馬蓮鞍的化學成分研究

【摘要】 目的：對馬蓮鞍根75%乙醇提取物的大孔樹脂柱60%乙醇洗脫物進行化學成分研究。方法：利用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、制備液相等分離手段進行化學成分的分離，再通過核磁共振波譜法確定其化學結(jié)構(gòu)。結(jié)果：經(jīng)分離得到3個化合物均為白色粉末；核磁共振波譜圖，確定其為強心苷類化合物，分別為16-O-acetylperiplogenin （1），periplogenin 3-O-β-D-digitoxoside （2），digitoxigenin gentiobioside （3），其中，化合物1為種內(nèi)首分。結(jié)論：本方法對馬蓮鞍的化學成分研究具有較好的應(yīng)用價值。能應(yīng)用于馬蓮鞍的進一步開發(fā)。

【關(guān)鍵詞】 馬蓮鞍； 化學成分； 提取分離； 結(jié)構(gòu)鑒定

Chemical Constituents of the Malian Saddle/HU Jing-jing，WANG Zhi-hao，GAO Guo-qi，et al.//Medical Innovation of China，2013，10（26）：142-144

【Abstract】 Objective： To study Malian saddle 75% ethanol extract of the root macroporous resin column 60% ethanol elution the chemical constituents. Method： Used such as silica gel Column chromatography， ODS column chromatography and preparative high performance liquid separated means to separate the chemical components， and then by NMR determined its chemical structure. Result： The isolated three white powder compounds； NMR chart determine if it was a cardiac glycosides. The three compounds were 6-O-acetylperiplogenin （1）， periplogenin 3-O-β-D-digitoxoside （2）， digitoxigenin gentiobioside （3）， where in the compound 1 was a species within the first minute. Conclusion： The method Malian chemical constituents of the saddle has a good application value. Can be applied to the further development of Malian saddle

【Key words】 Malian saddle； Chemical composition； Extraction； Structure identification

First-author’s address：Jilin Jichun Pharmaceutical Co.， LTD，Siping 136504，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2013.26.069

馬蓮鞍（Streptocaulon griffithii）隸屬于蘿藦科（Asclepia-daceae）杠柳亞科（Subfam Periplocoideae K. Schum.）馬蓮鞍屬（Streptocaulon Weight et Am）植物[1]，生于山野坡地、山谷疏林中或路旁灌木叢中。在我國主產(chǎn)于廣西，貴州、云南等地[2]。馬蓮鞍作為傣藥的常用藥材，用于治療痢疾、濕熱腹瀉、心胃氣痛、感冒發(fā)熱、慢性胃炎、跌打損傷等多種病癥[3]。相關(guān)研究報道表明，其乙醇提取浸膏經(jīng)高通量篩選，結(jié)果是中等及大極性部分對α-葡萄糖苷酶抑制劑（針對治療糖尿?。┘?-脂氧合酶（針對治療哮喘及過敏性炎癥），均表現(xiàn)出了較好的活性[4]。

馬蓮鞍的化學成分主要有強心苷類、三萜類、甾醇類及半萜類等，其中強心苷類化合物為見于文獻報道最多的化合物。本文對該屬植物馬蓮鞍75%乙醇提取物的大孔樹脂柱60%乙醇洗脫物的化學成分進行了研究[5]。

1 馬蓮鞍60%乙醇洗脫部位的化學成分分離

對馬蓮鞍75%乙醇提取物經(jīng)過大孔吸附樹脂柱富集得到的60%乙醇洗脫部位（圖1）的化學成分進行了研究，利用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、制備液相等分離手段[6]，從中分離得到了3個化合物，采用核磁共振波譜法確定了其化學結(jié)構(gòu)，分別為：16-O-acetylperiplogenin （1）， periplogenin 3-O-β-D-digitoxoside （2），digitoxigenin gentiobioside （3），其中，化合物1為種內(nèi)首分。

1.1 儀器與材料 儀器：核磁共振儀：Brucker ARX-300 MHz型超導核磁共振儀（TMS內(nèi)標）；液相色譜儀：Shimadzu LC-10AT VP （SPD-10AVP UV-VIS detector）；色譜數(shù)據(jù)工作站：N2000（浙江大學智能信息工程研究所）；分析色譜柱：Kromasil 5μC18，250 mm×4.6 mm；制備色譜柱：Kromasil 5μC18，250 mm×10 mm。試劑：NMR用氘代試劑，北京騰達遠科技有限公司產(chǎn)品（美國CIL產(chǎn)品，國內(nèi)分裝）；HPLC所用均為色譜純，二次重蒸水自制，其它試劑均為分析純；凝膠：Sephadex LH-20；大孔吸附樹脂：HPD-100型（天津海光化工有限公司）；柱層析硅膠（100～200目，200～300目）與制備用硅膠GF254：青島海洋化工廠產(chǎn)品。

