網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔性腺發(fā)育的研究

摘要：對網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔（Monasteries albus）性腺發(fā)育進(jìn)行研究。結(jié)果表明，在網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下，黃鱔性腺發(fā)育過程可分為雌性、間性、雄性3個階段。卵巢發(fā)育分為Ⅰ～Ⅵ期；間性性腺發(fā)育分為間性Ⅰ期和間性Ⅱ期；精巢發(fā)育分為Ⅰ～Ⅵ期。各期性腺主要包含對應(yīng)時相的生殖細(xì)胞，也有其他時相生殖細(xì)胞存在，生殖細(xì)胞的發(fā)育速度并不一致。

關(guān)鍵詞：黃鱔（Monasteries albus）；網(wǎng)箱養(yǎng)殖；性腺發(fā)育

中圖分類號：S917.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）13-3095-04

黃鱔（Monasteries albus）是中國重要的經(jīng)濟(jì)魚類之一，因其肉味鮮美、營養(yǎng)價值高而深受廣大消費者歡迎。近年來由于過度捕撈而導(dǎo)致黃鱔資源瀕臨枯竭。為了解決苗種缺乏問題，黃鱔人工繁殖成了近年來研究的熱點。有些學(xué)者對野生和養(yǎng)殖池內(nèi)黃鱔性腺發(fā)育進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)了完整的性腺發(fā)育過程，并對其進(jìn)行了分期[1-8]。Brown等[9]、邴旭文等[8，10]認(rèn)為黃鱔在高密度群棲狀態(tài)下，受食物資源和所受空間的影響導(dǎo)致性腺常停止發(fā)育。目前還無人對網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔性腺發(fā)育進(jìn)行研究，本研究對網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔性腺發(fā)育過程進(jìn)行研究，以期在網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下獲得大量高質(zhì)量的黃鱔繁殖親本，為解決黃鱔人工繁殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)施概況

選取湖北省漢川市刁汊湖漁場池塘為試驗基地。該池塘呈長方形，池底平坦，水源充足，水質(zhì)清新，排灌方便，四周無高大的樹木。放養(yǎng)前每1 000 m2用225 kg生石灰干法清塘，然后暴曬7～10 d。網(wǎng)箱規(guī)格3.0 m×1.0 m×1.2 m和2.0 m×1.0 m×1.2 m，前者為30目、后者為60目聚乙烯無結(jié)節(jié)網(wǎng)片加工而成，用毛竹固定于池塘中，網(wǎng)箱底部距池底0.5 m，上口高出水面0.4 m，前者設(shè)置42個網(wǎng)箱，后者設(shè)置3個網(wǎng)箱，網(wǎng)箱之間的間距為1.0 m。放苗前15 d設(shè)置水花生作為黃鱔的棲息巢，水花生的種植面積為網(wǎng)箱的2/3左右。

1.2 試驗動物及分組

試驗黃鱔一部分購自湖北省漢川市刁汊湖周邊市場，選取規(guī)格一致、體格健壯的黃鱔1 440尾，體長25.2～38.5 cm，體重26.8～57.5 g；另一部分來自試驗網(wǎng)箱內(nèi)繁殖出的仔、幼鱔。

試驗分為兩組：一組是購自刁汊湖周邊市場的黃鱔，共42個網(wǎng)箱，每個網(wǎng)箱30尾黃鱔；另一組是試驗網(wǎng)箱內(nèi)繁殖出的仔、幼鱔，共3個網(wǎng)箱，每個網(wǎng)箱40尾黃鱔。

1.3 試驗飼料

飼料（表1）由魚粉、NP-90噴霧干燥血球蛋白粉、魷臟粉、豆粕粉、酵母粉、多維、多礦、淀粉（所有原料均由武漢高龍飼料有限公司提供）等配制而成，配制方法采用等能不等氮法（以魚粉、魷臟粉、酵母粉、豆粕作為蛋白源，配制成蛋白質(zhì)含量35%的飼料）。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗從2006年7月至2007年6月，每天下午6點左右投喂飼料1次，按體重的3%～5%將飼料投放于水草表面，具體投喂量根據(jù)天氣變化和實際攝食情況而定。投喂飼料后，每隔20 min觀察一次攝食情況，不夠則繼續(xù)加投，直至最后兩次觀察發(fā)現(xiàn)池內(nèi)飼料不再減少為止，此時認(rèn)為魚已飽食，然后取出殘餌烘干后稱重。每天早、中、晚各測量一次水溫，并觀察黃鱔活動情況。每周測量一次水體pH，每個月用滅毒靈對整個池塘消毒一次。

1.5 取樣并制作性腺切片

每月30日定時進(jìn)行取樣，從每個網(wǎng)箱隨機(jī)取出3尾黃鱔，取樣時在網(wǎng)箱投放誘捕黃鱔的籠子以避免黃鱔受傷。測量體長并稱重后進(jìn)行解剖取性腺，將性腺固定于Bouin氏液。制作常規(guī)石蠟切片進(jìn)行HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察并記錄結(jié)果。根據(jù)黃鱔性腺在不同時期的發(fā)育特點，結(jié)合顯微鏡觀察結(jié)果，對各樣品性腺進(jìn)行分期鑒定。

