正交實驗優(yōu)選退黃口服液提取工藝

【摘要】 目的：優(yōu)選退黃口服液的提取工藝。方法：以芍藥苷的含量及浸膏得率為考察指標，以加水量（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）為主要影響因素，每因素設3個水平，用L9（34）正交表進行正交試驗。結果：退黃口服液的最佳提取工藝為：加10倍量水回流提取3次，每次l h。結論：該提取工藝設計合理，結果可靠，適于退黃口服液的提取。

【關鍵詞】 退黃口服液； 正交實驗； 提取工藝； 芍藥苷

Optimization of Extraction Technology for Tuihuang Oral Liquid by Orthogonal Test/CAI Jun.//Medical Innovation of China，2013，10（26）：128-130

【Abstract】 Objective：To optimize the extraction technology for Tuihuang oral liquid.Method：The extraction conditions were optimized by L9（34） orthogonal test，with the solvent volume，extraction time and extraction times as the influencing factors，and each factor set three levels，the content of the Paeoniflorin and the extraction rate were used as the evaluation indexes.Result：The optimal extraction conditions of Tuihuang oral liquid were：refluxing extraction for 3 times and 1h each time with 10-fold amount of water.Conclusion：The extraction technology is reasonable，reliable and suitable for the extraction of Tuihuang oral liquid.

【Key words】 Tuihuang oral liquid； Orthogonal test； Extraction technology； Paeoniflorin

First-author’s address：The Ninth Hospital of Nanchang City，Nanchang 330002，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2013.26.063

退黃口服液是本院的院內(nèi)制劑，由本院多名中醫(yī)在退黃古方基礎上，并依據(jù)多年臨床經(jīng)驗研制而成，處方由赤芍、金錢草、雞骨草、白馬骨、枳殼、草河車、丹參、紫金牛等中藥組成，具有活血退黃、涼血清肝之功效，臨床主要用于急、慢性肝炎等的治療。為了合理制定退黃口服液的提取工藝，根據(jù)處方中藥物所含有效成分的理化性質和藥理作用，結合中醫(yī)臨床用藥的特點，采用正交試驗法，對退黃口服液的提取工藝進行了研究，現(xiàn)報告如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-10ADVP高效液相色譜儀，島津SPD-10AVP紫外檢測器，HW色譜工作站（日本島津公司）；EPED-1OTF型超純水機機（南京易普易達科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試藥 芍藥苷（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：110736-200814）；甲醇和乙腈為色譜純（美國Tedia公司）；水為自制超純水；赤芍等中藥材購自江西省藥材公司，經(jīng)鑒定均符合2010年版《中華人民共和國藥典》各藥材項下規(guī)定的標準，其余試劑均為分析純。

2 結果

2.1 正交實驗設計 加水量（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）為主要影響因素，每因素設3個水平，用L9（34）正交表進行正交試驗，見表1。提取效果以處方中赤芍所含的有效成分芍藥苷的含量及浸膏得率為指標，并按以上兩指標的權重系數(shù)分別為80%和20%進行綜合加權評分[1-3]。

表1 正交試驗因素水平表

因素

水平加水量（倍）

A提取時間（h）

B提取次（次）C空白

D

18111

2101.522

312233

2.2 芍藥苷含量測定

2.2.1 色譜條件 AichromBond-AQ-C18色譜柱（4.6 mm×

150 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.1%醋酸水（25：75），流速1 ml/min，檢測波長為230 nm，柱溫30 ℃，進樣量10 μl[4-6]。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的芍藥苷對照品13.175 mg，置25 ml容量瓶中，加適量甲醇溶解，再加甲醇至刻度制成濃度為0.527 mg/ml的對照品溶液，搖勻，備用。

2.2.3 供試品溶液的制備 按處方量精密稱取處方中各味中藥，按照正交試驗設計的因素參數(shù)（表2）進行試驗，回流提取，過濾，合并濾液，濃縮至100 ml，精密吸取濃縮液1 ml置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加適量甲醇溶解過濾至10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，備用。

2.2.4 含量測定 分別精密吸取2.2.2項下的對照品溶液與2.2.3項下的9個供試品溶液各10 μl注入高效液相色譜儀，測定芍藥苷的含量，采用外標兩點法定量，結果見表2。

2.3 浸膏得率的測定 精密吸取2.2.3項下的9個供試品溶液各10 ml置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥箱中干燥3 h，取出，置干燥器中冷卻30 min后迅速精密稱重，計算浸膏得率，結果見表2。

2.4 直觀分析 以芍藥苷含量和浸膏得率的綜合評分為評價指標，根據(jù)表2中極差值R大小，可以得出各因素影響程度依次是C>A>B，最佳提取方案為A2B2C3。