1.2 分離流程 馬蓮鞍根30 kg，75%乙醇加熱回流提取，提取物濃縮至無醇味，調(diào)密度1.07，上樣于HPD100大孔吸附樹脂柱，分別以水、30%乙醇、60%乙醇洗脫，得到60%乙醇洗脫物（315 g）上樣于硅膠柱色譜，以石油醚：乙酸乙酯（5：1）、（2：1）、（1：1），二氯甲烷：甲醇（30：1）、（20：1）、（10：1）、（5：1）、（1：1）梯度洗脫。二氯甲烷：甲醇30：1洗脫物經(jīng)過硅膠柱層析，二氯甲烷：甲醇（25：1）、（23：1）、（20：1）、（18：1）、（10：1）洗脫得到5個餾分。

Fr.1經(jīng)過硅膠柱層析，石油醚：乙酸乙酯1：4洗脫后，經(jīng)開放ODS反相柱層析，甲醇：水（40：60）洗脫物經(jīng)高效液相制備，甲醇：水（55：45）為流動相，得到化合物1（6 mg）。

Fr.2經(jīng)過硅膠柱層析，石油醚：丙酮（1：1）洗脫物，經(jīng)高效液相制備，以甲醇：水（60：40）為流動相，得到化合物2（3 mg）。

Fr.3依次經(jīng)過硅膠柱層析（二氯甲烷：甲醇8：1）、開放ODS反相柱層析（甲醇：水60：40）、硅膠柱層析（乙酸乙酯：甲醇5：1）、高效液相制備（甲醇：水50：50）得到化合物3（4 mg）。

2 結(jié)構(gòu)解析與鑒定

2.1 結(jié)構(gòu)解析 化合物1為白色粉末。Kedde試劑TLC顯色為紫紅色，提示其可能為含有不飽和五元內(nèi)酯環(huán)，為強心苷類化合物。1H-NMR中，可見H5.97（1H，s），H4.98（1H，d，J=18.0），H4.97（1H，d，J=18.0），這三組信號指示該化合物為甲型強心苷。H4.13（1H，brs），H5.46（1H，td，J=2.4，9Hz）處的質(zhì)子信號，推測其為連氧次甲基氫信號。H0.94（6H，s）推測為18、19位兩個甲基氫信號。在13C-NMR中，共給出25個碳信號，C85.7，77.0，76.8，70.0為4個連氧碳信號。C177.6，171.9，122.7，78.0為不飽和五元內(nèi)酯環(huán)的碳信號。C172.5，21.3，H1.94（3H，s）推測為一個乙?；盘?。與periplogenin相比較，其主要差異在于C-15，C-16，C-17，C-20，C-22的化學位移，推測16位的碳被羥基取代且羥基發(fā)生乙?；率笴-15，C-16，C-17的化學位移向低場移動。

與文獻[7]對比后，上述核磁數(shù)據(jù)與16-O-acetylperiplogenin基本一致，故鑒定化合物1的結(jié)構(gòu)為16-O-acetylperiplogenin。

化合物2為白色粉末。Kedde試劑TLC顯色為紫紅色，提示其可能為強心苷類化合物。1H-NMR譜數(shù)據(jù)H5.88，H4.92和H4.80，指示化合物2為甲型強心苷，H3.96處推測為一個連氧次甲基質(zhì)子信號，H4.92（d，J=9.3）為糖端基質(zhì)子信號，提示連接一個糖。在13C-NMR中，C96.5，38.1，68.0，72.8，69.5，18.1與文獻對比后歸屬為洋地黃毒糖。

與文獻[8]對比后，化合物2的波譜數(shù)據(jù)與periplogenin 3-O-β-digitoxoside基本一致，故鑒定其結(jié)構(gòu)為periplogenin 3-O-β-digitoxoside。

