骨橋蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶—2在宮頸癌組織中的表達及其意義

[摘要] 目的 研究OPN、MMP-2在宮頸癌組織中的表達及其臨床病理意義。 方法 采用免疫組化檢測OPN和MMP-2在14例正常宮頸上皮組織、32例宮頸鱗狀上皮內(nèi)腫瘤和78例宮頸鱗癌組織的表達及相關(guān)性。 結(jié)果 OPN、MMP-2在正常宮頸上皮組織、宮頸鱗狀上皮內(nèi)腫瘤及宮頸鱗癌組織中的表達率依次升高，分別為7.14%、34.38%和66.67%以及14.29%、40.63%和74.36%，三組均比較有顯著性差異（P < 0.01）。間質(zhì)浸潤深度>1/2或有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗癌，其OPN和MMP-2表達陽性率均明顯高于間質(zhì)浸潤深度≤1/2或無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鱗癌（P < 0.05）。鱗癌組織中OPN、MMP-2的表達之間存在明顯相關(guān)性（P < 0.05）。 結(jié)論OPN、MMP-2在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要作用，檢測OPN及MMP-2的表達或有助于宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移的早期發(fā)現(xiàn)。

[關(guān)鍵詞] 宮頸癌；骨橋蛋白 ；基質(zhì)金屬蛋白酶；免疫組化

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）34-0085-03

Expression and clinical significance of OPN and MMP-2 in cervical squamous cell carcinoma

DENG Xinghui LI Hong ZHOU Wei YU Weidong

Department of Pathology，the Central Hospital of Jiangmen City in Guangdong Province，Jiangmen 529030，China

[Abstract] Objective To study the expression and clinicopathological significance of osteoponin（OPN） and matrix metalloproteinase-2（MMP-2） in cervical squamous cell carcinoma（SCC）. Methods The expressions of OPN and MMP-2 were detected in 14 cases of normal cervical squamous epithelium，32 cases of CIN and 78 cases of SCC by immunohistochemistry. Results The positive expression rates of OPN and MMP-2 were 66.67% and 74.36% respcetively in SCC， significantly higher than those in CIN and normal cervical squamous epithelium（P < 0.05）. Both OPN and MMP-2 expression rates in cases with invasion depth >1/2 cervical wall or lymph node metastasis were significantly higher than in those with invasion depth ≤1/2 cervical wall or without lymph node metastasis（P < 0.05）. The expression of OPN was significantly related to MMP-2 expression in SCC（P < 0.05）. Conclusion Over-expression of OPN、MMP-2 may play an important role in the carcinogenesis and progression of cervical squamous carcinoma.

[Key words] Cervical carcinoma； Osteoponin； Matrix metalloproteinase； Immunohistochemistry

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移是宮頸癌患者晚期的主要死亡原因之一。骨橋蛋白（osteoponin，OPN）是Senger于1979年首次在惡性轉(zhuǎn)化的上皮細胞中發(fā)現(xiàn)的一種磷酸化糖蛋白，在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮重要作用?；|(zhì)金屬蛋白酶家族（matrixmetalloproteinases，MMPs）是依賴鋅離子的蛋白酶類，可以降解基底膜和細胞外基質(zhì)，從而促進腫瘤細胞的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移?；|(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）是MMPs家族的重要一員，在多種腫瘤中高表達，對腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用[1-5]。經(jīng)檢索文獻，尚未見OPN和MMP-2在子宮頸鱗癌浸潤和轉(zhuǎn)移過程中相互作用的相關(guān)研究報道，我們采用免疫組化SP法檢測OPN和MMP-2在子宮頸鱗癌組織中的表達，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系，探討二者在子宮頸鱗癌浸潤和轉(zhuǎn)移中的作用。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選取2005年10月～2010年12月在我院住院進行手術(shù)切除或活檢的未經(jīng)過化療、放療及免疫治療的存檔蠟塊。其中子宮頸鱗癌78例，子宮頸上皮內(nèi)瘤變32例，正常宮頸上皮組織14例。宮頸癌患者年齡28～75歲，<47歲的46例，≥47歲的32例；宮頸鱗癌按FIGO分期標準分為Ⅰ期30例，Ⅱ期以上48例；組織學分級：高分化20例，中分化42例，低分化16例；間質(zhì)浸潤深度：≤1/2者50例，>1/2者28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者48例。

1.2試劑與方法

OPN鼠抗人單克隆抗體工作液，MMP-2鼠抗人單克隆抗體工作液，SP法免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。OPN、MMP-2的檢測均采用免疫組化SP法，染色的具體操作步驟按照試劑盒要求進行。

