大蒜素聯(lián)合頭孢哌酮對多重耐藥鮑曼不動桿菌體外抗菌活性的影響

[摘要] 目的 評價大蒜素與頭孢哌酮聯(lián)合用藥對臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌（MDR-ABA）體外抗菌活性。 方法 采用棋盤法設(shè)計，微量肉湯稀釋法測定不同濃度組合的2組抗菌藥物，分別對15株敏感ABA和15株耐頭孢哌酮ABA的最低抑菌濃度，并計算FIC指數(shù)判定聯(lián)合效應(yīng)。 結(jié)果 大蒜素與頭孢哌酮聯(lián)合應(yīng)用后，其MIC50顯著降低；FIC指數(shù)分布： FIC≤0.5占40.8%～65.1%；0.52為0。 結(jié)論 大蒜素與頭孢哌酮聯(lián)用后，對鮑曼不動桿菌基本表現(xiàn)為協(xié)同作用和相加作用，特別是能顯著提高頭孢哌酮對耐藥鮑曼不動桿菌的殺菌活性。

[關(guān)鍵詞] 大蒜素；頭孢哌酮；鮑曼不動桿菌； FIC index

[中圖分類號] R446.5 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）21-0068-02

鮑曼不動桿菌（ABA）是目前醫(yī)院感染主要致病菌之一。研究表明，近幾年來其耐藥性迅速增長[1]，甚至出現(xiàn)了只對多黏菌素敏感而其他抗生素均耐藥的菌株[2]，近年來鮑曼不動桿菌的耐藥問題逐漸成為學(xué)者們關(guān)注的焦點。這種日趨嚴(yán)重的耐藥現(xiàn)象迫使我們急需一種新的抗菌藥物或聯(lián)合用藥來控制和減少耐藥菌株產(chǎn)生。大蒜素（allicin）是大蒜的主要成分，有抗菌、消炎及抗病原微生物、抗腫瘤等多種藥理作用[3]，臨床已將其廣泛應(yīng)用于抗感染的治療。本文在文獻研究的基礎(chǔ)上通過對大蒜素聯(lián)合頭孢哌酮對多重耐藥鮑曼不動桿菌的殺傷效果進行了觀察，以期為臨床上泛耐藥的鮑曼不動桿菌的治療提供新的視點。

1 材料與方法

1.1 分離菌株

30菌株臨床分離的ABA，均經(jīng)VITEKCompact細菌鑒定儀鑒定，其中包括15株敏感ABA和15株耐頭孢哌酮ABA，排除同一患者同一部位的重復(fù)菌株。質(zhì)控菌為大腸埃希菌ATCC 25922。

1.2 抗菌藥物

大蒜素，批號：H32025640，江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司；頭孢哌酮鈉，批號130420-200304，含量96.5%，中國藥品生物制品檢定所。

1.3 培養(yǎng)基與藥敏紙片

K-B法檢測臨床常用藥物敏感試驗藥敏試驗方法采用微量肉湯稀釋法。藥敏紙片均為英國Oxoid公司生產(chǎn)。根據(jù)2009年美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）規(guī)定的判斷標(biāo)準(zhǔn)判定菌株對抗菌藥物的敏感性。

1.4儀器

微量加樣器和微量離心管由Eppendorf 中國有限公司生產(chǎn)；恒溫培養(yǎng)箱由Thermo公司生產(chǎn)；比濁儀，VITEK全自動細菌鑒定儀和哥倫比亞血瓊脂均由法國生物梅里埃公司生產(chǎn)。

1.5 方法

1.5.1 菌懸液的配制 挑取4～5個已分純的菌落，接種于肉湯中增菌，6 h后取3 mL菌液通過比濁儀校正其濁度至0.5 MacFarland，然后再用M-H肉湯稀釋至1.5×105 CFU/mL。

1.5.2 微量肉湯稀釋法 將大蒜素和頭孢哌酮的藥物濃度依次倍比稀釋，設(shè)置11個稀釋濃度。按棋盤法設(shè)計， 將不同濃度的大蒜素與抗菌藥物兩兩組合后取50μL加入96孔平板中，再將1.5×105 CFU/mL的菌液100μL加入孔中，37 ℃培養(yǎng)過夜。記錄MIC值，計算（部分抑菌濃度指數(shù)）FIC指數(shù)，F(xiàn)IC指數(shù)=MIC甲藥聯(lián)用/MIC甲藥單用+MIC乙藥聯(lián)用/MIC乙藥單用。