化合物3為白色粉末。Kedde試劑顯色為紫紅色，提示其可能為強心苷類化合物。1H-NMR譜可見信號H5.90，H4.97和H5.03，指示化合物3為甲型強心苷，H4.08處有一個質(zhì)子信號，推測為3位連氧次甲基氫信號。H4.31（d，J=7.8）和H4.39（d，J=7.7）處出現(xiàn)為兩個糖端基質(zhì)子信號，提示該化合物連有兩個糖。在13C-NMR中，共給出35個碳信號，C104.8，75.1，78.0，71.6，78.0，62.8和C102.9，75.1，78.1，71.6，77.1，69.7為兩個葡萄糖上的碳信號，從C69.7發(fā)生7ppm苷化位移推測兩個葡萄糖的連接順序為1→6連接。

上述波譜數(shù)據(jù)與文獻[9]對比后，與digitoxigenin gentiobioside基本一致，故鑒定化合物3的結(jié)構(gòu)為digitoxigenin gentiobioside。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù) （1）化合物1 16-O-acetylperiplogenin白色粉末。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）：H5.98（1H，s，H-22），H4.98（1H，d，J=18.0 Hz，H-21），H4.97（1H，d，J=18.0 Hz，H-21），H2.73（1H，m，H-17），H0.93（3H，s，H-19），H0.94（3H，s，H-18），H4.13（1H，m，H-3），H5.46（1H，td，J=2.4，9Hz，H-16），H1.94（3H，s，CH3），13C-NMR。

（2）化合物2 Periplogenin 3-O-β-digitoxoside白色粉末。1H-NMR（CDCl3，600MHz）：H5.88（1H，s，H-22），H4.92（1H，dd，J=18.0 Hz，1.8 Hz，H-21），4.80（1H，dd，J=17.9 Hz，1.8 Hz，H-21），H2.79（1H，m，H-17），H0.93（3H，s，H-19），H0.88（3H，s，H-18），H3.96（1H，m，H-3），H4.92（1H，d，J=9.3 Hz，H-1’），13C-NMR。

（3）化合物3 Digitoxigenin gentiobioside白色粉末。1H-NMR（CD3OD，300MHz）：H5.90（1H，s，H-22），H 4.97（1H，dd，J=18.0 Hz，1.4 Hz，H-21），5.03（1H，dd，J=18.0 Hz，1.4 Hz，H-21），H2.79（1H，m，H-17），H0.96（3H，s，H-19），H0.88（3H，s，H-18），H4.08（1H，m，H-3），H4.31（1H，d，J=7.8 Hz，H-1’），H4.39（1H，d，J=7.7 Hz，H-1’’），13C-NMR。

3 結(jié)果

本文對馬蓮鞍（30 Kg）經(jīng)75%乙醇提取后，采用大孔吸附樹脂進行洗脫，其中60%乙醇洗脫部分經(jīng)分離得到3個化合物，應(yīng)用核磁共振波譜法進行結(jié)構(gòu)確證，確定其為強心苷類化合物，分別為16-O-acetylperiplogenin（1），periplogenin 3-O-β-D-digitoxoside（2），digitoxigenin gentiobioside（3）， 其中，化合物1為種內(nèi)首分。

4 討論

馬蓮鞍隸屬蘿藦科杠柳亞科馬蓮鞍屬植物，近年來的研究表明，馬蓮鞍屬植物具有良好的多方面藥理活性，具有廣闊的開發(fā)前景[10]。而目前對該植物進行研究的相關(guān)報道較少，因此對該植物進行系統(tǒng)的化學成分研究具有十分重要的意義。

馬蓮鞍的化學成分主要有強心苷類、三萜類、甾醇類及半萜類等[11]。其中強心苷類化合物為見于文獻報道最多的化合物。

本文應(yīng)用硅膠色譜柱、ODS色譜柱等通過梯度洗脫進行分離，通過核磁共振圖譜進行分析，Kedde試劑TLC顯色為紫紅色，提示其可能為強心苷類化合物。并進行了歸屬，與文獻對比后確定了化學結(jié)構(gòu)。

馬蓮鞍作為傣藥的常用藥材[12]，用于治療痢疾、濕熱腹瀉、心胃氣痛、感冒發(fā)熱、慢性胃炎、跌打損傷等多種病癥[13]。本文對該屬植物馬蓮鞍75%乙醇提取物的大孔樹脂柱60%乙醇洗脫物進行了化學成分的分離和結(jié)構(gòu)分析，方法準確、可靠，為馬蓮鞍的進一步研究提供依據(jù)。

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（本文編輯：陳丹云）