1.3結(jié)果判斷

OPN、MMP-2的染色均以細胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標準。由兩位病理醫(yī)師采用雙盲法觀察每張免疫組化染色切片。陽性判斷：①按切片中著色癌細胞數(shù)比例計分：0分，無癌細胞著色；1分，著色癌細胞<25%癌細胞總數(shù)；2分，著色癌細胞占癌細胞總數(shù)≥25%但<50%；3分，著色癌細胞≥50%癌細胞總數(shù)。②按切片中癌細胞著色程度計分：0分，癌細胞無著色；1分，癌細胞呈淺黃色；2分，癌細胞呈棕黃色；3分，癌細胞呈棕褐色。綜合①、②計分，①+②<3分為陰性，①+②≥3分為陽性。

1.4統(tǒng)計分析

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，組間差異分析采用χ2 檢驗和Fisher確切概率法，OPN、MMP-2相關(guān)性分析采用等級相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 OPN、MMP-2在正常宮頸上皮組織、上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌組織中的表達

OPN染色主要位于癌細胞的細胞漿和細胞膜，間質(zhì)也有部分著色；MMP-2染色主要位于癌細胞的細胞漿。在正常宮頸上皮組織、上皮內(nèi)瘤變以及宮頸浸潤癌中，OPN陽性表達率分別為7.14%（1/14）、34.38%（11/32）和66.67%（52/78），MMP-2的陽性表達率分別為14.29%（2/14）、40.63%（13/32）和74.36%（58/78），宮頸癌組織OPN、MMP-2表達陽性率顯著高于正常宮頸上皮組織和上皮內(nèi)瘤變（χ2=21.97，P < 0.01； χ2=23.62，P < 0.01），見表1。

表1 OPN、MMP-2在正常宮頸上皮組織、CIN及宮頸鱗癌組織中的表達

2.2 OPN、MMP-2表達與宮頸鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

宮頸鱗癌組織中，間質(zhì)浸潤深度>1/2者，其OPN和MMP-2表達陽性率明顯高于間質(zhì)浸潤深度≤1/2者（P < 0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，其OPN和MMP-2表達陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P < 0.05）；而在不同年齡、FIGO分期及分化程度的表達差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），見表2。

2.3宮頸鱗癌組織OPN、MMP-2表達的相關(guān)性關(guān)系

78例宮頸鱗癌組織中，52例OPN表達陽性者，其MMP-2表達陽性43例，陰性表達9例；26例OPN表達陰性者，其MMP-2表達陽性15例，陰性表達11例。經(jīng)χ2檢驗，OPN、MMP-2在宮頸鱗癌組織中的表達呈顯著正相關(guān)（r =0.270，P < 0.05）。

3討論

宮頸癌是女性的第二位常見的惡性腫瘤，早期就可經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移。研究表明，宮頸癌患者總的5年生存率幾乎達到70%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，5年生存率甚至達到80%～90%，而局部或遠處轉(zhuǎn)移者，5年生存率則分別為50.9%和16.9%。據(jù)統(tǒng)計，80%的宮頸癌患者死于腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程十分復雜，包括一系列的腫瘤細胞與腫瘤細胞、腫瘤細胞與宿主細胞、腫瘤細胞與細胞外基質(zhì)的相互作用。

OPN是細胞外基質(zhì)中的一種多功能磷酸化唾液酸糖蛋白。OPN一方面通過黏附序列RGD與細胞表面的多種整合素受體結(jié)合，另一方面通過非依賴RGD序列與CD44結(jié)合，從而激活一系列細胞內(nèi)信號，引起內(nèi)在蛋白水解酶的合成，加快了層粘連蛋白和纖維粘連蛋白等細胞外基質(zhì)的降解，促進腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移。研究表明，多種腫瘤組織中OPN高表達，且與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移性相關(guān)[6-9]。本研究數(shù)據(jù)顯示，宮頸癌組織OPN表達明顯高于CIN及正常宮頸組織，間質(zhì)浸潤深度>1/2者，其OPN表達陽性率明顯高于間質(zhì)浸潤深度≤1/2者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，其OPN表達陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，與國內(nèi)外學者研究結(jié)果較一致，提示OPN在宮頸癌的浸潤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。