1.5.3判讀標(biāo)準(zhǔn)[4] FIC指數(shù)≤0.5時，兩種藥為協(xié)同作用；FIC指數(shù)為0.5～1.0，兩種藥為相加作用； l.02.0，兩種藥為拮抗作用。

2 結(jié)果

2.1 藥敏率

大蒜素與頭孢哌酮聯(lián)合應(yīng)用后，其MIC50和MIC90顯著降低。見表1。

表1 大蒜素與頭孢哌酮聯(lián)用對敏感和耐藥鮑曼不動桿菌MIC（mg/L）

2.2 FIC指數(shù)分布

大蒜素與頭孢哌酮聯(lián)用對鮑曼不動桿菌的FIC指數(shù)分布構(gòu)成比， 結(jié)果顯示，F(xiàn)IC指數(shù)分布：FIC指數(shù)≤0.5占40.8%～65.1%；0.52為0。見圖1。

圖1 大蒜素與頭孢哌酮聯(lián)用對鮑曼不動桿菌的FIC指數(shù)分布構(gòu)成比

3 討論

ABA廣泛分布于自然界和醫(yī)院環(huán)境中，是引起嚴(yán)重致死性院內(nèi)感染的重要病原菌[5]。由于近年來抗生素的大量使用或濫用，導(dǎo)致多重耐藥甚至泛耐藥ABA的大量出現(xiàn)，已成為臨床治療面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，引起了醫(yī)學(xué)界高度重視[6]。從我國國家細菌耐藥性監(jiān)測中心可以了解到[7]，2004～2005年與2009年ABA對亞胺培南敏感率由65.1%下降至60.6%，對美羅培南敏感率由56.8%下降至55.5%，截止2009年全國12所醫(yī)院（MDR-ABA）已經(jīng)達到47.7%。因此，在缺乏安全有效的單一抗菌藥物治療之前，聯(lián)合用藥成為控制和減少耐藥菌株產(chǎn)生的有效手段[8]。

大蒜素是一種天然抗菌藥物， 常被作為食療及中藥治病。具有一定的抑制病原菌和真菌的作用，生物學(xué)性能良好，刺激性小，無毒副作用，無抗原性，揮發(fā)性大[9]?，F(xiàn)代研究表明，抗菌機制可能是由于其參與了氧化應(yīng)激參反應(yīng)，且大蒜中含有蒜酶、過氧化物酶、磷酸醋酶以及一些水解酶，對細菌有氧化和水解作用[10-12]。大蒜素還能特異性地抑制其他細菌的酶，如醋酸激酶和磷酸轉(zhuǎn)乙酰-輔酶A合成酶[3]。

最低抑菌濃度指藥物抑制細胞生長所需要的最低濃度，是測量抗菌藥物抗菌活性大小的一個指標(biāo)，最低抑菌濃度的大小與細菌對抗菌藥物的敏感度高低呈負相關(guān)，即最低抑菌濃度值越小，細菌對該抗菌藥物的敏感度越高，一般用MIC50及MIC90值評價抗菌效果。

大蒜素是蒜氨酸經(jīng)蒜酶裂解后生成并發(fā)揮活性作用[13]，具有廣譜抗菌的活性。既往研究表明[13～15]，大蒜素對大腸桿菌，沙門菌，金黃色葡萄球菌鏈球菌，克雷伯菌，變形桿菌，芽孢桿菌等均有抗菌作用，但其對ABA尤其是MDR-ABA是否具有抗菌活性，目前尚未見文獻報道。通過本研究我們發(fā)現(xiàn)，大蒜素與頭孢哌酮聯(lián)用后，能顯著降低頭孢哌酮的MIC值，尤其是MDR-ABA，能夠使其MIC值降到臨床推薦使用劑量之內(nèi)。大蒜素作為植物性天然廣譜抗生素，可以作為感染性疾病治療中的一種首要的候選藥物，是一種值得在臨床推廣使用的新型藥物，但對其在體內(nèi)ABA的作用機制有待進一步研究。

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（收稿日期：2013-05-14）