2 結(jié)果與分析

通過對黃鱔性腺切片觀察，網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔的性腺發(fā)育可分為雌性、間性和雄性3個階段。

2.1 雌性卵巢發(fā)育時期

根據(jù)雌性生殖細(xì)胞的發(fā)育情況，網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔雌性卵巢發(fā)育可分為6個時期：

Ⅰ期卵巢：多見于1～2月齡的仔、幼鱔。卵巢不明顯，接近透明，呈細(xì)線狀。細(xì)胞以Ⅰ時相卵母細(xì)胞為主，結(jié)締組織較少，卵母細(xì)胞外有一層很薄的濾泡細(xì)胞。細(xì)胞呈卵圓形，直徑僅為11～18 μm，細(xì)胞核可見，細(xì)胞質(zhì)很少。Ⅰ時相卵母細(xì)胞為處于卵原細(xì)胞階段或由卵原細(xì)胞向卵母細(xì)胞過渡階段（圖1A）。

Ⅱ期卵巢：多見于3～4月齡的幼鱔。卵巢乳白色，呈線狀。肉眼不見卵粒， 充滿Ⅱ時相母細(xì)胞。細(xì)胞呈卵圓形，直徑為120～280 μm，細(xì)胞體積較Ⅰ時相明顯增大，細(xì)胞核相應(yīng)增大，核仁數(shù)增加，靠近核膜內(nèi)側(cè)分布。細(xì)胞質(zhì)為嗜堿性，大部分卵母細(xì)胞外面有一層濾泡細(xì)胞（圖1B）。

Ⅲ期卵巢：多見于5～9月齡的幼鱔和已產(chǎn)卵的親鱔。卵巢呈棒狀，肉眼可看見淡黃色的小卵粒。卵巢內(nèi)有Ⅱ時相和Ⅲ時相卵母細(xì)胞，細(xì)胞呈卵圓形，直徑為270～490 μm。細(xì)胞質(zhì)為嗜堿性，含有豐富的細(xì)胞器和小卵黃泡，大部分核仁分布在核膜邊緣，部分核膜出現(xiàn)皺褶。大部分細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)內(nèi)外兩層濾泡膜（圖1C）。

Ⅳ期卵巢：多見于3～5月齡的幼鱔和已產(chǎn)卵的親鱔。肉眼可見大小不等的橙黃色、淡黃色卵粒。Ⅳ時相卵母細(xì)胞占較大比例，Ⅱ時相、Ⅲ時相卵母細(xì)胞也可見。細(xì)胞呈卵圓形，直徑為860～1 650 μm，細(xì)胞體積較Ⅲ時相明顯增大，卵黃顆粒較多，幾乎充滿核外空間。細(xì)胞質(zhì)為嗜堿性，多分布于核周圍和卵膜邊緣，細(xì)胞核的位置由中央向邊緣移動。細(xì)胞內(nèi)有內(nèi)外兩層濾泡膜，外層由扁平狀的濾泡細(xì)胞組成，內(nèi)層為顆粒狀濾泡細(xì)胞。Ⅳ時相卵母細(xì)胞為處于發(fā)育晚期的卵母細(xì)胞（圖1D）。

Ⅴ期卵巢：多見于5～8月齡的幼鱔和已產(chǎn)卵的親鱔。Ⅴ時相卵母細(xì)胞已經(jīng)排入卵巢包膜中，卵巢包膜里充滿橙黃色的大卵粒，擠壓黃鱔腹部即有成熟卵子流出，卵巢里Ⅱ時相、Ⅲ時相和Ⅳ時相卵母細(xì)胞均可見。細(xì)胞呈卵圓形，直徑為3 150～3 900 μm。細(xì)胞質(zhì)中充滿粗大卵黃顆粒，它們在成熟的過程中融合成塊狀，在細(xì)胞質(zhì)的邊緣仍有濾泡，卵子外只有一層增厚的放射膜包圍。此時卵粒已成熟離巢，游離在卵巢包膜內(nèi)。Ⅴ時相卵母細(xì)胞為處于發(fā)育轉(zhuǎn)折階段的卵母細(xì)胞（圖1E）。

Ⅵ期卵巢： 多見于5～8月齡產(chǎn)卵后的親鱔。為剛產(chǎn)過卵退化時期的卵巢，結(jié)構(gòu)較疏松。其中以已經(jīng)排出卵的空濾泡膜和敗育的卵母細(xì)胞為主，Ⅱ時相、Ⅲ時相、Ⅳ時相卵母細(xì)胞和未排出的Ⅴ時相卵母細(xì)胞有時也可見。細(xì)胞逐漸萎縮，部分細(xì)胞核膜溶解，核物質(zhì)散布于細(xì)胞質(zhì)中，液化的卵黃物質(zhì)呈團(tuán)塊狀分散于性腺囊腔內(nèi)（圖1F）。