2.5 方差分析 方差分析結果（見表3）表明：加水量（A）和提取次數(shù)（C）有顯著性影響（P<0.05），而提取時間（B）的影響無顯著差異，另有文獻報道隨煎煮時間延長，芍藥苷的含量會降低[8]，同時為節(jié)約能源和時間，提取時間采用1 h，因此，綜合3種因素對芍藥苷含量和浸膏得率的影響，確定A2B1C3為最佳提取工藝，即以10倍量水提取回流3次，1 h/次。

表3 方差分析表

誤差來源離差平方和自由度方差F值P值

A114.96257.4823.28<0.05

B3.0921.540.62

C187.85293.9238.03<0.05

誤差（D）4.9422.47

2.6 驗證試驗 按照最佳工藝條件進行3批驗證試驗，以芍藥苷的含量和浸膏得率為評價指標，結果見表4。結果可知，該工藝條件基本穩(wěn)定、可行、重復性強。

表4 驗證試驗測定結果

序號出固率（%）RSD（%）芍藥苷含量（mg/g）RSD（%）

126.211.29 0.502.15

225.54 0.52

325.89 0.50

3 討論

3.1 指標參數(shù)的設定 該制劑含有多味中藥，成分較為復雜，故選擇浸膏得率作為考察指標之一；而赤芍作為方中主藥，具有清熱涼血，散瘀止痛和清肝火的功效，其主要活性成分為芍藥苷，現(xiàn)代藥理學研究表明芍藥苷具有一定的保肝退黃作用[9-10]，故選擇芍藥苷作為另一考擦指標。

3.2 評分方法的確定 對于正交試驗結果的評價一般有兩種方法，即綜合加權評分法和綜合平衡法，由于本試驗設定了芍藥苷含量和浸膏得率兩個考察指標，故采用了綜合加權評分法，該方法可以兼顧各項指標，綜合起來評出分數(shù)，以各號試驗綜合得分的多少評價試驗結果的好壞，可化多指標為單指標進行分析，簡單方便。

3.3 各指標權重系數(shù)的確定 多指標成分綜合評價優(yōu)選中藥提取工藝，應該結合各指標成分對試驗結果影響的重要性來確定指標成分在綜合加權評分法中的權重系數(shù)[11]。根據(jù)本試驗的研究目的，處方中有效成分芍藥苷的含量對提工藝的影響更重要，故評分時設定浸膏得率和芍藥苷含量的權重分別占綜合評分的20%和80%進行方差分析，以優(yōu)選出更具科學性和合理性的提取工藝。

3.4 提取工藝的確定 通過對浸膏得率和芍藥苷含量綜合加權評分的方差分析，并從生產(chǎn)角度考慮，確定其最佳提取工藝為以10倍量水提取回流3次，每次1 h。并以此工藝進行3批驗證試驗，兩項指標重復性好，穩(wěn)定可靠，具有較高的應用價值。

參考文獻

[1]安玉秀，王克東.正交實驗優(yōu)選赤芍水煎提取工藝[J].齊魯藥事，2005，24（9）：561-562.

[2]李霞，梁惠珍，門九章.正交試驗優(yōu)選雄芍顆粒的水提取工藝[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（5）：40-41.

[3]徐先祥，周麗，馬燕，等.正交實驗優(yōu)選赤芍提取工藝研究[J].安徽中醫(yī)學院學報，2008，27（5）：41-43.

[4]潘萍，潘金火.康媛顆粒質量標準研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14（10）：42-44

[5]何石蘭，洪松彬.高效液相色譜法測定赤芍中芍藥苷的含量[J].醫(yī)學信息：上旬刊，2010，23（7）：2342-2343.

[6]閆寒，聶穎蘭，郭娜，等.HPLC測定涼血解毒膠囊中芍藥苷含量[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2013，20（3）：60-61.

[7]張玲昂，徐麗娜，顧騰飛.正交試驗法優(yōu)選咽炎清口服液提取工藝[J].中國藥師，2013，16（2）：249-251.

[8]李淑芝，王玉芝，郭亞健，等.不同煎煮條件對芍藥苷煎出量的影響[J].中成藥，1999，21（3）：115-116.

[9]盧丹.赤芍保肝退黃藥效物質基礎研究[D].南京中醫(yī)藥大學，2012.

[10]羅琳，吳鋒，竇志華，等.仇文倩芍藥苷對膽汁淤積肝損傷保護作用機制研究[J].南通大學學報（醫(yī)學版），2011，31（6）：450-452.

[11]王勇，魏娜，徐爽，等.多指標正交試驗法優(yōu)選酸棗仁藥材水提取工藝[J].海南醫(yī)學院學報，2011，17（11）：1452-1456.

（收稿日期：2013-06-26） （本文編輯：歐麗）