MMPs是降解細胞外基質(zhì)的重要蛋白酶類，能降解細胞外基質(zhì)的幾乎所有成分。通過降解細胞外基質(zhì)，MMPs能促進腫瘤細胞突破基底膜和細胞外基質(zhì)構(gòu)成的組織屏障，從而侵襲周圍。MMP-2屬于明膠酶類，能特異性降解基底膜的主要成分Ⅳ、Ⅴ型膠原，因而在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中起主要作用。正常穩(wěn)態(tài)組織中，MMP-2表達極少。研究表明，多種腫瘤組織中高表達MMP-2，且與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移能力相關(guān)。有學者研究發(fā)現(xiàn)，MMP-2在正常宮頸上皮組織中少量表達，在宮頸癌中表達明顯升高，并認為MMP-2是早期腫瘤的標志。有研究表明[10]，MMP-2在NCE，CIN和ICC的表達逐漸升高，MMP-2在宮頸癌中的表達明顯高于CIN及NCE（P < 0.01）；MMP-2表達與宮頸癌的組織學分類和分化程度無關(guān)，而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達水平顯著高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。本研究數(shù)據(jù)顯示，宮頸癌組織MMP-2表達明顯高于CIN及正常宮頸組織，間質(zhì)浸潤深度>1/2者，其MMP-2表達陽性率明顯高于間質(zhì)浸潤深度≤1/2者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，其MMP-2表達陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，與國內(nèi)外學者研究結(jié)果較一致，進一步證實MMP-2在宮頸癌的浸潤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。

有研究表明，OPN和MMP-2在腫瘤組織中表達正相關(guān)，均為負性預(yù)后因子，在腫瘤細胞侵襲、轉(zhuǎn)移方面有相互促進作用[11，12]。Philip等報道在鼠黑色素瘤細胞株B16F10中，OPN通過ZkB-α（NF-κB抑制蛋白α）/IKK激活NF-κB，誘導MT1-MMP2表達，刺激腫瘤的生長，同時激活Pro-MMP2（MMP2酶原）為MMP-2，促進腫瘤轉(zhuǎn)移。本研究發(fā)現(xiàn)OPN、MMP-2 在宮頸癌中的表達呈正相關(guān)，表明OPN、MMP-2表達可能具有一致性，內(nèi)在原因有待進一步研究。

綜上所述，OPN和MMP-2可能參與了宮頸癌的浸潤轉(zhuǎn)移過程，二者之間的相互作用機制需要更深一步的研究。檢測OPN或MMP-2的表達可能有助于宮頸癌轉(zhuǎn)移的早期發(fā)現(xiàn)，尤其是聯(lián)合檢測OPN和MMP-2的表達對于預(yù)測宮頸癌的復發(fā)和轉(zhuǎn)移更具有臨床意義。

[參考文獻]

[1] 張彬，謝宏亮，徐志英，等. MAPK、MMP-2和MMP-9在唾液腺腺樣囊性癌中的表達及意義[J]. 中國口腔頜面外科雜志，2011，9（5）：360-366.

[2] Xiang ZL，Zeng ZC，F(xiàn)an J，et al. Gene expression profiling of fixed tissues identified hypoxia-inducible factor-1α，VEGF， and matrix metalloproteinase-2 as biomarkers of lymph node metastasis in hepatocellular carcinoma[J]. Clin Cancer Res，2011，17（16）：5463-5472.

[3] 周競奇，李維山. 基質(zhì)金屬蛋白酶-2在結(jié)腸腺癌組織中的表達[J]. 腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2012，25（1）：9-11.

[4] 陳友權(quán)，于燕妮. 胃癌中SDF-1、CXCR4、MMP-2和MMP-9的表達及意義[J]. 臨床與實驗病理學雜志，2012，28（2）：135-139.

[5] 孫桂芳，韓素萍，田秀春. 宮頸癌組織PAR-2和MMP-2表達及其與侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[J]. 中華腫瘤防治雜志，2011，18（15）：1182-1185.

[6] 郝筱詩，安燕，王立巖，等. 骨橋蛋白在宮頸組織中的表達及與宮頸癌進展的相關(guān)性研究[J]. 中國實驗診斷學，2012，16（1）：65-67.

[7] 許桂祥，王振旭，許準，等. 膽囊癌骨橋蛋白和MMP-9的表達及其意義[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，49（31）：61-62.

[8] 徐松濤，邵雪峰，王競，等. OPN及VEGF在膀胱尿路上皮癌中的表達及意義[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2011，21（26）：3276-3278.

[9] Yang G，Zhang Y，Wu J，et al. Osteopontin regulates growth and migration of human nasopharyngeal cancer cells[J]. Mol Med Rep，2011，4（6）：1169-1173.

[10] 滕燕伊，劉曉云，鄭洪，等. Ki-67、MMP-7、MMP-2在宮頸CIN和宮頸癌中的表達及意義[J]. 重慶醫(yī)科大學學報，2010，35（7）：989-991.

[11] 蒲乃秀，尹超偉，范淑英，等. 骨橋蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶-2在子宮內(nèi)膜癌的表達[J]. 新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報，2012，29（2）：124-126.

[12] 路會玲，王翎. 骨橋蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶-2在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[J]. 江蘇醫(yī)藥，2012，38（6）：709-711.

（收稿日期：2013-09-16）