氣相色譜法檢測月餅中的脫氫乙酸

孔祥建，馮亮，馮福所，曾思英，盧婷婷

（遂寧市產品質量監(jiān)督檢驗所，四川遂寧 629000）

脫氫乙酸是國家批準使用的人工合成防腐劑，近年來被廣泛使用。脫氫乙酸是一種廣譜、抑菌力極強的防霉防腐劑，對霉菌、酵母菌、細菌有較強的抑制能力［1］，但對人和動物存在一定的毒害性，其添加必須在規(guī)定范圍內按規(guī)定限量使用。GB 2760-2011《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》中規(guī)定脫氫乙酸用于月餅中的最大使用量為0.5 g／kg［2］，然而目前存在企業(yè)違規(guī)超標使用的現(xiàn)象，因此對月餅中的脫氫乙酸進行準確、快速的定量檢測非常重要。

食品中脫氫乙酸的檢測方法一般依據(jù)國家標準GB 5009.121-2003，樣品經過有機相、無機相反復萃取凈化后用氣相色譜測定［3］。由于該標準僅適用于果汁、腐乳、醬菜，在處理月餅等高糖、高脂、高蛋白含量的復雜基質的樣品時，乙醚提取過程的乳化現(xiàn)象特別嚴重，影響了提取率，回收率較低；而且采用填充柱作為分離柱，其柱效低，靈敏度不高，檢出限、分離效果和重現(xiàn)性都不理想。因此，建立一套適合月餅等復雜基質食品中脫氫乙酸的氣相色譜檢測方法，對于提升食品質量監(jiān)督檢驗能力，規(guī)范食品生產秩序具有重要的意義。

筆者以月餅為試材，針對乙醚提取過程中乳化嚴重的問題，改進了樣品前處理方法，選用Rtx-5弱極性毛細管柱作為分離柱［4］，優(yōu)化GC色譜條件，建立了毛細管柱氣相色譜法測定月餅等復雜基質食品中脫氫乙酸的方法，并對所建立的檢測方法進行了系統(tǒng)的方法驗證。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：GC-2010 Plus型，日本島津制作所；

自動進樣器：AOC-20i+S型，日本島津制作所；

乙醚、丙酮：重蒸；

無水硫酸鈉、氯化鈉：分析純；

硫酸：10%（體積分數(shù)）；

硫酸鋅溶液：120 g／L；

氫氧化鈉溶液：20 g／L；

脫氫乙酸標準品：純度大于99.5%，國家標準物質中心；

實驗用水為三級水。

1.2 試樣制備與提取

稱取5.0 g充分磨碎的均勻試樣于100 mL容量瓶中，加入20 mL蒸餾水，5 mL硫酸鋅溶液，搖勻，用氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至7～8，加水定容至刻度，過濾。準確吸取20.0 mL濾液于100 mL比色管中，加氯化鈉至飽和，用硫酸調節(jié)pH值至酸性，分別用50，50，30 mL乙醚提取3次，靜置分層，用吸管轉移乙醚層，經無水硫酸鈉脫水后，收集乙醚于250 mL錐形瓶中，50℃水浴中濃縮至近干，氮吹除去殘留溶劑，用丙酮定容后供色譜測定。

1.3 色譜條件

色譜柱：Rtx-5毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm，美國Restek公司）；進樣量：0.5 μL；分流比：1∶40；進樣口溫度：240℃；線速度：25.0 mL／min；柱流量：0.95 mL／min；柱溫：50℃保持1 min，以15℃／min的速率升溫至230℃，保持2 min；檢測器：FID；檢測器溫度：240 ℃；尾吹：30.0 mL／min；H2流速：40 mL／min；空氣流速：400 mL／min。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

本實驗選擇弱極性Rtx-5毛細管柱，采用程序升溫，目標峰分離度良好，峰型較佳，保留時間在8.4 min左右。色譜條件見1.3，標樣氣相色譜圖見圖1。

2.2 改進樣品前處理對測定結果的影響

實驗分別采用本實驗方法和國標GB／T 5009.121-2003中的處理方法對月餅中脫氫乙酸的含量進行測定，結果見表1。由表1可以看出，采用本法測得的試樣含量高于國標法處理的試樣，且回收率明顯高于未進行沉淀蛋白處理的試樣，這說明經硫酸鋅試劑沉淀和過濾處理，可以有效減輕有機相萃取時出現(xiàn)的乳化現(xiàn)象，有利于萃取完全；本法中樣品提取過程處理簡單，回收率高，且節(jié)約了有機溶劑。

