大斑芫菁揮發(fā)性成分的氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用分析

摘要：采用水蒸氣蒸餾法提取大斑芫菁（Mylabris phalerata Pallas）的揮發(fā)性成分，并采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)其進(jìn)行了分析鑒定，旨在為大斑芫菁的綜合利用提供理論依據(jù)。從大斑芫菁中共檢出86種揮發(fā)性成分，并鑒定出其中的41種， 以醇、醛、酮、酸類物質(zhì)居多。其中相對(duì)百分含量較高的有苯乙醛（4.07%）、油酸（3.21%）、1，13-十四碳二烯（2.22%）、芳樟醇（1.70%）、香葉基丙酮（1.64%）。

關(guān)鍵詞：大斑芫菁（Mylabris phalerata Pallas）；揮發(fā)性成分；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

中圖分類號(hào)：O657.63；S433.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）13-3142-03

芫菁屬昆蟲(chóng)綱鞘翅目芫菁科（Mylabris）昆蟲(chóng)，中國(guó)有150余種，目前中藥中常用的斑蝥種類為大斑芫菁（Mylabris phalerata Pallas），或稱南方大斑蝥的干燥體以及黃黑小斑蝥（Mylabris cichorii Linnaeus）的干燥體。大斑芫菁主產(chǎn)長(zhǎng)江流域及以南各省區(qū)，貴州省是大斑芫菁的主產(chǎn)區(qū)之一，性辛、熱；有劇毒；歸肝、胃、腎經(jīng)；具有破結(jié)攻毒、除血積、利尿的功能[1]，是一種藥用價(jià)值極高的昆蟲(chóng)，已經(jīng)成為抗腫瘤的重要中藥材[2，3]。大斑芫菁體內(nèi)具有多種抗癌有效物質(zhì)，其分子量小，具揮發(fā)性，代表物質(zhì)為斑蝥素（Cantharidin）及其衍生物[4，5]，可治療原發(fā)性肝癌、賁門(mén)癌、喉癌、胃癌、食道癌、消化道腫瘤等癥[6-8]。為了比較全面了解大斑芫菁中揮發(fā)性物質(zhì)的成分組成，對(duì)貴州產(chǎn)大斑芫菁的揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行了氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）分析和鑒定，為更好地利用大斑芫菁這一特色藥用昆蟲(chóng)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

大斑芫菁于2009年8月購(gòu)自貴州省羅甸縣，經(jīng)遵義醫(yī)學(xué)院李曉飛副教授鑒定為大斑芫菁。

1.2 儀器與試劑

6890-5973N型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；AL204型電子天平（萬(wàn)分之一，梅特勒-托利多公司）；揮發(fā)油測(cè)定器；無(wú)水硫酸鈉、正己烷均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 揮發(fā)油的提取 稱取100 g大斑芫菁干燥蟲(chóng)體全身，粉碎，過(guò)60目篩。過(guò)篩后的樣品于500 mL圓底燒瓶中，加入400 mL 去離子水，接上揮發(fā)油測(cè)定器，將圓底燒瓶置于電加熱套中，參照2010版藥典（一部）附錄對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行提取，提取時(shí)間為3 h，為減少揮發(fā)性物質(zhì)溶于水造成的損失，預(yù)先在測(cè)定器中加入5 mL正己烷， 以收集揮發(fā)性物質(zhì)。提取后正己烷層呈淡橙色，具特殊氣味。經(jīng)無(wú)水Na2SO4干燥后轉(zhuǎn)入具塞三角瓶中，4 ℃下保存待測(cè)。以0.45 μm微孔濾膜對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾，待測(cè)。

1.3.2 GC-MS 分析 氣相色譜條件：HP-5MS（5%苯取代甲基硅酮）色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；程序升溫，50 ℃保持5 min ， 以3 ℃/min升至150 ℃，以4 ℃/min升至230 ℃， 保持5 min；氣化室溫度260 ℃；載氣，高純He，流速1 mL/min；進(jìn)樣量1 μL；分流比20∶1。質(zhì)譜分析條件：離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃。電離方式：EI，電子能量70 eV；溶劑延遲4 min；質(zhì)量掃描范圍30～500 amu。

