符合零級(jí)方程：Q=kt，Q=59.91t+6.02，r=0.9987?？ò屠⊥钙べN劑單位面積藥物累積透皮量Q與時(shí)間t呈良好線性關(guān)系，具有良好的體外透皮釋放性能。

3結(jié)論

3.1專屬性實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確量取供試品溶液和空白溶液，分別為10μL，采用HPLC法進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，卡巴拉丁中的主藥與浸出液的溶劑、雜質(zhì)完全分離，所以對(duì)藥品的檢測無干擾作用^[4]。

3.2穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)量取配制的卡巴拉丁供試品溶液，然后放置于室溫下，在實(shí)驗(yàn)開始的2h、4h、6h、12h、24h，分別取樣2ml，每一次取樣完畢，全部倒掉其接受液，使用等溫的空白液進(jìn)行補(bǔ)加。將過濾后的樣品進(jìn)行HPLC檢測，其進(jìn)樣為10μL，然后在210nm檢測波長下，測定其峰面積。結(jié)果表明，常溫下的卡巴拉丁供試品溶液在24h內(nèi)非常穩(wěn)定，不容易分解。

3.3精確度實(shí)驗(yàn)對(duì)低、中、高三種濃度的對(duì)照液進(jìn)行測定，每個(gè)濃度測定6次，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差，RST分別為0.12%、0.47%、0.28%。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HPLC法測定結(jié)果非常精確。

綜上所述，HPLC法的檢測限低；具有較好的回收率；方便進(jìn)行卡巴拉丁的質(zhì)量控制?？ò屠≡?4h內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，并且具有良好的體外經(jīng)皮滲透性能。通過HPLC法可以準(zhǔn)確的測定卡巴拉丁貼劑藥物含量及其體外釋放量，此方法方便靈敏、操作簡單、測定結(jié)果準(zhǔn)確，值得推廣和應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]趙雯，等.RP-HPLC法測定鹽酸阿霉素磁性脂質(zhì)體的藥物含量[J].藥物分析雜志，2010，02：244.

[2]樂文清.HPLC法測定丹皮酚脂質(zhì)體藥物含量與包封率[J].安徽醫(yī)藥，2010，04：417.

[3]孫莉.HPLC法測定藥物含量的不確定度分析[J].安徽醫(yī)藥，2010，07：776.

[4]亞歷山大，等.HPLC法測定聯(lián)苯乙酸巴布劑中藥物含量及其體外透皮性能的研究[J].分析儀器，2010，05：32.