表1 樣品前處理對于回收率的影響

2.3 線性方程與線性范圍

將濃度分別為0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg／mL的脫氫乙酸標準溶液，按照上述色譜條件，進樣0.5 μL，進行GC分析，測定不同濃度脫氫乙酸的峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，結果見表2。

表2 標準溶液濃度與峰面積

2.4 檢出限與定量限

方法的檢出限［5］是指在通過某一分析方法全部測定過程后，被分析物產生的信號，能以95%置信度區(qū)別于空白樣品而被測定出來的最低濃度。以“最低濃度檢測結果+3倍標準差”作為檢出限。IUPAC定義定量限（LQD）為“當被測組分濃度能產生比空白足夠大的信號，這個信號能被良好操作實驗室在常規(guī)操作條件下以指定的置信水平定量檢出，這個濃度就是定量測定下限”，即可以“最低濃度檢測結果+10倍標準差”所對應的濃度作為定量限［7］。

本試驗將樣本溶液不斷稀釋，按照1.3色譜條件，進樣0.5 μL，進行GC分析，確定檢出限，直到目標物的峰高與基線噪音之比為2～3時［6］，連續(xù)重復測定9次，根據(jù)每次的積分峰面積，外標法計算其對應的濃度，計算標準差s，結果見表3。

表3 脫氫乙酸檢出限測定結果

本試驗以信噪比S／N=3計，經計算，檢出限為0.24 μg／mL，定量下限為0.32 μg／mL。

圖1 脫氫乙酸標樣氣相色譜圖（丙酮為溶劑）

以稱樣量5.0 g計，本方法檢測月餅中脫氫乙酸的檢出限約為4.8 mg／kg，可以滿足檢測需要［3］。

2.5 加標回收試驗

選取月餅樣品5份，以雙平行測定結果的平均值作為樣品中脫氫乙酸的實際含量，加入一定量標準品后，使其每份含標準物質0.2 g／kg，再以雙平行測定結果的平均值作為加標結果，計算加標回收率，檢測結果見表4。由表4可知，脫氫乙酸的回收率在87.9%～94.4%之間。

表4 脫氫乙酸加標回收率結果

2.6 精密度試驗

取樣品12份，加標樣使每份樣品含標準物質0.3 g／kg，分別按1.2的方法進行處理，各進樣0.5 μL進行GC分析，以外標法定量，結果見表5。由表5可知，測定結果的相對標準偏差為2.5%，說明該方法具有較高的精密度。

3 結論

選用Rtx-5弱極性毛細管柱測定月餅中的脫氫乙酸，通過優(yōu)化色譜條件，獲得了良好的峰型和分離度，建立了最佳GC測定條件；針對月餅基質復雜，蛋白、脂類、糖類含量高，改進了樣品提取及凈化方法，消除了乙醚提取過程中的乳化現(xiàn)象，提高了萃取效率。通過驗證，證實該方法可以準確地進行月餅等復雜基質中脫氫乙酸的定性、定量分析檢測，具有一定的應用推廣價值。

表5 方法精密度試驗結果

［1］陳小萍，龔劭剛.脫氫乙酸的合成與應用［J］.化工時刊，2005，19(4): 7-8.

［2］GB 2760-2011 食品添加劑使用標準［S］.

［3］GB／T 5009.121-2003 食品中脫氫乙酸的測定［S］.

［4］宗萬里.毛細管氣相色譜法測定肉制品中脫氫乙酸含量［J］.肉類研究，2012，26(3): 39-41.

［5］田強兵.分析化學中檢出限和測定下限的探討［J］.化學分析計量，2007，16(3): 72-73.

［6］張鵬翔.色譜分析中的檢出限和測定下限及其確定方法［J］.內蒙古科技與經濟，2009，184(6): 62-63.

［7］察冬梅.淺議靈敏度、檢出限和測定限［J］.大學化學，2011，26(4): 84-86.