對(duì)所得樣品的總離子流圖用峰面積歸一化法計(jì)算各組分的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，對(duì)相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于0.02%的揮發(fā)油成分進(jìn)行積分并鑒定，對(duì)所含化學(xué)成分的質(zhì)譜圖利用Wiley、NIST05兩種質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行計(jì)算機(jī)檢索比對(duì)， 并進(jìn)行人工圖譜解析。

2 結(jié)果與分析

樣品經(jīng)氣相色譜分離并經(jīng)質(zhì)譜掃描后，共檢出大斑蕪菁揮發(fā)性化合物86種，其中41種成分經(jīng)過(guò)鑒定，其相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)之和為22.52%。揮發(fā)油的總離子流圖見(jiàn)圖1，鑒定結(jié)果見(jiàn)表1。

由圖1和表1可知，大斑芫菁的揮發(fā)性成分組成非常豐富，41種化合物以醇、醛、酮、酸4類物質(zhì)含量最多。其中有5種醇類物質(zhì)、9種醛類物質(zhì)、6種酮類物質(zhì)、5種酸類物質(zhì)。其他成分分別為2種醚類、3種烯類等。所鑒定成分的百分含量總和占可檢出成分的48.3%，鑒定種數(shù)占47.7%，仍有大量的微量成分僅僅通過(guò)質(zhì)譜還無(wú)法鑒定。在所鑒定的成分中，含量較高的成分有苯乙醛（4.07%）、油酸（3.21%）、1，13-十四碳二烯（2.22%）、芳樟醇（1.70%）、香葉基丙酮（1.64%）。

3 小結(jié)與討論

一直以來(lái)，人們研究斑蝥時(shí)主要針對(duì)其包含的斑蝥素及其衍生物，認(rèn)為斑蝥素是惟一的抗癌有效成分，而忽略了很多其他有用的物質(zhì)。但從民間的應(yīng)用中可以發(fā)現(xiàn)斑蝥中可利用的成分可能有多種，特別是所含的揮發(fā)性成分可能具有一定的效果。有人采用將斑蝥置于生雞蛋中并敷泥烤炙的方法，利用雞蛋吸附斑蝥的有效成分以治療早期肝癌，療效十分顯著?；诖耍治龊丸b定斑蝥的揮發(fā)性成分就顯得十分重要。在下一步研究中，我們將考察從大斑芫菁中提取的揮發(fā)性物質(zhì)是否具有抗癌活性，并尋找出相應(yīng)的活性物質(zhì)。

通過(guò)對(duì)大斑芫菁揮發(fā)性成分的分析鑒定及含量測(cè)定， 為綜合利用該藥用資源提供了科學(xué)依據(jù)。GC-MS聯(lián)用技術(shù)廣泛用于動(dòng)、植物揮發(fā)油、精油及低極性化合物的分析，用該方法分析大斑芫菁的揮發(fā)性成分快速且全面，是分析大斑芫菁揮發(fā)性成分的有效手段。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.233.

[2] 孫永浩，盧言平，宋慶江，等.復(fù)方斑蝥抑瘤膠囊配合化療治療中晚期胃癌30例[J].中醫(yī)雜志，2011，52（16）：1417-1418.

[3] 李麗娜，南克俊，張 茜.復(fù)方斑蝥注射液聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖與凋亡的影響[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2011，19（3）：438-440.

[4] 劉 沁，陳建偉，李 祥，等. HPLC法測(cè)定5個(gè)產(chǎn)地斑蝥藥材中斑蝥素的含量[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，17（5）：582-585.

[5] SHI Q H， WANG Y L， SONG H R， et al. Cantharidin and its analogues：anticancer and Ser/Thr protein phosphatase inhibitory activities[J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，2005，14（4）：250-256.

[6] 金 偉，王亞威，周宗祥，等.斑蝥素對(duì)HL260細(xì)胞和QGY7703細(xì)胞的作用研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2001，29（4）：42-43.

[7] 李曉飛，侯曉暉，陳祥盛.芫菁斑蝥素對(duì)喉癌細(xì)胞和胃癌細(xì)胞的抑制作用[J].昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)， 2009，52（9）：946-951.

[8] 安中原，王 正，趙 越.斑蝥素及其衍生物的抗腫瘤研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（1）：128-130.