2.2 間性性腺發(fā)育時期

黃鱔在排卵或產(chǎn)卵后，雌性生殖細(xì)胞逐漸敗育，與此同時原始精原細(xì)胞生長發(fā)育，進(jìn)入雌性生殖細(xì)胞和雄性生殖細(xì)胞共存的間性發(fā)育階段。根據(jù)性腺里這兩種生殖細(xì)胞的發(fā)育狀況，網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔的間性性腺發(fā)育可分為2個時期。

間性Ⅰ期：性腺呈白色長條狀，肉眼不見卵粒。性腺內(nèi)未見Ⅳ時相和敗育的卵母細(xì)胞，只有一些Ⅱ時相、Ⅲ時相卵母細(xì)胞以及部分濾泡細(xì)胞，卵母細(xì)胞的細(xì)胞器也較少，在性腺的結(jié)締組織中可觀察到少量的精原細(xì)胞（圖2A）。

間性Ⅱ期：性腺呈白色長條狀，肉眼不見卵粒。性腺內(nèi)只有少量Ⅱ時相卵母細(xì)胞，其細(xì)胞核已發(fā)生偏位，核膜不清晰，部分核仁解體或空泡化，有核仁外排現(xiàn)象。精原細(xì)胞發(fā)育形成精小囊，精小囊多分布在結(jié)締組織間隙中，有的精小囊內(nèi)的生精細(xì)胞已發(fā)育為初級精母細(xì)胞（圖2B）。

2.3 雄性精巢發(fā)育時期

根據(jù)雄性生殖細(xì)胞的發(fā)育情況，網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔的雄性精巢發(fā)育可分為6個時期：

Ⅰ期精巢：多見于1～2月齡，精小囊已開始發(fā)育，由精小囊組成的精小葉還比較小。精小囊內(nèi)以精原細(xì)胞為主，有的已發(fā)育為初級精母細(xì)胞，另外在精小葉之間還有部分結(jié)締組織（圖3A）。

Ⅱ期精巢：多見于3月齡，精小葉數(shù)量增多，同時直徑也增大，有些精小葉中出現(xiàn)小腔隙，精小葉內(nèi)除少量精原細(xì)胞外，主要為初級精母細(xì)胞（圖3B）。

Ⅲ期精巢： 多見于3～4月齡，精小葉數(shù)量較多，遍布于整個精巢，精原細(xì)胞多分布于精小葉邊緣，各精小葉間的結(jié)締組織中可看見微血管和部分細(xì)胞核；精巢內(nèi)出現(xiàn)少量小的管腔，精小葉中以初級精母細(xì)胞和次級精母細(xì)胞為主（圖3C）。

Ⅳ期精巢： 多見于4～5月齡，精小葉中初級精母細(xì)胞減少，次級精母細(xì)胞經(jīng)第二次成熟分裂發(fā)育為精子細(xì)胞（圖3D）。

Ⅴ期精巢： 多見于 5～6月齡，有些精小囊已經(jīng)發(fā)育成熟，它們之間的隔膜消失，形成大的管腔，成熟的精子聚集于管腔內(nèi)，但部分精小囊仍由精子細(xì)胞組成。精原細(xì)胞數(shù)量較少，零星分布于精小葉壁。同時精巢內(nèi)空腔增多，并且在這些空腔內(nèi)，大多數(shù)都可觀察到成熟精子（圖3E）。

Ⅵ期精巢： 多見于6月，為排精后精巢，精巢內(nèi)空腔較Ⅴ期減少，有的管腔中還殘存少量精子?？展芮凰闹艿墓鼙谏暇?xì)胞數(shù)目增多，有的已形成精小囊（圖3F）。

3 小結(jié)與討論

3.1 關(guān)于網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔的性腺發(fā)育及特點

本研究首次對網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔性腺發(fā)育進(jìn)行了研究，結(jié)果表明黃鱔性腺有著完整的發(fā)育過程，其發(fā)育正常，黃鱔的性腺發(fā)育有著明顯的性逆轉(zhuǎn)特征，可分為雌性、間性、雄性3個階段。

3.2 人工養(yǎng)殖密度對性腺發(fā)育的影響

網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下黃鱔屬于高密度群棲環(huán)境，其性腺有著完整的發(fā)育過程，并沒有停止發(fā)育，在繁殖期其性腺也能夠正常發(fā)育成熟，表明網(wǎng)箱養(yǎng)殖條件下高密度并沒有成為黃鱔性腺發(fā)育的制約因子。這一研究結(jié)果為解決黃鱔人工繁殖的瓶頸問題，即獲得大批量、高質(zhì)量的黃鱔成熟親本提供了極其寶貴的科學(xué)參考資料。

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